Acta Clinica Belgica International Journal of Clinical and Laboratory Medicine
ISSN: 1784-3286 (Print) 2295-3337 (Online) Journal homepage: http://www.tandfonline.com/loi/yacb20
Fonctions Plaquettaires Et Tests D’Appréciation De Ces Fonctions J.L. David To cite this article: J.L. David (1975) Fonctions Plaquettaires Et Tests D’Appréciation De Ces Fonctions, Acta Clinica Belgica, 30:3, 174-181, DOI: 10.1080/17843286.1975.11716993 To link to this article: http://dx.doi.org/10.1080/17843286.1975.11716993
Published online: 21 May 2016.
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FONCTIONS PLAOUETTAIRES ET TESTS D'APPRECIATION DE CES FONCTIONS
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J .L. DAVID*
INTRODUCTION
Au cours des dernieres annees, de nou velles techniques ont permis de preciser le caractere de di vers deficits fon ctionnels plaquettaires res ponsables de maladies hemorragiques. Par ailleurs, des anomalies fonctionnelles plaquettaires ont ete detectees chez des patients qui presentaient un tableau clinique ou biologique comportant des facteurs connus de hauts risques d'atherosclerose et d'affections thromboemboliques. II · reste cependant difficile de savoir quelle est !'importance de ces anomalies dans l'etiopathogenie de ces affections. La reponse a cette question conditionne !'utilisation raisonnable d'agents pharm acologiques dans Ia prevention de Ia th rombose, agents choisis notamment en raison de leur activite inhibitrice indiscutable visa-vis des fonctions plaquettaires testees in vitro. Dans ce domaine, !'experimentation clinique est d'interpretation difficile en raison des nombreux facteurs en cause tels que les habitudes hygienodietetiqu es, les dysfon ctionnements endocriniens et le stress, facteurs dont il est permis de penser qu 'ils peuvent modifier le fonctionnement des plaquettes. En outre, !'extrapolation a l'homme des resultats de !'experimentation menee chez !'animal reste delicate car Ia physiologie plaquettaire est particuliere a chaque espece animate. Des tors, !'etude des fon ctions des plaquettes humaines, in vitro, s'avere tres precieuse * Universite de Liege, Departement de Clin ique et de Semeiologie Medicales (Pr. A. Nizet), Secteur d' Hematologie (Pr. J. Hugues). Acta Clinica Belgica, 30, 3 (1975)
pour autant que les techniques utilisees soient suffisamment sensibles et que leur reproductibi li te soit satisfaisante. Les fon ctions plaquettaires sont principalement l'adhesivite, l'agregation et Ia « release reaction ». Les plaquettes interviennent aussi de fayon decisive au cours de differentes etapes de Ia coagulation . ADH ESIVITE
Le terme « adhesivite » designe l'accolement des plaquettes a toute surface non recouverte d'un endothelium . In vivo, l'adhesivite designe l'accolement des plaquettes a Ia couche sous-endotheliale dont les fibres de collagene semblent etre le composant le plus attractif. L'adhesivite peut etre etudiee in viv0, chez !'animal, au moyen de differents systemes ex perimentaux, difficilement applicables a Ia clinique (30). In vitro, !'observation microscopique de l'adhesivite des plaquettes, notamment au niveau d'une surface plane de verre, constitue une techn ique simple d'observation (1 2). Toutefois, ce genre de technique est mains largement uti Iisee en investigation clinique que Ia methode de mesure de Ia retenion des plaquettes au cours du passage d'un echantillon de sang sur une colonne de bille de verre (11 , 26, 3). Quoique designee comme mesure de l'adhesivite des plaquettes, cette technique mesure en fait trois phenomenes successifs : l'adhesivite proprement dite des plaquettes aux billes de verre qu'elles recouvrent d' une premiere couche, puis Ia formation d'agregats plaquettaires et en fin Ia stabilisation de ces agregats. Ces trois phenomenes dependent de plusieurs
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APPREci ATION DES FONCTIONS PLAQUETTAIRES
facteurs d'ordre biologique et d'ordre technique (25). Le phenomene d'adhesivite proprement dit depend de l'integrite des plaquettes puisque cette fonction est defectueuse si les plaquettes sont afibrinogenemiques ou thrombastheniques. La presence de fibrinogene et de calcium conditionne cette fonction. Publies it y a une quin zaine d'annees, les travaux fond amentaux de Hellem ant montre que Ia retention des plaquettes sur bille~ de verre dependait de Ia presence d' ADP dans le milieu (11). Des travaux plus recents ant precise I' origi ne et le role exacts de I' AD P. II semble que I'ADP n'intervienne pas dans le phenomene initial d'adhesion des plaquettes aux billes de verre mais qu' il contr61e le cours des etapes ulterieures de Ia retention des plaquettes. Le phenomene initial d'adhesion plaquettaire aux billes de verre s'accompagne de modifications morphologiques des plaquettes et d'une liberation de I' ADP intraplaquettaire dont depend le phenomene ulterieur d'adhesion des plaquettes entre elles ou agregation (19). Le calcium semble intervenir plus comme cofacteur de l'agregation que de !'adhesion des plaquettes aux billes de verre. II semble demontre actuellement que I'ADP provient surtout des plaquettes qui le liberent a Ia suite du stimulus que constitue leur contact avec les billes de verre. En effet, le rem placement des globules rouges , autre source d' ADP, par leur fan tome(« ghost») ne modi fie pas le phenomene de retention ce qui prouve que Ia participation des globules rouges est surtout mecanique, en favorisant le nombre de collisions entre plaquettes et billes de verre et plaquettes entre elles (23). Consideree comme pathogomonique de Ia maladie de Von Willebrand, Ia reduction , voire !'absence totale de retention des plaquettes sur colonne de billes de verre, semble resulter d'un defaut de Ia reaction des plaquettes entre elles et non de Ia reaction des plaquettes aux billes de verre. Le facteur manquant dans Ia maladie de von Willebrand interviendrait dans !\~ tape fin ale de Ia retention, c'est-a-dire dans Ia stabilisation des agregats fo1J11es. SHAPE CHANGE ET AGREGATION
