日 内 分 泌 会 誌,(Folia
総
1057
Endocrino1.)68.1057∼1072.1992
説
成長 ホル モ ン分泌促進 因子 の遺伝子発現 な らびに分泌調節 宮崎医科大学第3内科 片
上
Regulation Hormone Hideki
秀
喜,松
倉
茂
of Growth Hormone—releasing Gene Expression and Secretion
KATAKAMI
and
Shigeru
MATSUKURA
Third Department of Medicine, Miyazaki MedicalCollege
Growth
hormone
hypophysiotropic regulates GI-RH
the synthesis genes
in
understanding
Recent
gene
species
neural
animal
and
sequences
GRH
content
hypothyroidism
in situ
Northern inhibits
blot analysis
The
hormone
single transcript which The latter
,
primarily
is further
hGRH(1-44)-NH2,
Treatment
on a subpopulation
into
signal
and
hypophysectomy,
with
arcuate
as tested
to conclude
feedback
Double and
SRIF binding
that
by
GH or SRIF
nucleus.
both axo-perikaryal
neurons.
and
neurons
in
regulation
of
effects of GH and IGFs on
peptide
a 108 amino and
to yield two equipotent
hGRH(1-40)-OH, 第68巻
in
at least in part by SRIF or GH.
GRH gene encodes
processed
by
of GRH-containing
possible
to inhibitory
the
of
difference
hypothalamus
of animals
and SRIF—containing
of the human
is cleaved
the regulation
GRH mRNA as well
caused
in the hypothalamic
is mediated
and as
The
from
limited
as well
in GRH mRNA levels
GRH and SRIF has shown
related
a
biosynthesis
to study
metabolism.
deficiency
It is therefore
GRH gene expression,
prepro-hGRH, pro-hGRH.
nucleus.
GRH
in hypothalamic
an increase
GRH-
Although
only
of the GRH gene.
in a decrease GH
are demonstrated
arcuate
GRH gene expression, hypothalamic
between
is
techniques
and rat GRH cDNAs
hybridization.
(SRIF),
somatotrophs. there
regulating
its
causes
for hypothalamic
mRNA
as
while
dwarfism
pituitary
an opportunity
well
hypothalamic
peptide , somatostatin
hybridization
specific regulation to result
or in situ
axo—- axonal connections
the hypothalamic
as
GRH gene expression
immunocytochemistry
GH receptor
have provided
secretion
secretion
or genetic
the increased
and
is a stimulatory
characterized,
mechanisms
PCR
tissue -
and
been
in
GH excess has been shown as
of GH in anterior have
in both mouse
has also suggested
(GRH)
an inhibitory
and hormonal
models
expression
5' -untranslated placenta
and secretion
progress
hGRF-transgenic
hormone
which , along with
several
of the
secretion.
GRH
(GH)-releasing
hormone
第10号
and
the
acid precursor,
remaining
peptide,
forms of the releasing
a carboxyl-terminal
peptide
1058
成 長 ホル モ ン分泌 促 進 因子 の遺 伝 子発 見 並 び に分 泌 調節(片 上,他1名)
(hGCTP)
of unknown
function.
hGRH-prohormone
into
Studies
that hGRH(1-40) -OH
is derived
has been found
in extrahypothalamic
and
forms
molecular
unanswered
until
plasma GRH, the
the
which
tract
GRH
in
Since
nomal
of a highly
human
pancreas
in
major
have
remained
immunoassay
for
mainly
molecular
as yet unidentified,
Gene expression,
GRH
the origin
blood is produced
three
and a hydrophobic, hormone,
enzyme
of
evidence
immunoreactive
in the blood, subjects
sensitive
its
the processing
and provide
degraded
that hGRH in the peripheral
and
hormone —releasing
Hypothalamic
and hGCTP,
sites and is rapidly
development
demonstrates
mice demonstrate
of hGRH
from hGRH(1-44)-NH2.
hGRH(1-44)NH2
Key words : Growth
forms
of circulating recent
gastrointestinal
hGRH(3-44)NH2,
in transgenic
both mature
by
forms,
form of hGRH.
Secretion,
control
は じめ に 下 垂 体 成 長 ホ ル モ ン(GH)分
泌 は 視 床 下 部 由 来 の 分 泌 促 進 作 用 を 有 す るGH分
H)1)2)と 抑 制 性 の ソ マ トス タ チ ン(SRIF)3)に と も に ペ プ チ ドの RHの
よ っ て 調 節 され て い る。 視 床 下 部GRHな
ら び にSRIF
一 次 構 造 な ら び に コー ドす る遺 伝 子 が 単 離 同 定 さ れ て い る4)∼7)。 現 在 ま で に,G
合 成 ・分 泌 は 中枢 神 経 系 を 介 す る種 々 の 神 経 刺 激 に影 響 さ れ ,さ
らに 末 梢 か らの フ ィー ドバ ッ
ク調 節 や 代 謝 性 調 節 を 受 げ る こ と も 明 ら か に さ れ て い る8)。最 近,組 のPromotorが
泌 促 進 因 子(GR
解 明 さ れ た こ と9),GRHmRNAの
織 特 異 的 なGRH構
造 遺伝 子
発 現 に 関 してin situ hybridization法
な らび に
Northern
blot解 析 法 な ど の 定 性 的 な ら び に 定 量 的 解 析 方 法 が 進 歩 した こ と10),hGRH-transgenic
mouseの
作 成 技 術 が確 立 した こ と11)など に よ り当 研 究 領 域 で の 進 歩 が 著 しい 。
本 稿 で は,現
在 ま で に 得 られ た 視 床 下 部GRHの
れ わ れ の 下 垂 体GHのnegative
feedbackに
遺 伝 子 発 現 と分 泌 調 節 に 関 す る研 究 成 果 を,わ
関 与 す る視 床 下 部 機 構 と末 梢 で のGRHの
代謝 に関す
る成 績 も交 え て 概 説 す る。 GRHの
遺伝 子構 造 と発現
従 来 の 遺 伝 子 構 造 の うち,exon で,続
遺 伝 子 は6つ のexon(exon 20Kbで (exon
1の さ らに 約10Kb上
流 域 に 新 しいexon(exon
い て マ ウ ス13)でも見 い だ さ れ た こ と よ り,図1に 1a,1b,2,3,4,5)と5つ
示 す よ う に,マ
のintronか
あ る 。 新 た に 見 い だ され たexonlaは
ラ ッ トGRH-1Kbの
流 域 数Kbの
間 の塩 基 配 列 に は途 中 の 相 同 性 の 低 い 約200bpを
%の 相 同 性 が 認 め ら れ る13)。これ ら の 上 流 域promotorに 基 配 列 は 認 め られ ず,転
ら構 成 さ れ,そ
写調 節 因子 の
はTATAやCAAT
一 つ で あ るPOU-domain蛋
ッ ト12)
の 大 き さは 約18∼
胎 盤 組 織 の み で 発 現 す るの に 対 して,従
1b)は 視 床 下 部 の み で 発 現 す る。 そ して,exonlaの5'上
の-860と
1a)が,ラ
ウ ス お よ び ラ ッ トGRHの
う ち,マ
来 のexon
1
ウ スGRH
除 い て,約83∼88 boxに
相 当 す る塩
白 質 の結 合 部 位 あ る い は そ れ に
近 似 した 塩 基 配 列 が認 め られ る。 そ して,組
織 特 異 的 なaltemative
部 で はnoncoding に よ り,マ
exon
promotorに
よ り,胎 盤 組 織 で はnoncoding
1bが 転 写 され る。 つ ぎ に,各
組 織 共 通 のcoding
ウ ス で は103個 の ア ミ ノ酸 か ら な るpreproGRH(-30-+73)[signal 第68巻
第10号
exon
exon2-5の
1a ,視 床 下 転 写 ・翻 訳
peptide ,N端
ぺ
日
プ チ ド:mGRH(1-42)OH,C端 (-30-+74)[signal
本
内
分
泌
学
会
雑
誌
1059
ペ プ チ ドGRH(44-73)]が,ラ peptide,N端
ッ トで は104個
ペ プ チ ド:rGRH(1-43)OH,C端
のprepro-GRH
ペ プ チ ドrGRH(45-74)]
が産 生 され る。
図1.マ
ウ ス,ラ
ッ トと ヒ トのGRH
genomic
DNAの
構 造 な ら び に ヒ トGRH
の 生 成 過 程 の 模 式 図.
一方
,ヒ
トhGRH遺
伝 子 は 第20番
だ 同 定 さ れ て い な い が,恐 床 下 部prepro 域 に は,真
GRHは
目の 染 色 体 上 に あ り,マ
ウ ス や ラ ッ トの よ うなexon
ら く,同 様 の 構 造 を 持 つ も の と考 え ら れ る 。 図1に 示 す よ うに,ヒ
マ ウ ス や ラ ッ トの 視 床 下 部prepro-GRHと
核 生 物 の 遺 伝 子 転 写 お よ びRNA
processingに
転 写 開 始 点 で あ るmRNAのcapping部
位 か ら-30bpお
び"CAT
列 が み られ る 。
名 付 け られ たDNA配
そ れ 以 外 に も,-23bpか ら れ て い る 。 一 方,マ
ら-109bpの
関 与 す る こ と が 知 ら れ て い る 一般 的 な
く と も そ の 高 い 相 同 性 が あ る13)。そ して,さ 450bpに
認 め ら れ る 。 そ れ 以 外 に も,マ
responsive
element),GRE(glucocorticoid
位 に 類 似 し た 塩 基 配 列 が 認 め られ,後
ト視 床 下 部GRHで
よ び-75bp上
流 域 に"TATA
塩 基 配 列 に マ ウ ス や ラ ッ トhGRHと86%の
ウ ス と ラ ッ トの 間 で は,マ
ト視
同 様 に,遺 伝 子 の 上 流 域 と下 流
特 長 を全 て 兼 ね 備 え て い る こ と が 明 らか に され て い る。 す な わ ち,ヒ
box"と
1aは 未
ウ ス 視 床 下 部GRHの
は,そ box"お
の よ
相 同 性 が認 め
上 流 域-452bpま
で は少 な
ら に 上 流 域 に 別 の"TATAbox"が,-245bpとウ ス 視 床 下 部GRHの regulatory
element)やAP-1な
で 述 べ る よ う に,視 第68巻
第10号
上 流 域 に はCRE(c'AMP
床 下 部GRHの
どの転写 因子 結合 部 遺 伝子 発 現調 節機 構 を
1060
成 長 ホル モ ン分 泌促 進 因 子 の遺 伝 子発 見 並 び に分 泌調 節(片 上,他1名)
理 解 す る う え で 興 味 深 い 。Poly(A)鎖
結 合 部 位 の31bp上
流 にAATAAと
い う真 核 生 物 の 遺 伝 子
間 で よ く保 存 さ れ て い る 塩 基 配 列 が 含 ま れ て い る 。 こ の 配 列 はRNA鎖
の 切 断 と ポ リ(A)鎖
結合
の シ グ ナ ル と考 え ら れ て い る。 ヒ トGRHの 目のSerが
場 合,exon
5のalternative
splicingに
欠 落 したprepro-hGRH(107)が
で あ るhGRH(1-44)NH2と
未 だ 生 物 作 用 の 不 明 なhGRH-C端
い は ヒ トGRH(47-77)が
ペ プ チ ド ヒ トGRH(47-76)あ
隆 起 に そ の 神 経 終 末 を投 射 し,同 部 に お い て 下 垂 体 門 脈 血 中 へGRHを 下 垂 体 前 葉 細 胞 に 達 し,GH分 一方
,SRIF神
る
局在 有 細 胞 の 大 部 分 は 視 床 下 部 弓 状 核 に 存 在 し,そ れ 以 外 に,視
視 床 下 部 腹 内 側 核 周 辺 に見 ら れ る14)∼16)。 そ の 内,弓 状 核 に 存 在 す るGRH神
Hは
うち,103番 り,成 熟 ペ プ チ ド
生 成 され て くる 。
視 床 下 部GRHとSRIFの 視 床 下 部GRH含
よ り,prepro-hGRH(108)の
で きて く る 。 こ れ ら前 駆 体GRHよ
床 下部 腹外 測部 と
経 細 胞 は 主 と して 正 中
放 出 す る。 放 出 さ れ たGR
泌 を 促 進 す る。
経 細 胞 は 視 床 下 部 の ほ と ん ど の 神 経 核 に 存 在 す る が17),そ の う ち,正
中隆 起 にそ
の 神 経 終 末 を 投 射 して い る細 胞 体 は 大 部 分 が 視 床 下 部 室 周 核(視 交 叉 上 核 の 前 縁 か ら第3脳 室 の 周 囲 を 薄 く取 り巻 き,後 方 は 弓 状 核 の 中 央 上 部)に 存 在 し,そ れ 以 外 に,室 索 前 野 に 存 在 す る18)19)。 弓 状 核 のSRIF神 経 終 末 を 投 射 せ ず,他 近 年,免
有 細 胞 と異 な り,正 中 隆 起 に は そ の 神
の 働 き を して い る も の と考 え ら れ て い る。
疫 細 胞 化 学 の 進 歩 に よ っ て,同
す る こ と が 可 能 と な り,視 床 下 部 のGRH神 同 定 さ れ た20)。す な わ ち,弓 末 にSRIF含
経 細 胞 は,GRF含
傍 核(小 細 胞 性),内 側 視
一 神 経 細 胞 内 で,2つ 経 細 胞 とSRIF神
以 上 の 神 経 伝 達 物 質 を 分 離 ・観 察 経 細胞 相互 の形 態学 的神 経 回路網 が
状 核 腹 内 側 部 に 存 在 す るGRH神
経 細 胞 の 細 胞 体 な らび に そ の 神 経 終
有 神 経 細 胞 突 起 が 終 始 して い る こ と が 免 疫 電 子 顕 微 鏡 レ ベ ル で 証 明 され た 。 そ の後,
同 神 経 回 路 網 の 存 在 が 追 加 確 認 さ れ た21)。ま た,逆
に,GRH神
経 細 胞 終 末 がSRIF神
に連 絡 して い る こ と が 免 疫 組 織 化 学 レベ ル で 報 告 され て い る22)。大 脳 辺 縁 系 とGH分 視 床 下 部SRIF神 最 近,ラ
経 細 胞周 囲 泌 に関 与す る
経 細 胞 の 機 能 的 連 絡 に か ん して は 鈴 木 に よ る 総 説 が あ る23)。
ッ ト視 床 下 部 の 隣 接 凍 結 切 片 に お い て,125I-SRIFの
疫 組 織 化 学 も し くはGRH
in situ hybridizationを
オ ー トラ ジ オ グ ラ フ ィ とGRH免
組 み 合 わ せ て,弓
状 核GRH産
生 細 胞 上 のSRIF
レセ プ ター 発 現 を 検 討 した 成 績 が 発 表 さ れ た24)25)。 こ れ らの 成 績 に よ る と ,弓 状 核GRH神 の3-4割
にSRIFレ
以 上 の成 績 は,視
経 細胞
セ プ タ ー が 同定 さ れ て い る。 床 下 部 弓 状 核 のGRH神
ら の神 経 連 絡 に よ り,細 胞 表 面 のSRIFレ
経 細 胞 の 少 な くと も一 部 は 室 周 核 のSRIF神 セ プ タ ー を 介 して ,シ
経細胞か
グ ナ ル 伝 達 を受 け る と い う神 経 回
路 が機 能 す る可 能 性 が 示 唆 さ れ る。 GRHの
分泌調 節
視 床 下 部 は 生 理 学 的 条 件 下 で は 解 剖 学 的 に 到 達 困 難 で,ま
た,微
量 の 視 床 下 部GRH含
量 を測定
で き る鋭 敏 な 測 定 法 も無 か っ た 。 そ の た め,GRHの
分 泌 調 節 に 関 す る研 究 で は ,抗SRIFあ
は 抗GRH血
泌 を 指 標 に して 視 床 下 部GRH神
清 を 投 与 した 実 験 動 物 で の 下 垂 体GH分
を 推 測 す る と い う間 接 的 な 評 価 方 法 が 従 来 用 い られ た 。 視 床 下 部 切 片 を 用 い たin H遊
離 に お よ ぼ すGH,SRIF,IGF-Iの
作 用 が 検 討 さ れ た が,本
と よ り,最 近 で は 余 り用 い られ て い な い 。 ま た,下
るい
経 細胞機 能
vitroの 系 でGR
系 も不 安 定 で 鋭 敏 さ に 欠 げ る こ
垂 体 門 脈 血 中 のGRHを
測 定 した り,視 床 下 部
正 中 突 起 に 微 小 カ ニ ュー レ を留 置 し局 所 を 潅 流 す る方 法 も試 み られ て い る が ,麻 酔 下 で の 下 垂 体 摘 第68巻
第10号
日
本
内
分
泌
学
会
雑
1061
誌
除 した 動 物 を 用 い る と い う非 生 理 学 的 な 実 験 条 件 下 で の 検 討 で あ っ た り26),GRH測 も あ り,十 分 な 成 績 は 得 ら れ て い な い 。
図2.視
床 下部 室 周 核 のSRIF神 GH分
経 細胞 を電 気 破 壊 した無 麻 酔 ラ ッ ト(MPO)の
泌 に及 ぼす 抗GRH血
清(GRF-AS)投
同 ラ ッ トに おけ る視 床 下部 切 片 か らのGRH遊 で はGHの
自然 分 泌(GH
投 与 のMPOラ るが,GRF-ASを (B).電
surge)が み られ る(A).正
ッ トで はGHの
投 与 したMPOラ 離 はSHAMと
H含 量 は低 下 して い る(C).文
よび
常 家兎 血 清(NRS)
基 礎 値 が 上昇 し,GHsurgeは
気 破 壊 後4日 目のMPOラ
激 に よ るGR}1遊
与 の 影 響(A,B),お
離(C).対 照 ラ ッ ト(SHAM)
ッ トで はGHの
消 失 して い
分 泌 が 低下 して い る
ッ ト視 床 下 部切 片 か らの高 カ リウ ム刺 比較 して亢 進 して い た が,視 床 下 部GR 献28よ り改 編.
第68巻
第10号
定感 度 の問 題
1062
成長 ホル モ ン分 泌 促進 因子 の遺 伝 子 発 見 並 び に分泌 調 節(片 上,他1名)
GH分
泌 に は,そ
negative
され,抗SRIF血 GHの
れ 自身 の 分 泌 が 視 床 下 部 のGRHあ
feedback機
構 が 存 在 す る。GHを
清 の 投 与 に よ り,こ れ ら のGH分
分 泌 抑 制 作 用 の 少 な くと も一 部 に は,視
feedback機
る い はSRIF分
泌 抑 制 作 用 が 部 分 的 に 解 除 さ れ る こ と か ら,
床 下 部SRIF分
構 が 関 与 して い る と 考 え ら れ て い る。GHそ
特 別 な 標 的 臓 器 は な い が,各
組 織 で 産 生 され るIGF-I(ソ
long loop feedback機
マ トメ ヂ ンC)が
垂 体 摘 除 の の ち,GH以
充 し た ラ ッ トに お い て は,視 作 用 はGHの
泌 亢 進 はIGF-Iに
long
loop
外 の 甲 状 腺 ホ ル モ ン,コ ー チ ゾ ンな らび に テ ス トテ ロ ンを 補
床 下 部 切 片 か ら のGRH遊
よ る抑 制 作 用 の 低 下,GHそ
れ た 。 そ こで,視
離 は 亢 進 し,含 量 は 低 下 し て い る解)。こ の
床 下 部SRIFか
れ 自体 の もつGRH細
らGRH細
有 細 胞 を 破 壊 した ラ ッ トに お い て,視
離 も亢 進 した(図2)。
損 に よ り,GRH神
胞 へ の抑 制 作 用 の 消 失 が 考 え ら
床 下 部 で のSRIFに
よ るGRH産
生細 胞 の抑制 作用 に
度 は 上 昇 し,視 床 下 部 切 片 か
この 事 実 は 視 床 下 部SRIFがGRH神
経 細 胞 に対 して 抑 制 的 に
作 用 して い る こ と を 示 唆 して い る。 さ ら に,視 床 下 部SRIFをcycteamineに た場 合 で も,視 床 下 部GRH分
経細
胞 に い た る 神 経 繊 維 連 絡 を 解 剖 学 的 に 切 断 した り,S
つ い て さ らに 検 討 を加 え た28)。こ れ らの ラ ッ トに お い て ,血 中GH濃
よ り選 択 的 に 枯 渇 し
泌 細 胞 の 免 疫 活 性 は 亢 進 した こ と よ り29),視 床 下 部 に お い てSRIF
神 経 細 胞 は 上 記 の 神 経 回 路 網 を 介 してGRH産 最 近,無
生
泌 が抑
清 の 前 投 与 に よ り部 分
よ るGHのnegative
補 充 に よ り,部 分 的 に 解 除 さ れ た 。 こ の機 序 と して,GH欠
胞 へ のSRIFに
らのGRH遊
局 所 に お け るGHの
節 に 関 与 して い る も の と考 え られ て い る 。
さ らに,下
RIF含
short loop
与 に よ り,自 然 の 脈 動 的 なGH分
構)。 この 抑 制 作 用 は 抗SRIF血
的 に 解 除 さ れ た こ と よ り,視 床 下 部SRIF分 feedback調
泌 亢 進 を 介 す るnegative
の も の は 他 の 下 垂 体 ホ ル モ ン と 異 な り,
物 作 用 を 介 在 して い る もの と考 え られ て い る。IGF-I投 制 さ れ る(negative
泌 を 介 して 作 用 す る と い う
末 梢 も し くは 脳 室 内 に急 性 投 与 す る と そ の 分 泌 が 抑 制
生 細 胞 に 抑 制 的 に 作 用 して い る も の と考 え られ る 。
麻 酔 下 の 羊 の 下 垂 体 門 脈 血 を ス トレ ス な しで 連 続 的 に 採 取 す る 方 法 が 可 能 と な り ,下 垂 RIA(ヒ トGRHのRIAを 使 用)30)とhomologous RIAを 用い
体 門 脈 血 中 のGRHをheterologous
て検 討 した 成 績 が 発 表 さ れ た31)32)。heterologous RIAを とSRIFの
間 には ほ とん ど相 関は認 め られ なか った。
無 麻 酔 下 の 羊 に お い て ス ト レス は ヒ トと 同 様 にGHを のGRH濃
度 も上 昇 して い た31)。さ らに,SRIF誘
門 脈 血 中 のGRH濃
度 も 同 時 に 低 下 し,SRIF誘
濃 度 の み な らず 下 垂 体 門 脈 血 中 のGRH濃 以 上 の 成 績 は,SRIFが GRH遺
視 床 下 部GRH分
も ち い た 検 討 で は 下 垂 体 門 脈 血 中 のGRH 一 方 ,homologus 上 昇 させ,同
RIAを
もち いた検 討 で は
時 に採 取 した 下 垂 体 門 脈 血 中
導 体 を 投 与 した 場 合 に はGHの
み な らず 下 垂 体
導 体 の 作 用 が 消 失 す る と 反 跳 的 に 末 梢 血 中 のGH
度 も 同 時 に 同 程 度 上 昇 した32)。 泌 に対 して 抑 制 的 に 作 用 して い る こ と を 示 唆 して い る 。
伝子 の発現 調 節
組 織 に於 け る ホ ル モ ンの 含 量 は 合 成 と分 泌 ・分 解 の 総 和 と して 現 さ れ る。 合 成 能 を知 る指 標 と し て3H-thymidineの わ っ て,最
取 り込 み や35S-methionineを
近 はDNAか
用 い るpulse-chase実
ら各 視 床 下 部 ホル モ ン のmRNAへ
な らび にin situ hybridization解
験 な どの煩 雑 な方 法 に代
の 転 写(遺 伝 子 発 現)をNorthem解
析
析 を 用 い て そ れ ぞ れ 定 量 的 あ る い は 定 性 的 に検 討 す る こ と が 可 能
と な った 。 下 垂 体 摘 出 ラ ッ トで は 視 床 下 部GRH含 進 す る と い う実 験 成 績 はGH欠 て い る27)。そ こ で,下
量 が 低 下 し,一 方,視
損 に よ り視 床 下 部GRH産
垂 体 摘 出 ラ ッ ト用 い て 視 床 下 部GRHの 第68巻
第10号
床 下 部切 片 か ら のGRH遊
離 は亢
生 と代 謝 が 亢 進 して い る 可 能 性 を示 唆 し 産 生 能 を知 る た め にGRHmRNAを
日
測 定 して み る と33),予 想 通 りGRH
本
内
分
mRNAは7日
充 に よ り増 加 して い たGRH
減 少 した が,GH補
充 無 しでT4,コ
垂 体GH含
会
雑
1063
誌
mRNAは
ー チ ゾ ン,テ
間 を 越 え て 高 値 を維
下 垂 体 摘 出 ラ ッ トの64%ま
で 部分 的 に
ス トス テ ロ ン の み の 補 充 で は 効 果 が な か っ た 。
量 の 低 下 した 甲 状 腺 機 能 低 下 症 ラ ッ トの 視 床 下 部GRHmRNAは
お り34),T4の 補 充 の み な らずGH補
充 に よ り,増 加 し た視 床 下 部GRHmRNA含
と か ら,甲 状 腺 ホ ル モ ン 低 下 が 下 垂 体GHの HmRNAが
学
後 に 対 照 の 約6倍 と な り,2週
持 し て い た 。GH補
さ ら に,下
泌
合 成,分
増 加 して 量 が 低 下 した こ
泌 を低 下 さ せ た 結 果,2次
的 に視 床 下 部GR
増 加 した も の と考 え られ た 。
しか し,こ れ ら のGH欠
損 も し くは 分 泌 不 全 症 に お い て,視
亢 進 して い る機 序 がGH欠
損 のGRH神
床 下 部GRHの
経 細 胞 へ の 直 接 作 用 で あ る の か,あ
分 泌 な らび に 産 生 が る い はSRIF神
を 介 す る二 次 的 な もの な の か は 不 明 で あ っ た 。
図3.甲
状 腺 機 能 低 下 症 ラ ッ ト(THX)視
症 下 部 弓 状 核GRH神
織 化 学(IMMUNOH工STOCHEMISTRY)な (IN
SITU
ら び にin
HYBRIDIZATION).対
で はGRH神
照 ラ ッ ト(CONT)に
比 較 し,THX
経 細 胞 数 な ら び に 遺 伝 子 発 現 は 亢 進 し て い る.一
に 甲 状 腺 ホ ル モ ン を 補 充 し た ラ ッ ト(THX+T4),THXにGHを た ラ ッ ト(THX+GH)お (THX+SRIF)で
経 細 胞 の 免疫 組 situ hybridization
よ びTHXにSRIF誘 は,THXに
み ら れ たGRH神
発 現 の 増 加 反 応 は 抑 制 さ れ て い る.