L'agregation designe l'accolement des plaquettes
175 entre elles. lnduit par differents stimuli , ce phenomene est precede de peu par un changement de morphologie des plaquettes («shape change ») qui d'ovales prennent Ia forme de spheres epineuses tandis que leur contenu energetique est abaisse (20). Ce phenomene est provoque par I'A DP, Ia 5-HT, mais non par !'adrenaline. II necessite !'agitation des plaquettes ainsi que Ia presence de certai ns facteurs plasmatiques. II peut etre visualise dans certai nes conditions par agregometrie. Cette technique permet principalement de mesurer l'agregation . Mise au point par Born en 1962 (2), elle consiste a enregistrer les variations de transmission d'un plasma riche en plaquettes, an ticoagule et ag ite en presence d'un inducteur de l'agregation . La formation d'agregats de plaquettes vade pair avec une reduction du nombre de plaquettes libres en suspension dans le plasma ou dans un milieu artificiel. II en resulte une augmentation de Ia transmission optique. La cinetique et l'ampleur de ce phenomeme dependent de Ia nature et de Ia concentrati on de !'agent indueleu r, toute autre condition etant maintenue identique. Les autres variables sont : le nombre de plaquettes en suspension et leurs apti tudes fonctionnelles, Ia vitesse de !'agitat ion, Ia temperature et Ia composition du milieu plasmatique ou artificiel (6). Au premier rang des age nts agrega nts physiologiqucs s'inscrit I' ADP dont !'intervention in vivo au cours de l'hemostase ou des phenomenes thromboemboliques est bien demontree. Lorsque dans le systeme d'agregometrie Ia concentration d' ADP exogene se situe en-dessous de 2tLM, l'agregation ne comprend en ge neral qu'une seule phase rapidement reversible. A une concentration le plus souvent situee entre 2 et 2,5/l M, I'ADP peut induire une agregation en double vague; il faut neanmoins tatonner pour trouver Ia dose critique capable de reproduire ce phenomene. A l'enclenchement de Ia deuxieme vague correspond une liberation d' ADP intraplaquettaire mais aussi d' ATP et de 5-HT con tenus dans certains granules (granules « denses »). Con~ideree classiquement comme responsable de Ia deuxieme phase d'agregation , Ia release reaction n'est peut-etre qu'un phenomene simA cta Clinica Belgica, 30, 3 (19 75)
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APPRECIATION DES FONC TIONS PLAQUETTA IRES
plement contemporain de cette deuxieme phase, trad uisant Ia mise en jeu de structures fonctionnelles in traplaquettaires (18). Habituellemen t, lorsque Ia concentration d'ADP excede 2,5 ,u M, on observe une fu sion des deux phases d'agregation de telle sorte que !'enregistrement ne montre pas toujours de ressaut intermediaire (voir fig. 1). La deuxieme phase ind uite a part ir d'une concentration liminaire d' ADP est concomitante de l'emission de pseudopodes plus im portants et de Ia formation d'agregats plus denses et plus stables . Passa nt par un maximum , Ia transmission optique diminue ensuite lentement ce qui signi.fie que Ia desagregation et Ia dispersion des amas de plaquettes surpassent l'agregation. L'i nclinaison de Ia pente de desagregation est d'autant plus marquee que Ia concentration de I' ADP inducteur est plus faible. La desagregation ne semble pas liee un iquement a Ia disparition de l'A DP dans le plasma car elle debute alors que le
a. 0
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.....
Temps (min. )
Fig. 1 - Enregistrement de /'agregation des piaqueues et resultats des mesures de Ia 14C-5- HT et de /'ATP liberes en reponse a des concentrations croissantes d'ADP exogene. Acta Clinica Belgica, 30, 3 (1975)
taux d'A DP plas matique reste suffisamment eleve pour pou voi r induire l'agregation d' un autre echantillon.de plaquettes. Cette desagregation n'est d'ailleurs pas parallele a Ia vitesse de dis parition de I' ADP dans le plas ma. Tant qu'a present , on considere que Ia desagregation traduit un etat refractaire progressif des plaquettes induit par I'ADP lui-meme. II est aussi possible que !'Adenosine, inhibiteur connu de l'agregation par I' ADP et produ it de Ia degradation plasmatique de I'ATP libere intervienne dans le phenomene de desagregation (16). RELEASE REACTION
La « release reaction » contribue a creer autour des plaquettes stimulees par differents agents physiologiques une zone d'hyperagregabilite. Les plaquettes sont capables de liberer rapidement dans le mil ieu ambiant le contenu de certains granules de stockage (g ranules « denses ») en reponse a differents inducteurs de l'agregation tels que I'ADP et surtout !'adrenaline, le collagene et Ia thrombine. Ce dernier agent , inducteur puissant, est capable de provoquer en outre Ia liberatio n plus lente d'hydrolases acides contenues dans d'autres granules (« a-granu les ») (I S, 21). L'ATP et I'ADP liberes a part ir des granules « denses » font partie du pool de nucleotides d'adenine probablement preforme dans le megacaryocyte. Ce pool protege est peu echangeable. II n'est que faiblement marque lors de !'incubation des plaquettes avec un precurseur de ces nucleotides tels que !'adenine tri tiee. Par contre, ce precurseur marque est rapidement incorpore dans un pool echangeable de nucleotides intraplaquettaires, notamment dans I' ATP. Au depart de Ia « release reaction , on observe une degradation tres rap ide de cette frac tion de I' ATP metaboliquement acti ve. REPONSES DES PLAQUETTES A QUELQUES AGENTS AGREGANTS DI FFERENTS DE L'ADP
L'adrenaline agit de maniere differente de I'A DP. Les plaquettes des sujets reputes sains y repondent par une premiere phase d'agregation
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APPR E !AT/ON DES FONCTI ONS PLAQUETTA IRES