第68巻
第10号
方,THX 補充 し
導 体 を補 充 した ラ ッ ト 経 細 胞 数 な らび に遺伝 子
経細 胞
1064
成長 ホル モ ン分 泌 促進 因子 の遺 伝 子 発 見 並 び に分泌 調 節(片 上,他1名) そ こ で,わ
れ わ れ は,下
垂 体GHの
影 響 を な くす る 目 的 で,下
び に分 泌 障 害 を きた した 甲 状 腺 機 能 低 下 症 ラ ッ トに 於 て,外 GRH神 NAの
経 細 胞 数 の 減 少,Northern 減 少 を 観 察 した(図3)。
blot analysisな
一 方,GHあ
垂 体 摘 出 ラ ッ トやGH合
因 性 にSRIF誘
ら び にin situ hybridazationに
る い はT4の
よ るGRHmR
補 充 に よ っ て も同 様 に,視 床 下 部GRHの
遺 伝 子 発 現 は 抑 制 され た(図4)。
図4.下
垂 体 摘 除 ラ ッ ト(HPX)な H神
経 細 胞 数(GRH
ら び に 甲 状 腺 機 能 低 下 症 ラ ッ ト(THX)に
immunohistochemistry),GRH遺
hybridizationな
ら び にNorthern
あ る い はSRIF誘
導 体 投 与(SRIF)の
る こ と を 示 し,→
図5.視
床 下部GRHの セ プ ター を,+は
analysis)に 影 響.↑
お け るGR
伝 子 発 現(in
は 対 照 ラ ッ トと 比 較 し て 増 加 して い
遺 伝 子 発 現 と分 泌 調 節 に関 す る模 式 図.Rcは 特異的 レ 促 進 作 用 を,-は 抑 制 作 用 を示 し,?は 作 用 が不 明 な こ
と を示 す. 第10号
situ
及 ぼ す 甲 状 腺 ホ ル モ ン(T4),GH
は 改 善 さ れ た こ と を 示 す.
第68巻
成な ら
導 体 を 投 与 した と こ ろ,
日
GHの
本
内
分
泌
学
会
雑
誌
1065
末 梢 あ る い は 脳 室 内 投 与 に よ る生 理 的 な 下 垂 体 成 長 ホ ル モ ン分 泌 の 抑 制 効 果 は 抗SRIF家
兎 血 清 の 前 投 与 に よ り解 除 さ れ る こ と35),成 長 ホ ル モ ンの 脳 室 内 投 与 が 下 垂 体 門 脈 血 中 のSRIF濃 度 を 上 昇 さ せ る こ と36),室 周 核 な らび に 室 傍 核 のSRIF神 子 が 発 現 して い る こ と37),視 床 下 部 弓状 核 のGRH神 SRIF神
経 細 胞 突 起 がGRH神
床 下 部GRH遺
経 細 胞 の 約50%にGHレ
経 細 胞 にSRIFレ
セ プ ター の 遺 伝
セ プ ター が存 在 す る こ と24)25),
経 細 胞 に連 絡 して い る こ と20)21)な ど を 重 ね て 考 え る と,GHに
伝 子 発 現 抑 制 作 用 の 少 な く と も 一 部 は 視 床 下 部SRIFの
よ る視
分 泌 促 進 を 介 す る も の と考
え られ る 。 以 上 の よ う なSRIFの
視 床 下 部 神 経 回 路 を 介 す る弓 状 核GRH神
抑 制 作 用 以 外 に,GHも
し くはIGF-Iな
可 能 性 が 最 近 報 告 さ れ て い る38)。GHも 各 神経 核 を含 む視床 下部切 片 を 察 した と こ ろ,GHのicv投
よ り,GHとIGF-Iは
与 で はGRHな
全 体 のSRIF
mRNA(Nortern解
と39),弓 状 核GRF神
伝 子発 現 抑制 の
損 ラ ッ トの 脳 室 内(icv)投
mRNAは
変 化 せ ず,GRH
mRNAと
mRNAが
も に 減 少 した 。 こ の こ と
存 在 す る こ と,GH投
析)は 変 化 せ ず と も33),室 周 核 のSRIF遺 セ プ タ ー 陽 性 細 胞 数(5%以
与 に よ り視 床 下 部
伝子 発 現 は増加 す る こ
下)はSRIFレ
セ プ ター 陽 性 細 胞
比 較 して 少 な い40)とい う実 験 成 績 を 考 え 合 わ せ る と,GH分
構 に お い て,GHが
与 し,
量 の 変 化 を観
伝 子 発 現 を 直 接 抑 制 す る も の と考 え られ る。 しか
損 ラ ッ トの 視 床 下 部 に はSRIFが
経 細 胞 のGHレ
伝 子 発現 の
らび にSRIFmRNA含
ら び にSRIF
異 な っ た 機 序 でGRH遺
い たGH欠
数(30∼40%)に
し くはIGF-IをGH欠
与 で は 視 床 下 部 切 片 中 のSRIF
しな が ら,用
feedback機
ど の 液 性 因 子 を 介 す る 直 接 的 なGRH遺
一 塊 と して 取 り出 し,GRHな
著 明 に 減 少 した 。IGF-Iのicv投
経 細 胞 で のGRH遺
弓 状 核GRH神
経 細 胞 に 直 接 作 用 してGRH遺
泌 のshort
loop
伝 子 発 現 を抑 制 す る
か 否 か に つ い て は さ ら に検 討 を 要 す る もの と考 え られ る。 図5に 現 在 ま で に 得 ら れ たGRH遺
伝子
発 現 調 節 機 構 の 概 略 を示 す 。 GRHのPosttranslational
Processing
末 端 肥 大 症 を 呈 した 患 者 の 異 所 性GRH産
生 腫 瘍 か ら単 離 さ れ た ヒ トGRHは3種
即 ちGRH(1-37)OH,GRH(1-40)OHお
よ びGRH(1-44)NH2と
の ヒ トGRHが
Processingを
ま た,ヒ
ど の よ うなPosttranslational トGRHを
投 与 後 の 血 漿GRH測
と か ら,Frohmanら
は ヒ トGRH(1-44)NH2を
ヒ トに投 与 した 後,お
よ び 血 液 と一 緒 に試 験 管 内
用 い て 分 析 した41)。そ の結 果,ヒ
を 外 因 性 に 投 与 した 場 合 も試 験 管 内 と 同 様 に,比
生 成 機 序 は,末
トGRH(1-44)NH2
較 的 速 や か に 生 物 活 性 の な い ヒ トGRH(3-44)
分 解 され る こ と を 明 ら か に し た 。 し か しな が ら,内
よ び ヒ トGRH(1-40)OHの
して 報 告 され た1)2)。こ れ ら
受 け 生 成 さ れ る の か は 不 明 で あ った 。
定 か ら得 ら れ た 血 中 半 減 期 は 生 物 活 性 を 反 映 し な い こ
に 添 加 した 後 に そ れ らの 分 解 産 物 をHPLCを
NH,に
類 の 分 子 型,
梢 血 中GRH濃
因 性 の ヒ トGRH(1-44)NH2の 度 が 低 い こ と と,ヒ
代謝 お トGRH産
生腫
瘍 が 稀 な こ と もあ っ て 不 明 の ま ま で あ っ た。 近 年,transgenic れ た(図6),本 GRH濃
animal作
度 は ヒ トGRH産
トGRHへ
トGRH産
ウ ス下 垂 体 の ヒ トGRH産
の 取 り込 み をpulse-chase実 りGRH(1-45)OHが
生 に 基 づ く末 端 肥 大 症 の マ ウ ス が 作 ら 生 細 胞 か ら な る過 形 成 を 示 し,血
生 腫 瘍 に基 づ く末 端 肥 大 症 患 者 と同 様 に,高
な っ た42)。そ こ で,transgenicマ
GRHよ
成 法 が 進 歩 し,ヒ
マ ウ ス の 下 垂 体 は 主 と してGH-GRH産
濃 度 を 示 す こ と が 明 らか と
生 細 胞 を用 い て,35S-methionineの
験 に よ り検 討 し た43)。図7に 示 す よ う に,ヒ
まず 産 生 さ れ,つ
生 成 さ れ る こ とが 明 ら か と な っ た 。 次 に,同
い でGRH(1-44)NH2よ
じ くhGRH-transgenic
第68巻
第10号
中ヒ ト
ヒ
トprepro-
りGRH(1-40)OHが miceの
各 臓 器 で 発 現 して い
1066
成 長 ホル モ ン分泌 促 進 因子 の遺 伝子 発 見 並 び に分 泌 調節(片 上,他1名)
る ヒ トGRHの
分 子 型 を 検 討 した と こ ろ44),マ ウ ス 下 垂 体 と 膵 臓 で は,GRH(1-44)NH2,GRH
(1-40)OHな
ら び に疎 水 性 の 高 い 分 子 型 が 認 め ら れ た 。
GRH(3-44)NH2が
図6.ヒ
トGRH western大
図7.ヒ
一 方,本
マ ウ ス血 中 で は 主 と して ヒ ト
認 め られ た 。
トGRH
transgenicマ 学Mayo博
transgenicマ
ヒ トGRHのpost GRH(-30∼+77)は alpha-amidating トGRH(1-44)NH2が
ス ス の 下 垂 体.巨
大 な 下 垂 体 が 見 られ る.North-
士 よ り提 供.
ウ ス のGRH産
translational
生 下 垂 体 細 胞 で のpulse-chase法
processingを
示 す.文
献(43)よ
による
り 改 編.prepro-
種 々 のendopeptidase,carboxypeptidaseやpeptidylglycine monooxygenase(PAM)の 生 成 さ れ,さ
作 用 を 受 け,ま
ず,成
熟 ペ ペ チ ドヒ
ら に 分 解 を う け て ヒ トGRH(1-40)OHが
謝 さ れ る.
第68巻
第10号
代
日
図8.正
本
常 者 の 末 梢 血 中GR且 の ちHPLC分 NH2の
ま た,GRH産
内
分
泌
学
の 分 子 形 態.affinity
析 を お こ な っ た.↓
会
雑
columnで
誌
は ヒ トGRH(1-44)NH2な
1067
血 漿 中 のGRHを
溶 出 部 位 を 示 す.