non precedee de« shape change» et non reversible (23). Cette reponse depend de recepteurs de type a. De fa~Yo n difticilement prev isible, les plaquettes de certains sujets repondent par une double phase d'agregation pour autant que Ia concentration d'adrenaline soit suftisante. Toutefois, Ia concentration liminaire ca pable d'induire Ia seconde phase varie beaucoup d' un sujet aI' autre et chez un me me sujet dont les plaquettes sont testees a des moments di fferents (voir fi gure 2). Cette deuxieme phase s'accom pagne d'une « release reaction >> du contenu des granules denses (22). La serotonine indu it un «shape change» et une ag regation monophasique faible et reversible en se combinant a des recepteurs de membrane specifiques qui ass urent un uptake act if de cette amine vers les granules «denses» intraplaquettaires (I). L'action de Ia 5-hydroxy tryptamine (5HT) est potentialisee par I'ADP alors qu'in versement Ia pre-incubation des plaquettes en presence de cette amine et sans agitation du milieu inhiberait le pouvoir ag regant de I' ADP ajoute ulterieurement. Adr ena line
5 !tM
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L'agregation induite par une suspension de collagene solu ble purifie se produit apres une periode de latence caracteristique. Celle-ci correspo nd au temps de polymerisation des fibres de coll agene auxquelles adherent les plaquettes. Puissa nt ind ucteur du « release», quo ique moins deletere que Ia th rombine, le collagene entraine une agregatio n irreversible des plaq uettes (17) (voir fi g. 3). Collagen
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«Release» :
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ATP
1.8/IM
ADP
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Temps (min.)
0,1%
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Fig. 3 - Enregistrement de /'agregation des p/aqueffes et resultats des mesures de Ia 14C-5- HT, de /'ATP et de I'ADP liberes en reponse aune suspension de fibres de col!agene .
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0
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ATP
1.1f1M 0, 75/IM
Temps (min.)
Fig. 2 - Enregistrement de /'agregation des p/aquettes et resu/tats des mesures de Ia 14C-5 -HT, de /'ATP et de I'ADP liberes, en reponse aune meme concentration d'Adrenaline exogene ajoutee a des echantillons provenant de deux sujets differents a et b.
La thrombine est !'agent agn!gant phys iologique le plus puissant , capable de provoquer un release max imal du contenu des granules «denses » et des «a-granules». Son action au niveau de Ia membrane plaquettaire depend d'un recepteur different du fibrin ogene peri plaq uettaire. L'agregation par Ia thrombine est irreversible (9). L' ADP, Ia 5-HT et probablement !'adrenali ne liberes par les plaquettes ont un effet agregant indi viduel auquel s'ajoutent des effets de potentialisation reciproqu e. Ainsi, a concentratio n tres faible d'ordre phys iologique, !'adrenaline potentialise les effets agregants de I' ADP et de Ia thrombine (29). Du jeu complexe de ces differents age nts in vivo depend en partie Ia croisAcra C/inica Belgica, 30, 3 (1975)
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sance du clou hemostatique et du thrombus plaquettaire.
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INT EG RATION D ES FONCTIONS PLAQUETT AIRES (A DH ES IVITE, « SHAPE CHANGE », AGREGATION, « RELEASE REACTION »)
Encore partiellement hypothetique, le mode d'enchainement des differentes fonctions plaquettaires permet de concevoir quels seraient les points d'impact des differents agents pharmacologiques inhibiteurs de Ia formation du thrombus plaquettaire. Du fait de leur adhesion a une surface non endothelialisee, les plaquettes subissent un stimulus qui induit Ia «release reaction ». L' ADP libere agirait au niveau des recepteurs de membrane des plaquettes voisines libres. fl en resulterait un changement de leur morphologie («shape change») demasquant certains sites de surface responsables de leur agregation ulterieure. Les plaquettes en cours d'agregation libereraient alors brusquement leur contenu («release reaction»). Parmi les agents indueleurs, I'A DP mais aussi !'adrenaline, lecollagene et Ia thrombine provoquent Ia liberation plus ou mains importante du contenu des granules « denses » (release 1). Stimulees par des concentrations relativement plus elevees de thrombine, les plaquettes liberent ensuite des enzymes lysosomiaux stockes dans les «a-granules» (release H). L'enchainement des differentes fonctions plaquettaires dependrait d'une part de l'intensite du stimulus et d'autre part de l'intensite de Ia reponse des plaquettes. La liberation d'ions Ca" stockes au voisinage des recepteurs de membrane mettrait en jeu des elements contractiles intraplaquettaires responsables de Ia release reaction (thrombosthenine). La reponse des plaquettes dependrait aussi de Ia quantite d' ATP intraplaquettaire metaboliquement utilisable. «Shape change», agregation et «release reaction» necessiteraient !'utilisation de quantites croissantes d' ATP intraplaquettaire appartenant au pool metabolique. Dans certaines conditions experimentales, l'accomplissement d'une des fonctions de cette sequence ne serait pas indispensable a Ia mise en jeu de Ia fonction suivante. Acta C/inica Belgica, 30, 3 (1975)
APPRECIA TION DES FONCTIONS PLAQUETTAIRES FONCTIONS PLAQUETT AIRES ET COAGULATION
Les plaquettes accelerent Ia coagulation du plasma qui les contient. Elles sont capables d'adsorber certains facteurs de coagulation au niveau de leur membrane modifiee en reponse a differents agents agregants. La reaction entre ces facteurs de coagulation adsorbes serait ainsi facilitee. La disponibilite du facteur 3 plaquettaire designe cette fonction coagulante des plaquettes. Cette fonction peut etre mesuree apres activation des plaquettes par Kaolin ou ADP et recalcification du milieu plasmatique en presence du venin «Stypven». Ce dernier activera le facteur X. Les concentrations des facteurs plasmatiques mis en jeu par cette reaction etant connues, le temps de coagulation dependra du nombre et de l'integrite fonctionnelle des plaquettes. Recemment les travaux de Walsh ont montre que les plaquettes stimulees par l'ADP etaient capables d'activer le facteur de Hageman ou facteur XII et de declencher Ia coagulation intrinseque. En outre, incubees au contact de collagene, les plaquettes seraient capables d'activer directement le facteur xr absorbe a leur surface, sans activation prealable du facteur xn Le facteur XI active au niveau des plaquettes serait moins rapidement inactive par son inhibiteur nature! que lorsqu'il se trouve a l'etat libre dans le plasma. Cet effet protecteur des plaquettes vis-a-vis de l'inhibiteur nature! d'un facteur de coagulation se manifesterait egalement a l'egard du facteur X active a leur surface (32). Au cours de Ia release reaction, les plaquettes liberent un constituant capable de neutraliser l'heparine, le facteur 4 plaquettaire (8). Or, comme le propose Walsh, il est permis de penser que de tres minimes quantites d'heparine sont normalement liberees dans Ia circulation et participent selon un mecanisme bien connu a Ia neutralisation du facteur X active. Des tors, en liberant cette activite antiheparinique, les piaqueues previendraient Ia neutralisation du facteur X, facteur cle de Ia coagulation. Des travaux recents d'O'Brien ant montre une augmentation de cette activite antiheparinique dans le sang de sujets atherosclereux et notamment de survivants a l'infarctus du myocarde (24). 0
APPRECIATION DES FONCT!ONS PLAQUETTAIRES
Entin, il faut souligner que Ia thrombine produite notamment par activation du systeme de coagulation periplaquettaire provoque non seulement l'agregation des plaquettes et Ia liberation d'agents agregants, mais encore Ia disponibilite du facteur 3 plaquettaire et Ia liberation du facteur 4 antiheparinique dont il vient d'etre question . Adhesivite, agregation et « release reaction » sont done en relation etroite avec le systeme de Ia coagulation .
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tels que l'A DP, l'adrenaline et le collagene chez les patients qui presentaient une hyper-p-lipoproteinemie de type II. L'agregation et Ia release reaction des plaquettes provenant de ces patients etaient accrues, particulierement en reponse a !'ad renaline. Des epreuves croisees ont demontre que cette hypersensibilite correspondait a un caractere intrinseque des plaquettes qui persistait lorsque celles-ci etaient separees de leur plasma et resuspendues dans un plasma temoin (4).
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CONCLUSIO N ETUDE DES FONCTIONS PLAQUETT AIRES DANS LES AFFECTIONS THROMBO-EMBOLIQUES
De nombreux travaux ont deja ete consacres ace sujet. A titre d'exemple, citons les resultats de deux travaux recents. Sullivan et coli. ont mesure l'adhesivite des plaquettes chez des patients qui, en raison de leur symptomatologie angineuse ont subi une coronarographie selective (27). Ces patients ont ete repartis en sousgroupes en fonction du sexe et en fonction de Ia presence eventuepe de lesions coronariennes, d'anomalies de Ia tolerance au glucose ou du lipidogramme. Les auteurs ont ainsi montre que l'adhesivite etait en general plus elevee chez l'homme que chez Ia femme dans les differents sous groupes a !'exception du sous groupe caracterise par une intolerance au glucose ou l'adhesivite etait plus marquee chez Ia femme . Un certain nombre de travaux avaient d'ailleurs deja detecte une hyperadhesivite aux billes de verre des plaquettes de sujets diabetiques (13). Confrontee aux resultats du lipidogramme, l'adhesivite etait plus importante dans le sous groupe de patients presentant une hyperlipemie de type IV bien que le nombre de patients etudies fut assez faible. Entin, confrontee aux resultats de Ia coronarographie, l'adhesivite ne mantrait aucune difference dans aucun des sousgroupes, que cet examen detecte ou non une lesion coronarienne. Recherchant par methode agregometrique Ia concentration liminaire d'agents agregants capables d'induire une agregation maxi male, Cavalho et collaborateurs ont observe une hypersensibilite des plaquettes vis-a-vis d' agents agregants
La mes ure de l'adhesivite et Ia recherche du seuil de reponse des plaquettes aux differents age nts agregants par Ia technique agregometrique semble done capable de demontrer une hypersensibilite plaqucttaire chez les patients qui presentent des facteurs de hauts risqu es d'atherosch~rose et d' affections thromboemboliques. La detection d'affections hemorragiques ou thrombo-emboliques ou encore l'etude des agents pharm acologiques fait auss i appel a d'autres techniques moins analytiques ou moins diffusees que celles qui viennent d'etre rapportees. Ces techniques comprennent Ia retraction du caillot, Ia thrombo-elastographie, le test de Chandler (5) et Ia migration electrophoretique des plaq uettes (I 0). Toutefois, selon notre experience et le res ul tat de trav~ux recents, des epreuves selectives et probablement plus reproductibles telles que Ia mesure de l'adh esivite ou de l'agregati on ont apporte des informations plus decisives dans le diagnostic des affections hemorragiq ues . Grace aux epreuves croisees que facilitent les techniqu es recentes de separation et de res uspension des plaquettes, il devient possible de distinguer une eventuelle anomalie intrinseque des plaquettes d'un dysfonctionnement induit uniquemen! par une anomalie plasmatique (28, 3 1). Cette methodologie s'est deja revelee fructueuse dans !'etude du mecanisme des affections hemorragiques. Elle doit permettre de preciser !'importance d'eventuelles anomalies plaquettaires dans Ia pathogenie des affections thromboemboliques. Partant de ces connaissances, il deviendrait possible de diriger de fa~on plus Acta C/inica Be!Kica. 30. 3 (19 75)
180 rationnelle les essais cliniques d'agents pharmacologiques, qui, experimentes chez !'a nim al ou tes tes in vitro sur les pl aquettes hum aines, ont fait preuve d'une activite indiscutable.