生 の 気 管 支 悪 性 カ ル チ ノ イ ド症 例 に お い て 腫 瘍 組 織 中 な ら び に 血 中 の ヒ トGRH
の 分 子 型 を 検 討 した と こ ろ45),腫 瘍 組 織 中 に は ヒ トGRH(1-44)NH2な が 認 め ら れ,一
濃 縮 した
ら び にGRH(3-44)
方,患
者 血 中 の ヒ トGRHの
正 常 ヒ ト末 梢 血 中 に もGRH様
ら び にGRH(1-40)OH
主 要 な 分 子 型 はGRH(3-40)OHで
免 疫 活 性(GRH-LI)が
あ った。
証 明 さ れ て お り,視 床 下 部 機 能 を 反 映 す
る 可 能 性 が 示 唆 さ れ て きた が46),血 中 濃 度 が 低 く,ま た 視 床 下 部 以 外 の 上 部 消 化 管 に もGRH-LI が 証 明 され て お り47),末 梢 血 中 のGRH-LIの ら の 方 法48)に準 じて,正
由 来 と 分 子 型 は 不 明 で あ っ た 。 そ こで 筆 者 ら は石 川
常 ヒ ト末 梢 血 中 のGRH-LIを
抽 出 操 作 を くわ え る こ と な く,直 接,測
定
可 能 な ヒ トGRHのEIA法 を 確 立 し49),正 常 ヒ ト末 梢 血 中 のGRH-LIの 由 来 と分 子 型 を検 討 した 50) 。 す な わ ち,手 術 時 に 得 られ た ヒ ト肝 門 脈 血 と末 梢 血 中 の ヒ トGH,SRIF,GRHを 測 定 した 結 果, 下 垂 体 由 来 のGHは
肝 門 脈 血 と 末 梢 血 中 濃 度 に 有 意 差 を認 め な か っ た が,GRH-LI濃
あ る い は膵 臓 由 来 と考 え られ るSRIFと 梢 血GRH-LIは 中GRH-LIが
主 と して 消 化 管 も し くは 膵 臓 に 由 来 す る もの と結 論 さ れ た 。 こ の こ とは,末 各 種 のGH分
泌 刺 激 に 反 応 を 示 さず,食
よ く合 致 す る 。 さ ら に,図8に (1-44)NH2お
度 は消化 管
同 じ く,肝 門脈 血 が 末 梢 血 よ り高 値 を 示 した 。 従 っ て,末
示 す よ うに,正
梢血
物 摂 取 に よ り増 加 す る と い う成 績51)52)と も
常 ヒ ト末 梢 血 中 のGRHはGRH(3-44)NH2,GRH
よ び 疎 水 性 の 高 い分 画 と い う,3つ
の 主 要 な分 子 型 を と る こ と を 初 め て 明 ら か に し
た。 最 近,澤
野 ら は ヒ ト中 枢 神 経 系(CNS)の
正 常 お よ び 腫 瘍 組 織 抽 出 物 中 に お け る ヒ トGRH
(1-44)NH2の 代 謝 を し らべ た 結 果,正 常 大 脳 皮 質 抽 出 液 中 で は 末 梢 血 中 と は 異 な り,hGRH(30 -44)NH 2とhGRH(19-44)NH2へ 代 謝 され る こ と を報 告 した53)。 一方,脈 絡 膜 乳 頭 腫 抽 出 液 中 で はhGRH(1-11),hGRH(1-20),hGRH(12-44)NH2,hGRH(21-44)NH2,hGRH(30-44) NH2に 分 解 され る こ と を 見 い だ した 。 以 上 の 成 績 か ら,ヒ
トGRHの
分 解 ・代 謝 は 組 織
と な り,こ れ ら の 組 織 に 特 異 的 なposttranslational
腫 瘍 な らび に 種 族 に よ り異 な る こ と が 明 ら か processingの
解 明 す る うえ で 重 要 で あ る と結 論 付 け られ る。 第68巻
第10号
検 討 がGRHの
生物 学的 作用 を
1068
成 長 ホル モ ン分泌 促 進 因子 の遺 伝 子発 見 並 び に分 泌調 節(片 上,他1名)
ま とめ GRHの
遺 伝 子 発 現 調 節 機 構 に 関 す る研 究 は,構
GRH-transgenic RH遺
animalの
作 成,insitu
造 遺 伝 子 の 解 明 と,疾
hybridization法
とNorthern
患 モ デ ル 動 物 と して のh
blot解 析 法 の 導 入 に よ るG
伝 子 発 現 の 定 性 的 な らび に定 量 的解 析 の 進 歩 に よ り,最 近 目覚 ま しい 新 た な展 開 が み ら れ る。
な か で も,視
床 下 部GRH-SRIF遺
伝 子 発 現 機 構 の 解 明 に よ り,GH分
泌 のfeedback調
節 に関与
す る視 床 下 部 機 能 が 明 ら か に な りつ つ あ る。 ま た,GRHの さ ら に,従
微 量 定 量 法 の 開 発 に よ り,末 梢 血 中 のGRHの
由来 と分子 型 が 明 らか とな った。
来 の 測 定 法 で は 解 析 不 可 能 で あ っ た 生 理 学 的 な らび に 病 的 状 態 で のGRH分
泌 動態 も明
らかに されつ つ ある。 今 後,GRHの
遺 伝 子 発 現 と分 泌 調 節 機 構 の 解 明 を 通 じて,複
雑 な 視 床 下 部 機 能 が さ ら に解 明 さ
れ る こ と が 期 待 さ れ る。 謝辞 本 研 究 に 協 力 して い た だ い た 宮 崎 医 科 大 学 内 科 学 第3講 座,日
高 博 之 博 士,hGRH(1-44)NH2
の 高 感 度 測 定 法 開 発 に 協 力 して い た だ い た 宮 崎 医 科 大 学 第1生 化 学 講 座,石 助 教 授,hGRH-transgenic
mouseの
て い た だ い た 米 国Northwestem大
試 料 な ら び に マ ウ スGRH構 学,Mayo博
して い た だ い た 東 海 大 学 病 理 学 講 座,長
士,hGRH-transgenic
らび に 平 成2-3年
Guillemin
R,
Brazeau
hormone—-releasing Science 2) Rivier
3)
J, Spiess
Esch
J, Thorner
G, Ling N and Wehrenberg
a human
pancreatic
M and Vale W.
Brazeau
P,
Vale W,
hormone.
Science human
U, Monahan
pancreatic
Burgus
polypeptide
R,
that
that
Characterization
islet tumor.
Ling
N,
inhibits
analysis
of cDNA
somatocrinin.
Nature
Butcher
the
M,
secretion
J and Rosenfeld
WB.
caused
Growth
acromegaly.
of a growth
hormone
1982; 300: 276-278 Rivier
J and
Guillemin
of immunoreactive
growth
MG. Expression-—cloning
hormone-—releasing
JJ, Lomedico
PT,
Bhatt
RS,
Esch F, Ling N, Zeytin F, Brazeau P, Poonlan
6)
tumor
R.
pituitary
1973; 179: 77-79
Mayo KE, Vale W, Rivier
Gubler
度 文 部 省 科 学 研 究 費 補 助 金(国 際 学 術
献
P, Bohlen
from
factor from a human
cDNA encoding 5)
P,
factor
releasing
growth
成2-4年
1982; 218: 585-587
Hypothalamic
4)
標 本写 真 を提供
研 究助成 に よった。 文
1)
mouseの
村 義 之 教 授 に 深 謝 致 し ます 。 本 研 究 の 一 部 は,平
度 文 部 省 科 学 研 究 費 補 助 金(#02671104)な 研 究,#02044118)の
川 榮 治 教 授 と橋 田誠 一
造遺伝 子 に関 す る情報 を提 供 し
for the
precursor
factor.
Nature
and sequence 1983; 306: 86-88
Collier KJ, Hoffman
BJ, Bohlen
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of human
growth
of a
P,
and sequence
hormone-—releasing
factor,
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Goodman
RH,
Lund
cell-free
translations
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RNAs from anglerfish
islets.
: Products
of
J Biol Chem 1980; 255:
6549-6552 7)
Taylor
WL,
Collier KJ, Deschenes
RJ, Weith 第68巻
HL and Dixon
第10号
JE. Sequence
analysis
of
日
本
内
分
泌
学
会
雑
誌
cDNA coding for a pancreatic precursor to somatostatin.
1069
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Ultrastructural
evidence 第68巻
for neuronal 第10号
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of growth
hormone
1070
成長 ホル モ ン分 泌 促進 因子 の遺 伝 子 発見 並 びに分 泌 調 節(片 上,他1名)
secretion.
Neuroendocrinology
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Palkovits
immunocytochemical between
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and growth
M,
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Gores
T
for the
existence
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Electron
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C and are
a
nucleus:
radioautographic
A
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growth
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hormone-—synthesizing
and receptor
PM and Vale W. Patterns
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of somatostatin
E, Bloch B, Rostene
hormone-—releasing
in situ hybridization
Neuroendocrinology 26) Plotsky
factor immunoreactivity
Neuroendocrinol
Epelbaum
combined
GS. Colocalization
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releasing
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hormone-—releasing
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preoptic
Downs
area
Endocrinology
GS,
enhancement
McCarthy
of growth
hypothalamus.
Downs
hormone-—releasing unanesthetized
M, Magnan
Lombardi portal
Oliver
effect of hypothalamic releasing
factor
in
medial the
rat.
E,
P
factor
and
IJ
and
Beaudet (GRF)
A.
Cysteamine -induced
immunoreactivity
somatostatin/GRF
Thomas
somatostatin
V,
GB.
in
Giraud
Society,
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portal
P,
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acute
in arcuate
interactions
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hypothalamic-—portal
Pesce
第68巻
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本
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泌
学
会
雑
誌
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on preprosomatostatin
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pituitary
hyperplasia
in transgenic
mice
expressing
a human
growth
hormone—releasing factor gene. Mol Endocrinol 1988; 2: 606-612 43) Brar AK, Downs TR, Heimer EP, Felix AM and Frohman LA. Biosynthesis of human growth hormone-—releasing hormone (hGRH) in the pituitary mice. Endocrinology 1991; 129: 3274-3280
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44) Frohman LA, Downs TR, Kashio Y and Brinster RL. Tissue distribution and molecular 第68巻
第10号
1072
成 長 ホ ル モ ン分 泌 促 進 因子 の 遺伝 子 発 見 並 び に分 泌調 節(片 上,他1名)
heterogeneity
of human
Endocrinology
1990; 127: 2149-2156
45) Melmed
hormone-—releasing
S, Ziel FH, Braunstein
of acromegaly carcinoid
due to ectopic
tumor.
46) Chihara
K,
stimulates
Kashio
Clin Endocrinol
Y,
Kita T,
factor
T and Frohman
of growth
in the transgenic
LA.
mouse.
Medical management
hormone-—releasing
hormone
by a
Metab 1988; 67: 395-399 Okimura
Y,
growth
Kaji H,
Abe H and Fujita
hormone-releasing
hormone
T.
L—dopa
in humans.
J
Metab 1986; 62: 466-473 Y, Masuda
A, Nakahara
K and Ling N. Distribution
immunoreactivity 48) Ishikawa
production
of hypothalamic
T, Kiyosawa
H, Shizume
GD, Downs
J Clin Endocrinol
release
47) Shibazaki
in human
E. Development
macromolecular
antigens-A
49) Hidaka H, Hashida enzyme
growth
of growth
tissue extracts.
application
review.
Clin Biochem
for human
H, Ishikawa growth
hormone-—releasing
J Clin Endocrinol
and clinical
S, Katakami
immunoassay
M, Imaki T, Wakabayashi
I, Demura
hormone—like
Metab 1984; 59: 263-268
of sensitive
enzyme
immunoassay
for
1987; 20: 375-385
E and Matsukura
hormone-—releasing
S. Sensitive
hormone
sandwich
in plasma.
Clin
Chem Enzym Comms 1992; 4: 305-310 50) Hidaka H, Katakami S.
Human
measured
AM,
M, Koga Y, Hashida S,
hormone—-releasing
by sensitive
51) Sopwith plasma
growth
H, Tanigawa
Penny
hormone
enzyme immunoassay ES, Besser
immunoreactivity
growth
(hGRH)
Ishikawa
E and Matsukura
in hepatic
portal
plasma
. Submitted.
GM and Rees LH.
Stimulation
hormone
factor.
releasing
by food of peripheral
Clin Endocrinol
1985; 22:
337-340 52) Sopwith
AM,
circulating growth
Penny
hormone
53) 澤 野 眞 二,山
ES, Llytras
concentrations in normal
田正 三,大
げ る酵 素 に よ るGRFの
N,
Besser
GH and Rees LH.
of immunoreactive human
箸 信 一:ヒ 代 謝.日
subjects.
growth Clin Science
ト中 枢 神 経 系(CNS)の
内 分 泌 会 誌1992;68:2
第68巻
第10号
hormone
Dissociation releasing
between factor
and
1987; 72: 181-185 正 常 お よ び腫 瘍 組 織 抽 出 物 中 に お
総
1057
Endocrino1.)68.1057∼1072.1992
説
成長 ホル モ ン分泌促進 因子 の遺伝子発現 な らびに分泌調節 宮崎医科大学第3内科 片
上
Regulation Hormone Hideki
秀
喜,松
倉
茂
of Growth Hormone—releasing Gene Expression and Secretion
KATAKAMI
and
Shigeru
MATSUKURA
Third Department of Medicine, Miyazaki MedicalCollege
Growth
hormone
hypophysiotropic regulates GI-RH
the synthesis genes
in
understanding
Recent
gene
species
neural
animal
and
sequences
GRH
content
hypothyroidism
in situ
Northern inhibits
blot analysis
The
hormone
single transcript which The latter
,
primarily
is further
hGRH(1-44)-NH2,
Treatment
on a subpopulation
into
signal
and
hypophysectomy,
with
arcuate
as tested
to conclude
feedback
Double and
SRIF binding
that
by
GH or SRIF
nucleus.
both axo-perikaryal
neurons.
and
neurons
in
regulation
of
effects of GH and IGFs on
peptide
a 108 amino and
to yield two equipotent
hGRH(1-40)-OH, 第68巻
in
at least in part by SRIF or GH.