stellen en zal ook helpen de klinische bcteken is te precisercn van pharmaca die in vitro en bij proefdierc n de aggrcga tic va n bloedplaatjes rcmmen.
KEY WORDS
BIBLIOGRAPHI E
Platelets - Adhesiveness - Aggregation - Shape change Release reaction- Aggregating agents- Bloodcoagul ation Thromboembolism.
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APPRECIATION DES FONCTIONS PLAQUETTA IR ES
SUMMARY The platelets from patients with thromboembolism or from patients at high risk for atherosclerosis, appear to have an increased adhesiveness and a high sensiti vity to various aggregating age nts. Although other methods of investigating the platelet function are avai laQie (e.g. clot retraction, thromboelastography, the Chandler loop, the electrophoretic migration of platelets) they do not have the same analytical value and are less commonly used. According to recent studies and our own experience, measurement of the adhesiveness and aggregation of platelets are more selecti ve and reproducible techniques which can reveal decisive information in the diagnosis ofh aemorrhagic disorders. Making use of crossed experiments made feasible by recent methods of separation and resuspension of platelets, one can now distinguish intrinsic platelet abnormalities from fun ctional disorders due to plasmatic abnormalities. These new methods may also reveal important information on the behaviour of platelets from patients with thromboembolism and will help to define the real significance of pharmacologic agents which inhibit the agg regation of platelets in vitro and in animals.
SAMENV ATTING
De bloedplaatjes van patienten met tromboembolen of met hoge risikofactoren voor atheromatose blijken een verhoogde adhesiviteit en aggregatievermogen te hebben. Andere methoden om de funktie van de bloedplaatjes te bestuderen (a.m. de klonterretraktie, trombo-elastographie, de methode volgens Chandler, electrophorese va n bloedplaatjes) hebben niet dezelfde analytische waarde en worden thans ook minder gebruikt. Volgens recente publicaties en eigen ervaring zijn de ad hesivi tei t- en aggregatietesten selektieve en vrij reproduceerbare methoden die bijdragen de diag nose van bloedingsziekten beter te preciseren. Aangezien de recente methoden voor scheiding en resuspensie van bloedplaatjes kruisproeven toelaten is het thans oak mogelijk het onderscheid te maken tussen intrinsieke bloedplaatjesstoornissen en funktionele afwijkingen t.g.v. abnormali teiten in het plasma. De studie van de adhesivi teit en van de aggregatie van de bloedplaatjes laat toe partikuliere eigenschappen van de thrombocyten bij patienten met tromboembolen vast te Acta Clinlca Belgica, 30, 3 (1975)
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Acta C/inica Belgica. 30. 3 (19 75)
ISSN: 1784-3286 (Print) 2295-3337 (Online) Journal homepage: http://www.tandfonline.com/loi/yacb20
Fonctions Plaquettaires Et Tests D’Appréciation De Ces Fonctions J.L. David To cite this article: J.L. David (1975) Fonctions Plaquettaires Et Tests D’Appréciation De Ces Fonctions, Acta Clinica Belgica, 30:3, 174-181, DOI: 10.1080/17843286.1975.11716993 To link to this article: http://dx.doi.org/10.1080/17843286.1975.11716993
Published online: 21 May 2016.
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FONCTIONS PLAOUETTAIRES ET TESTS D'APPRECIATION DE CES FONCTIONS
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J .L. DAVID*
INTRODUCTION
Au cours des dernieres annees, de nou velles techniques ont permis de preciser le caractere de di vers deficits fon ctionnels plaquettaires res ponsables de maladies hemorragiques. Par ailleurs, des anomalies fonctionnelles plaquettaires ont ete detectees chez des patients qui presentaient un tableau clinique ou biologique comportant des facteurs connus de hauts risques d'atherosclerose et d'affections thromboemboliques. II · reste cependant difficile de savoir quelle est !'importance de ces anomalies dans l'etiopathogenie de ces affections. La reponse a cette question conditionne !'utilisation raisonnable d'agents pharm acologiques dans Ia prevention de Ia th rombose, agents choisis notamment en raison de leur activite inhibitrice indiscutable visa-vis des fonctions plaquettaires testees in vitro. Dans ce domaine, !'experimentation clinique est d'interpretation difficile en raison des nombreux facteurs en cause tels que les habitudes hygienodietetiqu es, les dysfon ctionnements endocriniens et le stress, facteurs dont il est permis de penser qu 'ils peuvent modifier le fonctionnement des plaquettes. En outre, !'extrapolation a l'homme des resultats de !'experimentation menee chez !'animal reste delicate car Ia physiologie plaquettaire est particuliere a chaque espece animate. Des tors, !'etude des fon ctions des plaquettes humaines, in vitro, s'avere tres precieuse * Universite de Liege, Departement de Clin ique et de Semeiologie Medicales (Pr. A. Nizet), Secteur d' Hematologie (Pr. J. Hugues). Acta Clinica Belgica, 30, 3 (1975)
pour autant que les techniques utilisees soient suffisamment sensibles et que leur reproductibi li te soit satisfaisante. Les fon ctions plaquettaires sont principalement l'adhesivite, l'agregation et Ia « release reaction ». Les plaquettes interviennent aussi de fayon decisive au cours de differentes etapes de Ia coagulation . ADH ESIVITE
Le terme « adhesivite » designe l'accolement des plaquettes a toute surface non recouverte d'un endothelium . In vivo, l'adhesivite designe l'accolement des plaquettes a Ia couche sous-endotheliale dont les fibres de collagene semblent etre le composant le plus attractif. L'adhesivite peut etre etudiee in viv0, chez !'animal, au moyen de differents systemes ex perimentaux, difficilement applicables a Ia clinique (30). In vitro, !'observation microscopique de l'adhesivite des plaquettes, notamment au niveau d'une surface plane de verre, constitue une techn ique simple d'observation (1 2). Toutefois, ce genre de technique est mains largement uti Iisee en investigation clinique que Ia methode de mesure de Ia retenion des plaquettes au cours du passage d'un echantillon de sang sur une colonne de bille de verre (11 , 26, 3). Quoique designee comme mesure de l'adhesivite des plaquettes, cette technique mesure en fait trois phenomenes successifs : l'adhesivite proprement dite des plaquettes aux billes de verre qu'elles recouvrent d' une premiere couche, puis Ia formation d'agregats plaquettaires et en fin Ia stabilisation de ces agregats. Ces trois phenomenes dependent de plusieurs
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APPREci ATION DES FONCTIONS PLAQUETTAIRES
facteurs d'ordre biologique et d'ordre technique (25). Le phenomene d'adhesivite proprement dit depend de l'integrite des plaquettes puisque cette fonction est defectueuse si les plaquettes sont afibrinogenemiques ou thrombastheniques. La presence de fibrinogene et de calcium conditionne cette fonction. Publies it y a une quin zaine d'annees, les travaux fond amentaux de Hellem ant montre que Ia retention des plaquettes sur bille~ de verre dependait de Ia presence d' ADP dans le milieu (11). Des travaux plus recents ant precise I' origi ne et le role exacts de I' AD P. II semble que I'ADP n'intervienne pas dans le phenomene initial d'adhesion des plaquettes aux billes de verre mais qu' il contr61e le cours des etapes ulterieures de Ia retention des plaquettes. Le phenomene initial d'adhesion plaquettaire aux billes de verre s'accompagne de modifications morphologiques des plaquettes et d'une liberation de I' ADP intraplaquettaire dont depend le phenomene ulterieur d'adhesion des plaquettes entre elles ou agregation (19). Le calcium semble intervenir plus comme cofacteur de l'agregation que de !'adhesion des plaquettes aux billes de verre. II semble demontre actuellement que I'ADP provient surtout des plaquettes qui le liberent a Ia suite du stimulus que constitue leur contact avec les billes de verre. En effet, le rem placement des globules rouges , autre source d' ADP, par leur fan tome(« ghost») ne modi fie pas le phenomene de retention ce qui prouve que Ia participation des globules rouges est surtout mecanique, en favorisant le nombre de collisions entre plaquettes et billes de verre et plaquettes entre elles (23). Consideree comme pathogomonique de Ia maladie de Von Willebrand, Ia reduction , voire !'absence totale de retention des plaquettes sur colonne de billes de verre, semble resulter d'un defaut de Ia reaction des plaquettes entre elles et non de Ia reaction des plaquettes aux billes de verre. Le facteur manquant dans Ia maladie de von Willebrand interviendrait dans !\~ tape fin ale de Ia retention, c'est-a-dire dans Ia stabilisation des agregats fo1J11es. SHAPE CHANGE ET AGREGATION
L'agregation designe l'accolement des plaquettes