GRH gene encodes
processed
by
of GRH-containing
possible
to inhibitory
the
of
difference
hypothalamus
of animals
and SRIF—containing
of the human
is cleaved
the regulation
GRH mRNA as well
caused
in the hypothalamic
is mediated
and as
The
from
limited
as well
in GRH mRNA levels
GRH and SRIF has shown
related
a
biosynthesis
to study
metabolism.
deficiency
It is therefore
GRH gene expression,
prepro-hGRH, pro-hGRH.
nucleus.
GRH
in hypothalamic
an increase
GRH-
Although
only
of the GRH gene.
in a decrease GH
are demonstrated
arcuate
GRH gene expression, hypothalamic
between
is
techniques
and rat GRH cDNAs
hybridization.
(SRIF),
somatotrophs. there
regulating
its
causes
for hypothalamic
mRNA
as
while
dwarfism
pituitary
an opportunity
well
hypothalamic
peptide , somatostatin
hybridization
specific regulation to result
or in situ
axo—- axonal connections
the hypothalamic
as
GRH gene expression
immunocytochemistry
GH receptor
have provided
secretion
secretion
or genetic
the increased
and
is a stimulatory
characterized,
mechanisms
PCR
tissue -
and
been
in
GH excess has been shown as
of GH in anterior have
in both mouse
has also suggested
(GRH)
an inhibitory
and hormonal
models
expression
5' -untranslated placenta
and secretion
progress
hGRF-transgenic
hormone
which , along with
several
of the
secretion.
GRH
(GH)-releasing
hormone
第10号
and
the
acid precursor,
remaining
peptide,
forms of the releasing
a carboxyl-terminal
peptide
1058
成 長 ホル モ ン分泌 促 進 因子 の遺 伝 子発 見 並 び に分 泌 調節(片 上,他1名)
(hGCTP)
of unknown
function.
hGRH-prohormone
into
Studies
that hGRH(1-40) -OH
is derived
has been found
in extrahypothalamic
and
forms
molecular
unanswered
until
plasma GRH, the
the
which
tract
GRH
in
Since
nomal
of a highly
human
pancreas
in
major
have
remained
immunoassay
for
mainly
molecular
as yet unidentified,
Gene expression,
GRH
the origin
blood is produced
three
and a hydrophobic, hormone,
enzyme
of
evidence
immunoreactive
in the blood, subjects
sensitive
its
the processing
and provide
degraded
that hGRH in the peripheral
and
hormone —releasing
Hypothalamic
and hGCTP,
sites and is rapidly
development
demonstrates
mice demonstrate
of hGRH
from hGRH(1-44)-NH2.
hGRH(1-44)NH2
Key words : Growth
forms
of circulating recent
gastrointestinal
hGRH(3-44)NH2,
in transgenic
both mature
by
forms,
form of hGRH.
Secretion,
control
は じめ に 下 垂 体 成 長 ホ ル モ ン(GH)分
泌 は 視 床 下 部 由 来 の 分 泌 促 進 作 用 を 有 す るGH分
H)1)2)と 抑 制 性 の ソ マ トス タ チ ン(SRIF)3)に と も に ペ プ チ ドの RHの
よ っ て 調 節 され て い る。 視 床 下 部GRHな
ら び にSRIF
一 次 構 造 な ら び に コー ドす る遺 伝 子 が 単 離 同 定 さ れ て い る4)∼7)。 現 在 ま で に,G
合 成 ・分 泌 は 中枢 神 経 系 を 介 す る種 々 の 神 経 刺 激 に影 響 さ れ ,さ
らに 末 梢 か らの フ ィー ドバ ッ
ク調 節 や 代 謝 性 調 節 を 受 げ る こ と も 明 ら か に さ れ て い る8)。最 近,組 のPromotorが
泌 促 進 因 子(GR
解 明 さ れ た こ と9),GRHmRNAの
織 特 異 的 なGRH構
造 遺伝 子
発 現 に 関 してin situ hybridization法
な らび に
Northern
blot解 析 法 な ど の 定 性 的 な ら び に 定 量 的 解 析 方 法 が 進 歩 した こ と10),hGRH-transgenic
mouseの
作 成 技 術 が確 立 した こ と11)など に よ り当 研 究 領 域 で の 進 歩 が 著 しい 。
本 稿 で は,現
在 ま で に 得 られ た 視 床 下 部GRHの
れ わ れ の 下 垂 体GHのnegative
feedbackに
遺 伝 子 発 現 と分 泌 調 節 に 関 す る研 究 成 果 を,わ
関 与 す る視 床 下 部 機 構 と末 梢 で のGRHの
代謝 に関す
る成 績 も交 え て 概 説 す る。 GRHの
遺伝 子構 造 と発現
従 来 の 遺 伝 子 構 造 の うち,exon で,続
遺 伝 子 は6つ のexon(exon 20Kbで (exon
1の さ らに 約10Kb上
流 域 に 新 しいexon(exon
い て マ ウ ス13)でも見 い だ さ れ た こ と よ り,図1に 1a,1b,2,3,4,5)と5つ
示 す よ う に,マ
のintronか
あ る 。 新 た に 見 い だ され たexonlaは
ラ ッ トGRH-1Kbの
流 域 数Kbの
間 の塩 基 配 列 に は途 中 の 相 同 性 の 低 い 約200bpを
%の 相 同 性 が 認 め ら れ る13)。これ ら の 上 流 域promotorに 基 配 列 は 認 め られ ず,転
ら構 成 さ れ,そ
写調 節 因子 の
はTATAやCAAT
一 つ で あ るPOU-domain蛋
ッ ト12)
の 大 き さは 約18∼
胎 盤 組 織 の み で 発 現 す るの に 対 して,従
1b)は 視 床 下 部 の み で 発 現 す る。 そ して,exonlaの5'上
の-860と
1a)が,ラ
ウ ス お よ び ラ ッ トGRHの
う ち,マ
来 のexon
1
ウ スGRH
除 い て,約83∼88 boxに
相 当 す る塩
白 質 の結 合 部 位 あ る い は そ れ に
近 似 した 塩 基 配 列 が認 め られ る。 そ して,組
織 特 異 的 なaltemative
部 で はnoncoding に よ り,マ
exon
promotorに
よ り,胎 盤 組 織 で はnoncoding
1bが 転 写 され る。 つ ぎ に,各
組 織 共 通 のcoding
ウ ス で は103個 の ア ミ ノ酸 か ら な るpreproGRH(-30-+73)[signal 第68巻
第10号
exon
exon2-5の
1a ,視 床 下 転 写 ・翻 訳
peptide ,N端
ぺ
日
プ チ ド:mGRH(1-42)OH,C端 (-30-+74)[signal
本
内
分
泌
学
会
雑
誌
1059
ペ プ チ ドGRH(44-73)]が,ラ peptide,N端
ッ トで は104個
ペ プ チ ド:rGRH(1-43)OH,C端
のprepro-GRH
ペ プ チ ドrGRH(45-74)]
が産 生 され る。
図1.マ
ウ ス,ラ
ッ トと ヒ トのGRH
genomic
DNAの
構 造 な ら び に ヒ トGRH
の 生 成 過 程 の 模 式 図.
一方
,ヒ
トhGRH遺
伝 子 は 第20番
だ 同 定 さ れ て い な い が,恐 床 下 部prepro 域 に は,真
GRHは
目の 染 色 体 上 に あ り,マ
ウ ス や ラ ッ トの よ うなexon
ら く,同 様 の 構 造 を 持 つ も の と考 え ら れ る 。 図1に 示 す よ うに,ヒ
マ ウ ス や ラ ッ トの 視 床 下 部prepro-GRHと
核 生 物 の 遺 伝 子 転 写 お よ びRNA
processingに
転 写 開 始 点 で あ るmRNAのcapping部
位 か ら-30bpお
び"CAT
列 が み られ る 。
名 付 け られ たDNA配
そ れ 以 外 に も,-23bpか ら れ て い る 。 一 方,マ
ら-109bpの
関 与 す る こ と が 知 ら れ て い る 一般 的 な
く と も そ の 高 い 相 同 性 が あ る13)。そ して,さ 450bpに
認 め ら れ る 。 そ れ 以 外 に も,マ
responsive
element),GRE(glucocorticoid
位 に 類 似 し た 塩 基 配 列 が 認 め られ,後
ト視 床 下 部GRHで
よ び-75bp上
流 域 に"TATA
塩 基 配 列 に マ ウ ス や ラ ッ トhGRHと86%の
ウ ス と ラ ッ トの 間 で は,マ
ト視
同 様 に,遺 伝 子 の 上 流 域 と下 流
特 長 を全 て 兼 ね 備 え て い る こ と が 明 らか に され て い る。 す な わ ち,ヒ
box"と
1aは 未
ウ ス 視 床 下 部GRHの
は,そ box"お
の よ
相 同 性 が認 め
上 流 域-452bpま
で は少 な
ら に 上 流 域 に 別 の"TATAbox"が,-245bpとウ ス 視 床 下 部GRHの regulatory
element)やAP-1な
で 述 べ る よ う に,視 第68巻
第10号
上 流 域 に はCRE(c'AMP
床 下 部GRHの
どの転写 因子 結合 部 遺 伝子 発 現調 節機 構 を
1060
成 長 ホル モ ン分 泌促 進 因 子 の遺 伝 子発 見 並 び に分 泌調 節(片 上,他1名)
理 解 す る う え で 興 味 深 い 。Poly(A)鎖
結 合 部 位 の31bp上
流 にAATAAと
い う真 核 生 物 の 遺 伝 子
間 で よ く保 存 さ れ て い る 塩 基 配 列 が 含 ま れ て い る 。 こ の 配 列 はRNA鎖
の 切 断 と ポ リ(A)鎖
結合
の シ グ ナ ル と考 え ら れ て い る。 ヒ トGRHの 目のSerが
場 合,exon
5のalternative
splicingに
欠 落 したprepro-hGRH(107)が
で あ るhGRH(1-44)NH2と
未 だ 生 物 作 用 の 不 明 なhGRH-C端
い は ヒ トGRH(47-77)が
ペ プ チ ド ヒ トGRH(47-76)あ
隆 起 に そ の 神 経 終 末 を投 射 し,同 部 に お い て 下 垂 体 門 脈 血 中 へGRHを 下 垂 体 前 葉 細 胞 に 達 し,GH分 一方
,SRIF神
る
局在 有 細 胞 の 大 部 分 は 視 床 下 部 弓 状 核 に 存 在 し,そ れ 以 外 に,視
視 床 下 部 腹 内 側 核 周 辺 に見 ら れ る14)∼16)。 そ の 内,弓 状 核 に 存 在 す るGRH神
Hは
うち,103番 り,成 熟 ペ プ チ ド
生 成 され て くる 。
視 床 下 部GRHとSRIFの 視 床 下 部GRH含
よ り,prepro-hGRH(108)の
で きて く る 。 こ れ ら前 駆 体GRHよ
床 下部 腹外 測部 と
経 細 胞 は 主 と して 正 中
放 出 す る。 放 出 さ れ たGR
泌 を 促 進 す る。
経 細 胞 は 視 床 下 部 の ほ と ん ど の 神 経 核 に 存 在 す る が17),そ の う ち,正
中隆 起 にそ
の 神 経 終 末 を 投 射 して い る細 胞 体 は 大 部 分 が 視 床 下 部 室 周 核(視 交 叉 上 核 の 前 縁 か ら第3脳 室 の 周 囲 を 薄 く取 り巻 き,後 方 は 弓 状 核 の 中 央 上 部)に 存 在 し,そ れ 以 外 に,室 索 前 野 に 存 在 す る18)19)。 弓 状 核 のSRIF神 経 終 末 を 投 射 せ ず,他 近 年,免
有 細 胞 と異 な り,正 中 隆 起 に は そ の 神
の 働 き を して い る も の と考 え ら れ て い る。
疫 細 胞 化 学 の 進 歩 に よ っ て,同
す る こ と が 可 能 と な り,視 床 下 部 のGRH神 同 定 さ れ た20)。す な わ ち,弓 末 にSRIF含
経 細 胞 は,GRF含
傍 核(小 細 胞 性),内 側 視
一 神 経 細 胞 内 で,2つ 経 細 胞 とSRIF神
以 上 の 神 経 伝 達 物 質 を 分 離 ・観 察 経 細胞 相互 の形 態学 的神 経 回路網 が
状 核 腹 内 側 部 に 存 在 す るGRH神
経 細 胞 の 細 胞 体 な らび に そ の 神 経 終
有 神 経 細 胞 突 起 が 終 始 して い る こ と が 免 疫 電 子 顕 微 鏡 レ ベ ル で 証 明 され た 。 そ の後,
同 神 経 回 路 網 の 存 在 が 追 加 確 認 さ れ た21)。ま た,逆
に,GRH神
経 細 胞 終 末 がSRIF神
に連 絡 して い る こ と が 免 疫 組 織 化 学 レベ ル で 報 告 され て い る22)。大 脳 辺 縁 系 とGH分 視 床 下 部SRIF神 最 近,ラ
経 細 胞周 囲 泌 に関 与す る
経 細 胞 の 機 能 的 連 絡 に か ん して は 鈴 木 に よ る 総 説 が あ る23)。
ッ ト視 床 下 部 の 隣 接 凍 結 切 片 に お い て,125I-SRIFの
疫 組 織 化 学 も し くはGRH
in situ hybridizationを
オ ー トラ ジ オ グ ラ フ ィ とGRH免
組 み 合 わ せ て,弓
状 核GRH産
生 細 胞 上 のSRIF
レセ プ ター 発 現 を 検 討 した 成 績 が 発 表 さ れ た24)25)。 こ れ らの 成 績 に よ る と ,弓 状 核GRH神 の3-4割
にSRIFレ
以 上 の成 績 は,視
経 細胞
セ プ タ ー が 同定 さ れ て い る。 床 下 部 弓 状 核 のGRH神
ら の神 経 連 絡 に よ り,細 胞 表 面 のSRIFレ
経 細 胞 の 少 な くと も一 部 は 室 周 核 のSRIF神 セ プ タ ー を 介 して ,シ
経細胞か
グ ナ ル 伝 達 を受 け る と い う神 経 回
路 が機 能 す る可 能 性 が 示 唆 さ れ る。 GRHの
分泌調 節
視 床 下 部 は 生 理 学 的 条 件 下 で は 解 剖 学 的 に 到 達 困 難 で,ま
た,微
量 の 視 床 下 部GRH含
量 を測定
で き る鋭 敏 な 測 定 法 も無 か っ た 。 そ の た め,GRHの
分 泌 調 節 に 関 す る研 究 で は ,抗SRIFあ
は 抗GRH血
泌 を 指 標 に して 視 床 下 部GRH神
清 を 投 与 した 実 験 動 物 で の 下 垂 体GH分
を 推 測 す る と い う間 接 的 な 評 価 方 法 が 従 来 用 い られ た 。 視 床 下 部 切 片 を 用 い たin H遊
離 に お よ ぼ すGH,SRIF,IGF-Iの
作 用 が 検 討 さ れ た が,本
と よ り,最 近 で は 余 り用 い られ て い な い 。 ま た,下
るい
経 細胞機 能
vitroの 系 でGR
系 も不 安 定 で 鋭 敏 さ に 欠 げ る こ
垂 体 門 脈 血 中 のGRHを
測 定 した り,視 床 下 部
正 中 突 起 に 微 小 カ ニ ュー レ を留 置 し局 所 を 潅 流 す る方 法 も試 み られ て い る が ,麻 酔 下 で の 下 垂 体 摘 第68巻
第10号
日
本
内
分
泌
学
会
雑
1061
誌
除 した 動 物 を 用 い る と い う非 生 理 学 的 な 実 験 条 件 下 で の 検 討 で あ っ た り26),GRH測 も あ り,十 分 な 成 績 は 得 ら れ て い な い 。
図2.視
床 下部 室 周 核 のSRIF神 GH分
経 細胞 を電 気 破 壊 した無 麻 酔 ラ ッ ト(MPO)の
泌 に及 ぼす 抗GRH血
清(GRF-AS)投
同 ラ ッ トに おけ る視 床 下部 切 片 か らのGRH遊 で はGHの
自然 分 泌(GH
投 与 のMPOラ るが,GRF-ASを (B).電
surge)が み られ る(A).正
ッ トで はGHの
投 与 したMPOラ 離 はSHAMと
H含 量 は低 下 して い る(C).文
よび
常 家兎 血 清(NRS)
基 礎 値 が 上昇 し,GHsurgeは
気 破 壊 後4日 目のMPOラ
激 に よ るGR}1遊
与 の 影 響(A,B),お
離(C).対 照 ラ ッ ト(SHAM)
ッ トで はGHの
消 失 して い
分 泌 が 低下 して い る
ッ ト視 床 下 部切 片 か らの高 カ リウ ム刺 比較 して亢 進 して い た が,視 床 下 部GR 献28よ り改 編.
第68巻
第10号
定感 度 の問 題
1062
成長 ホル モ ン分 泌 促進 因子 の遺 伝 子 発 見 並 び に分泌 調 節(片 上,他1名)
GH分
泌 に は,そ
negative
され,抗SRIF血 GHの
れ 自身 の 分 泌 が 視 床 下 部 のGRHあ
feedback機
構 が 存 在 す る。GHを
清 の 投 与 に よ り,こ れ ら のGH分
分 泌 抑 制 作 用 の 少 な くと も一 部 に は,視
feedback機
る い はSRIF分
泌 抑 制 作 用 が 部 分 的 に 解 除 さ れ る こ と か ら,
床 下 部SRIF分
構 が 関 与 して い る と 考 え ら れ て い る。GHそ
特 別 な 標 的 臓 器 は な い が,各
組 織 で 産 生 され るIGF-I(ソ
long loop feedback機
マ トメ ヂ ンC)が
垂 体 摘 除 の の ち,GH以
充 し た ラ ッ トに お い て は,視 作 用 はGHの
泌 亢 進 はIGF-Iに
long
loop
外 の 甲 状 腺 ホ ル モ ン,コ ー チ ゾ ンな らび に テ ス トテ ロ ンを 補
床 下 部 切 片 か ら のGRH遊
よ る抑 制 作 用 の 低 下,GHそ
れ た 。 そ こで,視
離 は 亢 進 し,含 量 は 低 下 し て い る解)。こ の
床 下 部SRIFか
れ 自体 の もつGRH細
らGRH細
有 細 胞 を 破 壊 した ラ ッ トに お い て,視
離 も亢 進 した(図2)。
損 に よ り,GRH神
胞 へ の抑 制 作 用 の 消 失 が 考 え ら
床 下 部 で のSRIFに
よ るGRH産
生細 胞 の抑制 作用 に
度 は 上 昇 し,視 床 下 部 切 片 か
この 事 実 は 視 床 下 部SRIFがGRH神
経 細 胞 に対 して 抑 制 的 に
作 用 して い る こ と を 示 唆 して い る。 さ ら に,視 床 下 部SRIFをcycteamineに た場 合 で も,視 床 下 部GRH分
経細
胞 に い た る 神 経 繊 維 連 絡 を 解 剖 学 的 に 切 断 した り,S
つ い て さ らに 検 討 を加 え た28)。こ れ らの ラ ッ トに お い て ,血 中GH濃
よ り選 択 的 に 枯 渇 し
泌 細 胞 の 免 疫 活 性 は 亢 進 した こ と よ り29),視 床 下 部 に お い てSRIF
神 経 細 胞 は 上 記 の 神 経 回 路 網 を 介 してGRH産 最 近,無
生
泌 が抑
清 の 前 投 与 に よ り部 分
よ るGHのnegative
補 充 に よ り,部 分 的 に 解 除 さ れ た 。 こ の機 序 と して,GH欠
胞 へ のSRIFに
らのGRH遊
局 所 に お け るGHの
節 に 関 与 して い る も の と考 え られ て い る 。
さ らに,下
RIF含
short loop
与 に よ り,自 然 の 脈 動 的 なGH分
構)。 この 抑 制 作 用 は 抗SRIF血
的 に 解 除 さ れ た こ と よ り,視 床 下 部SRIF分 feedback調
泌 亢 進 を 介 す るnegative
の も の は 他 の 下 垂 体 ホ ル モ ン と 異 な り,
物 作 用 を 介 在 して い る もの と考 え られ て い る。IGF-I投 制 さ れ る(negative
泌 を 介 して 作 用 す る と い う
末 梢 も し くは 脳 室 内 に急 性 投 与 す る と そ の 分 泌 が 抑 制
生 細 胞 に 抑 制 的 に 作 用 して い る も の と考 え られ る 。
麻 酔 下 の 羊 の 下 垂 体 門 脈 血 を ス トレ ス な しで 連 続 的 に 採 取 す る 方 法 が 可 能 と な り ,下 垂 RIA(ヒ トGRHのRIAを 使 用)30)とhomologous RIAを 用い
体 門 脈 血 中 のGRHをheterologous
て検 討 した 成 績 が 発 表 さ れ た31)32)。heterologous RIAを とSRIFの
間 には ほ とん ど相 関は認 め られ なか った。
無 麻 酔 下 の 羊 に お い て ス ト レス は ヒ トと 同 様 にGHを のGRH濃
度 も上 昇 して い た31)。さ らに,SRIF誘
門 脈 血 中 のGRH濃
度 も 同 時 に 低 下 し,SRIF誘
濃 度 の み な らず 下 垂 体 門 脈 血 中 のGRH濃 以 上 の 成 績 は,SRIFが GRH遺
視 床 下 部GRH分
も ち い た 検 討 で は 下 垂 体 門 脈 血 中 のGRH 一 方 ,homologus 上 昇 させ,同
RIAを
もち いた検 討 で は
時 に採 取 した 下 垂 体 門 脈 血 中
導 体 を 投 与 した 場 合 に はGHの
み な らず 下 垂 体
導 体 の 作 用 が 消 失 す る と 反 跳 的 に 末 梢 血 中 のGH
度 も 同 時 に 同 程 度 上 昇 した32)。 泌 に対 して 抑 制 的 に 作 用 して い る こ と を 示 唆 して い る 。
伝子 の発現 調 節
組 織 に於 け る ホ ル モ ンの 含 量 は 合 成 と分 泌 ・分 解 の 総 和 と して 現 さ れ る。 合 成 能 を知 る指 標 と し て3H-thymidineの わ っ て,最
取 り込 み や35S-methionineを
近 はDNAか
用 い るpulse-chase実
ら各 視 床 下 部 ホル モ ン のmRNAへ
な らび にin situ hybridization解
験 な どの煩 雑 な方 法 に代
の 転 写(遺 伝 子 発 現)をNorthem解
析
析 を 用 い て そ れ ぞ れ 定 量 的 あ る い は 定 性 的 に検 討 す る こ と が 可 能
と な った 。 下 垂 体 摘 出 ラ ッ トで は 視 床 下 部GRH含 進 す る と い う実 験 成 績 はGH欠 て い る27)。そ こ で,下
量 が 低 下 し,一 方,視
損 に よ り視 床 下 部GRH産
垂 体 摘 出 ラ ッ ト用 い て 視 床 下 部GRHの 第68巻
第10号
床 下 部切 片 か ら のGRH遊
離 は亢
生 と代 謝 が 亢 進 して い る 可 能 性 を示 唆 し 産 生 能 を知 る た め にGRHmRNAを
日
測 定 して み る と33),予 想 通 りGRH
本
内
分
mRNAは7日
充 に よ り増 加 して い たGRH
減 少 した が,GH補
充 無 しでT4,コ
垂 体GH含
会
雑
1063
誌
mRNAは
ー チ ゾ ン,テ
間 を 越 え て 高 値 を維
下 垂 体 摘 出 ラ ッ トの64%ま
で 部分 的 に
ス トス テ ロ ン の み の 補 充 で は 効 果 が な か っ た 。
量 の 低 下 した 甲 状 腺 機 能 低 下 症 ラ ッ トの 視 床 下 部GRHmRNAは
お り34),T4の 補 充 の み な らずGH補
充 に よ り,増 加 し た視 床 下 部GRHmRNA含
と か ら,甲 状 腺 ホ ル モ ン 低 下 が 下 垂 体GHの HmRNAが
学
後 に 対 照 の 約6倍 と な り,2週
持 し て い た 。GH補
さ ら に,下
泌
合 成,分
増 加 して 量 が 低 下 した こ
泌 を低 下 さ せ た 結 果,2次
的 に視 床 下 部GR
増 加 した も の と考 え られ た 。
しか し,こ れ ら のGH欠
損 も し くは 分 泌 不 全 症 に お い て,視
亢 進 して い る機 序 がGH欠
損 のGRH神
床 下 部GRHの
経 細 胞 へ の 直 接 作 用 で あ る の か,あ
分 泌 な らび に 産 生 が る い はSRIF神
を 介 す る二 次 的 な もの な の か は 不 明 で あ っ た 。
図3.甲
状 腺 機 能 低 下 症 ラ ッ ト(THX)視
症 下 部 弓 状 核GRH神
織 化 学(IMMUNOH工STOCHEMISTRY)な (IN
SITU
ら び にin
HYBRIDIZATION).対
で はGRH神
照 ラ ッ ト(CONT)に
比 較 し,THX
経 細 胞 数 な ら び に 遺 伝 子 発 現 は 亢 進 し て い る.一
に 甲 状 腺 ホ ル モ ン を 補 充 し た ラ ッ ト(THX+T4),THXにGHを た ラ ッ ト(THX+GH)お (THX+SRIF)で
経 細 胞 の 免疫 組 situ hybridization
よ びTHXにSRIF誘 は,THXに
み ら れ たGRH神
発 現 の 増 加 反 応 は 抑 制 さ れ て い る.