175 entre elles. lnduit par differents stimuli , ce phenomene est precede de peu par un changement de morphologie des plaquettes («shape change ») qui d'ovales prennent Ia forme de spheres epineuses tandis que leur contenu energetique est abaisse (20). Ce phenomene est provoque par I'A DP, Ia 5-HT, mais non par !'adrenaline. II necessite !'agitation des plaquettes ainsi que Ia presence de certai ns facteurs plasmatiques. II peut etre visualise dans certai nes conditions par agregometrie. Cette technique permet principalement de mesurer l'agregation . Mise au point par Born en 1962 (2), elle consiste a enregistrer les variations de transmission d'un plasma riche en plaquettes, an ticoagule et ag ite en presence d'un inducteur de l'agregation . La formation d'agregats de plaquettes vade pair avec une reduction du nombre de plaquettes libres en suspension dans le plasma ou dans un milieu artificiel. II en resulte une augmentation de Ia transmission optique. La cinetique et l'ampleur de ce phenomeme dependent de Ia nature et de Ia concentrati on de !'agent indueleu r, toute autre condition etant maintenue identique. Les autres variables sont : le nombre de plaquettes en suspension et leurs apti tudes fonctionnelles, Ia vitesse de !'agitat ion, Ia temperature et Ia composition du milieu plasmatique ou artificiel (6). Au premier rang des age nts agrega nts physiologiqucs s'inscrit I' ADP dont !'intervention in vivo au cours de l'hemostase ou des phenomenes thromboemboliques est bien demontree. Lorsque dans le systeme d'agregometrie Ia concentration d' ADP exogene se situe en-dessous de 2tLM, l'agregation ne comprend en ge neral qu'une seule phase rapidement reversible. A une concentration le plus souvent situee entre 2 et 2,5/l M, I'ADP peut induire une agregation en double vague; il faut neanmoins tatonner pour trouver Ia dose critique capable de reproduire ce phenomene. A l'enclenchement de Ia deuxieme vague correspond une liberation d' ADP intraplaquettaire mais aussi d' ATP et de 5-HT con tenus dans certains granules (granules « denses »). Con~ideree classiquement comme responsable de Ia deuxieme phase d'agregation , Ia release reaction n'est peut-etre qu'un phenomene simA cta Clinica Belgica, 30, 3 (19 75)
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APPRECIATION DES FONC TIONS PLAQUETTA IRES
plement contemporain de cette deuxieme phase, trad uisant Ia mise en jeu de structures fonctionnelles in traplaquettaires (18). Habituellemen t, lorsque Ia concentration d'ADP excede 2,5 ,u M, on observe une fu sion des deux phases d'agregation de telle sorte que !'enregistrement ne montre pas toujours de ressaut intermediaire (voir fig. 1). La deuxieme phase ind uite a part ir d'une concentration liminaire d' ADP est concomitante de l'emission de pseudopodes plus im portants et de Ia formation d'agregats plus denses et plus stables . Passa nt par un maximum , Ia transmission optique diminue ensuite lentement ce qui signi.fie que Ia desagregation et Ia dispersion des amas de plaquettes surpassent l'agregation. L'i nclinaison de Ia pente de desagregation est d'autant plus marquee que Ia concentration de I' ADP inducteur est plus faible. La desagregation ne semble pas liee un iquement a Ia disparition de l'A DP dans le plasma car elle debute alors que le
a. 0
E Cl)
c
~
.....
Temps (min. )
Fig. 1 - Enregistrement de /'agregation des piaqueues et resultats des mesures de Ia 14C-5- HT et de /'ATP liberes en reponse a des concentrations croissantes d'ADP exogene. Acta Clinica Belgica, 30, 3 (1975)
taux d'A DP plas matique reste suffisamment eleve pour pou voi r induire l'agregation d' un autre echantillon.de plaquettes. Cette desagregation n'est d'ailleurs pas parallele a Ia vitesse de dis parition de I' ADP dans le plas ma. Tant qu'a present , on considere que Ia desagregation traduit un etat refractaire progressif des plaquettes induit par I'ADP lui-meme. II est aussi possible que !'Adenosine, inhibiteur connu de l'agregation par I' ADP et produ it de Ia degradation plasmatique de I'ATP libere intervienne dans le phenomene de desagregation (16). RELEASE REACTION
La « release reaction » contribue a creer autour des plaquettes stimulees par differents agents physiologiques une zone d'hyperagregabilite. Les plaquettes sont capables de liberer rapidement dans le mil ieu ambiant le contenu de certains granules de stockage (g ranules « denses ») en reponse a differents inducteurs de l'agregation tels que I'ADP et surtout !'adrenaline, le collagene et Ia thrombine. Ce dernier agent , inducteur puissant, est capable de provoquer en outre Ia liberatio n plus lente d'hydrolases acides contenues dans d'autres granules (« a-granu les ») (I S, 21). L'ATP et I'ADP liberes a part ir des granules « denses » font partie du pool de nucleotides d'adenine probablement preforme dans le megacaryocyte. Ce pool protege est peu echangeable. II n'est que faiblement marque lors de !'incubation des plaquettes avec un precurseur de ces nucleotides tels que !'adenine tri tiee. Par contre, ce precurseur marque est rapidement incorpore dans un pool echangeable de nucleotides intraplaquettaires, notamment dans I' ATP. Au depart de Ia « release reaction , on observe une degradation tres rap ide de cette frac tion de I' ATP metaboliquement acti ve. REPONSES DES PLAQUETTES A QUELQUES AGENTS AGREGANTS DI FFERENTS DE L'ADP
L'adrenaline agit de maniere differente de I'A DP. Les plaquettes des sujets reputes sains y repondent par une premiere phase d'agregation
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APPR E !AT/ON DES FONCTI ONS PLAQUETTA IRES
non precedee de« shape change» et non reversible (23). Cette reponse depend de recepteurs de type a. De fa~Yo n difticilement prev isible, les plaquettes de certains sujets repondent par une double phase d'agregation pour autant que Ia concentration d'adrenaline soit suftisante. Toutefois, Ia concentration liminaire ca pable d'induire Ia seconde phase varie beaucoup d' un sujet aI' autre et chez un me me sujet dont les plaquettes sont testees a des moments di fferents (voir fi gure 2). Cette deuxieme phase s'accom pagne d'une « release reaction >> du contenu des granules denses (22). La serotonine indu it un «shape change» et une ag regation monophasique faible et reversible en se combinant a des recepteurs de membrane specifiques qui ass urent un uptake act if de cette amine vers les granules «denses» intraplaquettaires (I). L'action de Ia 5-hydroxy tryptamine (5HT) est potentialisee par I'ADP alors qu'in versement Ia pre-incubation des plaquettes en presence de cette amine et sans agitation du milieu inhiberait le pouvoir ag regant de I' ADP ajoute ulterieurement. Adr ena line
5 !tM
177
L'agregation induite par une suspension de collagene solu ble purifie se produit apres une periode de latence caracteristique. Celle-ci correspo nd au temps de polymerisation des fibres de coll agene auxquelles adherent les plaquettes. Puissa nt ind ucteur du « release», quo ique moins deletere que Ia th rombine, le collagene entraine une agregatio n irreversible des plaq uettes (17) (voir fi g. 3). Collagen
a. 0
«Release» :
E "'c
.="'
ATP
1.8/IM
ADP
2,7f1M
"C-5HT 85.7%
« Release»: ATP } ADP O. a)
"C-S HT
Temps (min.)