第68巻
第10号
方,THX 補充 し
導 体 を補 充 した ラ ッ ト 経 細 胞 数 な らび に遺伝 子
経細 胞
1064
成長 ホル モ ン分 泌 促進 因子 の遺 伝 子 発 見 並 び に分泌 調 節(片 上,他1名) そ こ で,わ
れ わ れ は,下
垂 体GHの
影 響 を な くす る 目 的 で,下
び に分 泌 障 害 を きた した 甲 状 腺 機 能 低 下 症 ラ ッ トに 於 て,外 GRH神 NAの
経 細 胞 数 の 減 少,Northern 減 少 を 観 察 した(図3)。
blot analysisな
一 方,GHあ
垂 体 摘 出 ラ ッ トやGH合
因 性 にSRIF誘
ら び にin situ hybridazationに
る い はT4の
よ るGRHmR
補 充 に よ っ て も同 様 に,視 床 下 部GRHの
遺 伝 子 発 現 は 抑 制 され た(図4)。
図4.下
垂 体 摘 除 ラ ッ ト(HPX)な H神
経 細 胞 数(GRH
ら び に 甲 状 腺 機 能 低 下 症 ラ ッ ト(THX)に
immunohistochemistry),GRH遺
hybridizationな
ら び にNorthern
あ る い はSRIF誘
導 体 投 与(SRIF)の
る こ と を 示 し,→
図5.視
床 下部GRHの セ プ ター を,+は
analysis)に 影 響.↑
お け るGR
伝 子 発 現(in
は 対 照 ラ ッ トと 比 較 し て 増 加 して い
遺 伝 子 発 現 と分 泌 調 節 に関 す る模 式 図.Rcは 特異的 レ 促 進 作 用 を,-は 抑 制 作 用 を示 し,?は 作 用 が不 明 な こ
と を示 す. 第10号
situ
及 ぼ す 甲 状 腺 ホ ル モ ン(T4),GH
は 改 善 さ れ た こ と を 示 す.
第68巻
成な ら
導 体 を 投 与 した と こ ろ,
日
GHの
本
内
分
泌
学
会
雑
誌
1065
末 梢 あ る い は 脳 室 内 投 与 に よ る生 理 的 な 下 垂 体 成 長 ホ ル モ ン分 泌 の 抑 制 効 果 は 抗SRIF家
兎 血 清 の 前 投 与 に よ り解 除 さ れ る こ と35),成 長 ホ ル モ ンの 脳 室 内 投 与 が 下 垂 体 門 脈 血 中 のSRIF濃 度 を 上 昇 さ せ る こ と36),室 周 核 な らび に 室 傍 核 のSRIF神 子 が 発 現 して い る こ と37),視 床 下 部 弓状 核 のGRH神 SRIF神
経 細 胞 突 起 がGRH神
床 下 部GRH遺
経 細 胞 の 約50%にGHレ
経 細 胞 にSRIFレ
セ プ ター の 遺 伝
セ プ ター が存 在 す る こ と24)25),
経 細 胞 に連 絡 して い る こ と20)21)な ど を 重 ね て 考 え る と,GHに
伝 子 発 現 抑 制 作 用 の 少 な く と も 一 部 は 視 床 下 部SRIFの
よ る視
分 泌 促 進 を 介 す る も の と考
え られ る 。 以 上 の よ う なSRIFの
視 床 下 部 神 経 回 路 を 介 す る弓 状 核GRH神
抑 制 作 用 以 外 に,GHも
し くはIGF-Iな
可 能 性 が 最 近 報 告 さ れ て い る38)。GHも 各 神経 核 を含 む視床 下部切 片 を 察 した と こ ろ,GHのicv投
よ り,GHとIGF-Iは
与 で はGRHな
全 体 のSRIF
mRNA(Nortern解
と39),弓 状 核GRF神
伝 子発 現 抑制 の
損 ラ ッ トの 脳 室 内(icv)投
mRNAは
変 化 せ ず,GRH
mRNAと
mRNAが
も に 減 少 した 。 こ の こ と
存 在 す る こ と,GH投
析)は 変 化 せ ず と も33),室 周 核 のSRIF遺 セ プ タ ー 陽 性 細 胞 数(5%以
与 に よ り視 床 下 部
伝子 発 現 は増加 す る こ
下)はSRIFレ
セ プ ター 陽 性 細 胞
比 較 して 少 な い40)とい う実 験 成 績 を 考 え 合 わ せ る と,GH分
構 に お い て,GHが
与 し,
量 の 変 化 を観
伝 子 発 現 を 直 接 抑 制 す る も の と考 え られ る。 しか
損 ラ ッ トの 視 床 下 部 に はSRIFが
経 細 胞 のGHレ
伝 子 発現 の
らび にSRIFmRNA含
ら び にSRIF
異 な っ た 機 序 でGRH遺
い たGH欠
数(30∼40%)に
し くはIGF-IをGH欠
与 で は 視 床 下 部 切 片 中 のSRIF
しな が ら,用
feedback機
ど の 液 性 因 子 を 介 す る 直 接 的 なGRH遺
一 塊 と して 取 り出 し,GRHな
著 明 に 減 少 した 。IGF-Iのicv投
経 細 胞 で のGRH遺
弓 状 核GRH神
経 細 胞 に 直 接 作 用 してGRH遺
泌 のshort
loop
伝 子 発 現 を抑 制 す る
か 否 か に つ い て は さ ら に検 討 を 要 す る もの と考 え られ る。 図5に 現 在 ま で に 得 ら れ たGRH遺
伝子
発 現 調 節 機 構 の 概 略 を示 す 。 GRHのPosttranslational
Processing
末 端 肥 大 症 を 呈 した 患 者 の 異 所 性GRH産
生 腫 瘍 か ら単 離 さ れ た ヒ トGRHは3種
即 ちGRH(1-37)OH,GRH(1-40)OHお
よ びGRH(1-44)NH2と
の ヒ トGRHが
Processingを
ま た,ヒ
ど の よ うなPosttranslational トGRHを
投 与 後 の 血 漿GRH測
と か ら,Frohmanら
は ヒ トGRH(1-44)NH2を
ヒ トに投 与 した 後,お
よ び 血 液 と一 緒 に試 験 管 内
用 い て 分 析 した41)。そ の結 果,ヒ
を 外 因 性 に 投 与 した 場 合 も試 験 管 内 と 同 様 に,比
生 成 機 序 は,末
トGRH(1-44)NH2
較 的 速 や か に 生 物 活 性 の な い ヒ トGRH(3-44)
分 解 され る こ と を 明 ら か に し た 。 し か しな が ら,内
よ び ヒ トGRH(1-40)OHの
して 報 告 され た1)2)。こ れ ら
受 け 生 成 さ れ る の か は 不 明 で あ った 。
定 か ら得 ら れ た 血 中 半 減 期 は 生 物 活 性 を 反 映 し な い こ
に 添 加 した 後 に そ れ らの 分 解 産 物 をHPLCを
NH,に
類 の 分 子 型,
梢 血 中GRH濃
因 性 の ヒ トGRH(1-44)NH2の 度 が 低 い こ と と,ヒ
代謝 お トGRH産
生腫
瘍 が 稀 な こ と もあ っ て 不 明 の ま ま で あ っ た。 近 年,transgenic れ た(図6),本 GRH濃
animal作
度 は ヒ トGRH産
トGRHへ
トGRH産
ウ ス下 垂 体 の ヒ トGRH産
の 取 り込 み をpulse-chase実 りGRH(1-45)OHが
生 に 基 づ く末 端 肥 大 症 の マ ウ ス が 作 ら 生 細 胞 か ら な る過 形 成 を 示 し,血
生 腫 瘍 に基 づ く末 端 肥 大 症 患 者 と同 様 に,高
な っ た42)。そ こ で,transgenicマ
GRHよ
成 法 が 進 歩 し,ヒ
マ ウ ス の 下 垂 体 は 主 と してGH-GRH産
濃 度 を 示 す こ と が 明 らか と
生 細 胞 を用 い て,35S-methionineの
験 に よ り検 討 し た43)。図7に 示 す よ う に,ヒ
まず 産 生 さ れ,つ
生 成 さ れ る こ とが 明 ら か と な っ た 。 次 に,同
い でGRH(1-44)NH2よ
じ くhGRH-transgenic
第68巻
第10号
中ヒ ト
ヒ
トprepro-
りGRH(1-40)OHが miceの
各 臓 器 で 発 現 して い
1066
成 長 ホル モ ン分泌 促 進 因子 の遺 伝子 発 見 並 び に分 泌 調節(片 上,他1名)
る ヒ トGRHの
分 子 型 を 検 討 した と こ ろ44),マ ウ ス 下 垂 体 と 膵 臓 で は,GRH(1-44)NH2,GRH
(1-40)OHな
ら び に疎 水 性 の 高 い 分 子 型 が 認 め ら れ た 。
GRH(3-44)NH2が
図6.ヒ
トGRH western大
図7.ヒ
一 方,本
マ ウ ス血 中 で は 主 と して ヒ ト
認 め られ た 。
トGRH
transgenicマ 学Mayo博
transgenicマ
ヒ トGRHのpost GRH(-30∼+77)は alpha-amidating トGRH(1-44)NH2が
ス ス の 下 垂 体.巨
大 な 下 垂 体 が 見 られ る.North-
士 よ り提 供.
ウ ス のGRH産
translational
生 下 垂 体 細 胞 で のpulse-chase法
processingを
示 す.文
献(43)よ
による
り 改 編.prepro-
種 々 のendopeptidase,carboxypeptidaseやpeptidylglycine monooxygenase(PAM)の 生 成 さ れ,さ
作 用 を 受 け,ま
ず,成
熟 ペ ペ チ ドヒ
ら に 分 解 を う け て ヒ トGRH(1-40)OHが
謝 さ れ る.
第68巻
第10号
代
日
図8.正
本
常 者 の 末 梢 血 中GR且 の ちHPLC分 NH2の
ま た,GRH産
内
分
泌
学
の 分 子 形 態.affinity
析 を お こ な っ た.↓
会
雑
columnで
誌
は ヒ トGRH(1-44)NH2な
1067
血 漿 中 のGRHを
溶 出 部 位 を 示 す.
生 の 気 管 支 悪 性 カ ル チ ノ イ ド症 例 に お い て 腫 瘍 組 織 中 な ら び に 血 中 の ヒ トGRH
の 分 子 型 を 検 討 した と こ ろ45),腫 瘍 組 織 中 に は ヒ トGRH(1-44)NH2な が 認 め ら れ,一
濃 縮 した
ら び にGRH(3-44)
方,患
者 血 中 の ヒ トGRHの
正 常 ヒ ト末 梢 血 中 に もGRH様
ら び にGRH(1-40)OH
主 要 な 分 子 型 はGRH(3-40)OHで
免 疫 活 性(GRH-LI)が
あ った。
証 明 さ れ て お り,視 床 下 部 機 能 を 反 映 す
る 可 能 性 が 示 唆 さ れ て きた が46),血 中 濃 度 が 低 く,ま た 視 床 下 部 以 外 の 上 部 消 化 管 に もGRH-LI が 証 明 され て お り47),末 梢 血 中 のGRH-LIの ら の 方 法48)に準 じて,正
由 来 と 分 子 型 は 不 明 で あ っ た 。 そ こで 筆 者 ら は石 川
常 ヒ ト末 梢 血 中 のGRH-LIを
抽 出 操 作 を くわ え る こ と な く,直 接,測
定
可 能 な ヒ トGRHのEIA法 を 確 立 し49),正 常 ヒ ト末 梢 血 中 のGRH-LIの 由 来 と分 子 型 を検 討 した 50) 。 す な わ ち,手 術 時 に 得 られ た ヒ ト肝 門 脈 血 と末 梢 血 中 の ヒ トGH,SRIF,GRHを 測 定 した 結 果, 下 垂 体 由 来 のGHは
肝 門 脈 血 と 末 梢 血 中 濃 度 に 有 意 差 を認 め な か っ た が,GRH-LI濃
あ る い は膵 臓 由 来 と考 え られ るSRIFと 梢 血GRH-LIは 中GRH-LIが
主 と して 消 化 管 も し くは 膵 臓 に 由 来 す る もの と結 論 さ れ た 。 こ の こ とは,末 各 種 のGH分
泌 刺 激 に 反 応 を 示 さず,食
よ く合 致 す る 。 さ ら に,図8に (1-44)NH2お
度 は消化 管
同 じ く,肝 門脈 血 が 末 梢 血 よ り高 値 を 示 した 。 従 っ て,末
示 す よ うに,正
梢血
物 摂 取 に よ り増 加 す る と い う成 績51)52)と も
常 ヒ ト末 梢 血 中 のGRHはGRH(3-44)NH2,GRH
よ び 疎 水 性 の 高 い分 画 と い う,3つ
の 主 要 な分 子 型 を と る こ と を 初 め て 明 ら か に し
た。 最 近,澤
野 ら は ヒ ト中 枢 神 経 系(CNS)の
正 常 お よ び 腫 瘍 組 織 抽 出 物 中 に お け る ヒ トGRH
(1-44)NH2の 代 謝 を し らべ た 結 果,正 常 大 脳 皮 質 抽 出 液 中 で は 末 梢 血 中 と は 異 な り,hGRH(30 -44)NH 2とhGRH(19-44)NH2へ 代 謝 され る こ と を報 告 した53)。 一方,脈 絡 膜 乳 頭 腫 抽 出 液 中 で はhGRH(1-11),hGRH(1-20),hGRH(12-44)NH2,hGRH(21-44)NH2,hGRH(30-44) NH2に 分 解 され る こ と を 見 い だ した 。 以 上 の 成 績 か ら,ヒ
トGRHの
分 解 ・代 謝 は 組 織
と な り,こ れ ら の 組 織 に 特 異 的 なposttranslational
腫 瘍 な らび に 種 族 に よ り異 な る こ と が 明 ら か processingの
解 明 す る うえ で 重 要 で あ る と結 論 付 け られ る。 第68巻
第10号
検 討 がGRHの
生物 学的 作用 を
1068
成 長 ホル モ ン分泌 促 進 因子 の遺 伝 子発 見 並 び に分 泌調 節(片 上,他1名)
ま とめ GRHの
遺 伝 子 発 現 調 節 機 構 に 関 す る研 究 は,構
GRH-transgenic RH遺
animalの
作 成,insitu
造 遺 伝 子 の 解 明 と,疾
hybridization法
とNorthern
患 モ デ ル 動 物 と して のh
blot解 析 法 の 導 入 に よ るG
伝 子 発 現 の 定 性 的 な らび に定 量 的解 析 の 進 歩 に よ り,最 近 目覚 ま しい 新 た な展 開 が み ら れ る。
な か で も,視
床 下 部GRH-SRIF遺
伝 子 発 現 機 構 の 解 明 に よ り,GH分
泌 のfeedback調
節 に関与
す る視 床 下 部 機 能 が 明 ら か に な りつ つ あ る。 ま た,GRHの さ ら に,従
微 量 定 量 法 の 開 発 に よ り,末 梢 血 中 のGRHの
由来 と分子 型 が 明 らか とな った。
来 の 測 定 法 で は 解 析 不 可 能 で あ っ た 生 理 学 的 な らび に 病 的 状 態 で のGRH分
泌 動態 も明
らかに されつ つ ある。 今 後,GRHの
遺 伝 子 発 現 と分 泌 調 節 機 構 の 解 明 を 通 じて,複
雑 な 視 床 下 部 機 能 が さ ら に解 明 さ
れ る こ と が 期 待 さ れ る。 謝辞 本 研 究 に 協 力 して い た だ い た 宮 崎 医 科 大 学 内 科 学 第3講 座,日
高 博 之 博 士,hGRH(1-44)NH2
の 高 感 度 測 定 法 開 発 に 協 力 して い た だ い た 宮 崎 医 科 大 学 第1生 化 学 講 座,石 助 教 授,hGRH-transgenic
mouseの
て い た だ い た 米 国Northwestem大
試 料 な ら び に マ ウ スGRH構 学,Mayo博
して い た だ い た 東 海 大 学 病 理 学 講 座,長
士,hGRH-transgenic
らび に 平 成2-3年
Guillemin
R,
Brazeau
hormone—-releasing Science 2) Rivier
3)
J, Spiess
Esch
J, Thorner
G, Ling N and Wehrenberg
a human
pancreatic
M and Vale W.
Brazeau
P,
Vale W,
hormone.
Science human
U, Monahan
pancreatic
Burgus
polypeptide
R,
that
that
Characterization
islet tumor.
Ling
N,
inhibits
analysis
of cDNA
somatocrinin.
Nature
Butcher
the
M,
secretion
J and Rosenfeld
WB.
caused
Growth
acromegaly.
of a growth
hormone
1982; 300: 276-278 Rivier
J and
Guillemin
of immunoreactive
growth
MG. Expression-—cloning
hormone-—releasing
JJ, Lomedico
PT,
Bhatt
RS,
Esch F, Ling N, Zeytin F, Brazeau P, Poonlan
6)
tumor
R.
pituitary
1973; 179: 77-79
Mayo KE, Vale W, Rivier
Gubler
度 文 部 省 科 学 研 究 費 補 助 金(国 際 学 術
献
P, Bohlen
from
factor from a human
cDNA encoding 5)
P,
factor
releasing
growth
成2-4年
1982; 218: 585-587
Hypothalamic
4)
標 本写 真 を提供
研 究助成 に よった。 文
1)
mouseの
村 義 之 教 授 に 深 謝 致 し ます 。 本 研 究 の 一 部 は,平
度 文 部 省 科 学 研 究 費 補 助 金(#02671104)な 研 究,#02044118)の
川 榮 治 教 授 と橋 田誠 一
造遺伝 子 に関 す る情報 を提 供 し
for the
precursor
factor.
Nature
and sequence 1983; 306: 86-88
Collier KJ, Hoffman
BJ, Bohlen
MS and Gage PL. Cloning
of human
growth
of a
P,
and sequence
hormone-—releasing
factor,
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Lund
cell-free
translations
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RNAs from anglerfish
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: Products
of
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6549-6552 7)
Taylor
WL,
Collier KJ, Deschenes
RJ, Weith 第68巻
HL and Dixon
第10号
JE. Sequence
analysis
of
日
本
内
分
泌
学
会
雑
誌
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for neuronal 第10号
M, Kagotani Y, Zhang R and regulation
of growth
hormone
1070
成長 ホル モ ン分 泌 促進 因子 の遺 伝 子 発見 並 びに分 泌 調 節(片 上,他1名)
secretion.
Neuroendocrinology
21) Horvath
S,
Palkovits
immunocytochemical between
growth
and growth
M,
evidence
Gores
T
for the
existence
hormone—-releasing
in the hypothalamus 22) Willoughby
1988; 47: 405-415 Arimura
A.
Electron
of bidirectional
hormone -
microscopic
synaptic
and somatostatin -
connections
containing
neurons
of the rat. Brain Res 1989; 481: 8-15
J, Brogan
M and Kapoor
hormone -
releasing
23) 鈴 木 光 雄:視
and
R. Hypothalamic
factor neurons
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hormone—-releasing
1992 ; 56 : 18-24
J, Dournaud
P, Berod A, Normand
J.
Growth
subpopulation
of somatostatin
secretion
receptor-—labelled
cells
of the rat arcuate
W, Kordon neurons
in the rat
light-—microscopic
receptors
arcuate
C and are
a
nucleus:
radioautographic
A
study.
1992; 56: 25-31 of growth
into the hypophysial-—portal
growth
in neurons
hormone-—synthesizing
and receptor
PM and Vale W. Patterns
27) Katakami
of somatostatin
E, Bloch B, Rostene
hormone-—releasing
in situ hybridization
Neuroendocrinology 26) Plotsky
factor immunoreactivity
Neuroendocrinol
Epelbaum
combined
GS. Colocalization
circulation
H, Downs TR and Frohman hormone
releasing
factor
hormone-—releasing
LA.
content
factor and somatostatin
of the rat. Science
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Effect of hypophysectomy and release
in the rat.
on hypothalamic
Endocrinology
1987;
120: 1079-1082 28) Katakami
H,
preoptic
Downs
area
Endocrinology
GS,
enhancement
McCarthy
of growth
hypothalamus.
Downs
hormone-—releasing unanesthetized
M, Magnan
Lombardi portal
Oliver
effect of hypothalamic releasing
factor
in
medial the
rat.
E,
P
factor
and
IJ
and
Beaudet (GRF)
A.
Cysteamine -induced
immunoreactivity
somatostatin/GRF
Thomas
somatostatin
V,
GB.
in
Giraud
Society,
M, Guillaume
portal
P,
in GH-RH
sheep during
acute
in arcuate
interactions
Measurement
hypothalamic-—portal
Pesce
第68巻
stress.
1992, Prog.
V, Conte-—Devolx
blood of conscious
GO,
Colao
and somatostatin emotional
San Antonio,
C. Effect of BIM 23014, a long acting
into hypophysial
and
for putative
Clarke
Guillaume
of Endocrine Cataldi
Zeitler
within
1990; 127: 2551-2560
G and Oliver C. Changes
E,
Inhibitory hormone -
of growth plasma
of
Merola
B,
J Clin Invest 1990; 86: 17-24
blood of conscious
Ann Meeting 32) Magnan
TR,
hormone
sheep.
GF,
evidence
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LA,
31) Cataldi
LA.
growth
hormone—-releasing
Morphological
30) Frohman
on
1988; 123: 1103-1109
29) Tannenbaum
neurons:
TR and Frohman
somatostatin
sheep. 第10号
Prog.
levels in hypophysial Prog.
& Abst.
of 74th
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B, Thomas
somatostatin
AM,
analog
F,
Chihara
on GH-RH
K and release
& Abst. of 74th Ann Meeting
of
日
本
内
Endocrine Society, San Antonio,
分
泌
学
会
雑
誌
1071
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hormone
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LA.
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hormone
(GH) -releasing
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K,
stimulates
Kashio
Clin Endocrinol
Y,
Kita T,
factor
T and Frohman
of growth
in the transgenic
LA.
mouse.
Medical management
hormone-—releasing
hormone
by a
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Y,
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Kaji H,
Abe H and Fujita
hormone-releasing
hormone
T.
L—dopa
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J
Metab 1986; 62: 466-473 Y, Masuda
A, Nakahara
K and Ling N. Distribution
immunoreactivity 48) Ishikawa
production
of hypothalamic
T, Kiyosawa
H, Shizume
GD, Downs
J Clin Endocrinol
release
47) Shibazaki
in human
E. Development
macromolecular
antigens-A
49) Hidaka H, Hashida enzyme
growth
of growth
tissue extracts.
application
review.
Clin Biochem
for human
H, Ishikawa growth
hormone-—releasing
J Clin Endocrinol
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immunoassay
M, Imaki T, Wakabayashi
I, Demura
hormone—like
Metab 1984; 59: 263-268
of sensitive
enzyme
immunoassay
for
1987; 20: 375-385
E and Matsukura
hormone-—releasing
S. Sensitive
hormone
sandwich
in plasma.
Clin
Chem Enzym Comms 1992; 4: 305-310 50) Hidaka H, Katakami S.
Human
measured
AM,
M, Koga Y, Hashida S,
hormone—-releasing
by sensitive
51) Sopwith plasma
growth
H, Tanigawa
Penny
hormone
enzyme immunoassay ES, Besser
immunoreactivity
growth
(hGRH)
Ishikawa
E and Matsukura
in hepatic
portal
plasma
. Submitted.
GM and Rees LH.
Stimulation
hormone
factor.
releasing
by food of peripheral
Clin Endocrinol
1985; 22:
337-340 52) Sopwith
AM,
circulating growth
Penny
hormone
53) 澤 野 眞 二,山
ES, Llytras
concentrations in normal
田正 三,大
げ る酵 素 に よ るGRFの
N,
Besser
GH and Rees LH.
of immunoreactive human
箸 信 一:ヒ 代 謝.日
subjects.
growth Clin Science
ト中 枢 神 経 系(CNS)の
内 分 泌 会 誌1992;68:2
第68巻
第10号
hormone
Dissociation releasing
between factor
and
1987; 72: 181-185 正 常 お よ び腫 瘍 組 織 抽 出 物 中 に お