0,1%
...
Fig. 3 - Enregistrement de /'agregation des p/aqueffes et resultats des mesures de Ia 14C-5- HT, de /'ATP et de I'ADP liberes en reponse aune suspension de fibres de col!agene .
c.
0
E "'c
t="'
ATP
1.1f1M 0, 75/IM
Temps (min.)
Fig. 2 - Enregistrement de /'agregation des p/aquettes et resu/tats des mesures de Ia 14C-5 -HT, de /'ATP et de I'ADP liberes, en reponse aune meme concentration d'Adrenaline exogene ajoutee a des echantillons provenant de deux sujets differents a et b.
La thrombine est !'agent agn!gant phys iologique le plus puissant , capable de provoquer un release max imal du contenu des granules «denses » et des «a-granules». Son action au niveau de Ia membrane plaquettaire depend d'un recepteur different du fibrin ogene peri plaq uettaire. L'agregation par Ia thrombine est irreversible (9). L' ADP, Ia 5-HT et probablement !'adrenali ne liberes par les plaquettes ont un effet agregant indi viduel auquel s'ajoutent des effets de potentialisation reciproqu e. Ainsi, a concentratio n tres faible d'ordre phys iologique, !'adrenaline potentialise les effets agregants de I' ADP et de Ia thrombine (29). Du jeu complexe de ces differents age nts in vivo depend en partie Ia croisAcra C/inica Belgica, 30, 3 (1975)
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sance du clou hemostatique et du thrombus plaquettaire.
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INT EG RATION D ES FONCTIONS PLAQUETT AIRES (A DH ES IVITE, « SHAPE CHANGE », AGREGATION, « RELEASE REACTION »)
Encore partiellement hypothetique, le mode d'enchainement des differentes fonctions plaquettaires permet de concevoir quels seraient les points d'impact des differents agents pharmacologiques inhibiteurs de Ia formation du thrombus plaquettaire. Du fait de leur adhesion a une surface non endothelialisee, les plaquettes subissent un stimulus qui induit Ia «release reaction ». L' ADP libere agirait au niveau des recepteurs de membrane des plaquettes voisines libres. fl en resulterait un changement de leur morphologie («shape change») demasquant certains sites de surface responsables de leur agregation ulterieure. Les plaquettes en cours d'agregation libereraient alors brusquement leur contenu («release reaction»). Parmi les agents indueleurs, I'A DP mais aussi !'adrenaline, lecollagene et Ia thrombine provoquent Ia liberation plus ou mains importante du contenu des granules « denses » (release 1). Stimulees par des concentrations relativement plus elevees de thrombine, les plaquettes liberent ensuite des enzymes lysosomiaux stockes dans les «a-granules» (release H). L'enchainement des differentes fonctions plaquettaires dependrait d'une part de l'intensite du stimulus et d'autre part de l'intensite de Ia reponse des plaquettes. La liberation d'ions Ca" stockes au voisinage des recepteurs de membrane mettrait en jeu des elements contractiles intraplaquettaires responsables de Ia release reaction (thrombosthenine). La reponse des plaquettes dependrait aussi de Ia quantite d' ATP intraplaquettaire metaboliquement utilisable. «Shape change», agregation et «release reaction» necessiteraient !'utilisation de quantites croissantes d' ATP intraplaquettaire appartenant au pool metabolique. Dans certaines conditions experimentales, l'accomplissement d'une des fonctions de cette sequence ne serait pas indispensable a Ia mise en jeu de Ia fonction suivante. Acta C/inica Belgica, 30, 3 (1975)
APPRECIA TION DES FONCTIONS PLAQUETTAIRES FONCTIONS PLAQUETT AIRES ET COAGULATION
Les plaquettes accelerent Ia coagulation du plasma qui les contient. Elles sont capables d'adsorber certains facteurs de coagulation au niveau de leur membrane modifiee en reponse a differents agents agregants. La reaction entre ces facteurs de coagulation adsorbes serait ainsi facilitee. La disponibilite du facteur 3 plaquettaire designe cette fonction coagulante des plaquettes. Cette fonction peut etre mesuree apres activation des plaquettes par Kaolin ou ADP et recalcification du milieu plasmatique en presence du venin «Stypven». Ce dernier activera le facteur X. Les concentrations des facteurs plasmatiques mis en jeu par cette reaction etant connues, le temps de coagulation dependra du nombre et de l'integrite fonctionnelle des plaquettes. Recemment les travaux de Walsh ont montre que les plaquettes stimulees par l'ADP etaient capables d'activer le facteur de Hageman ou facteur XII et de declencher Ia coagulation intrinseque. En outre, incubees au contact de collagene, les plaquettes seraient capables d'activer directement le facteur xr absorbe a leur surface, sans activation prealable du facteur xn Le facteur XI active au niveau des plaquettes serait moins rapidement inactive par son inhibiteur nature! que lorsqu'il se trouve a l'etat libre dans le plasma. Cet effet protecteur des plaquettes vis-a-vis de l'inhibiteur nature! d'un facteur de coagulation se manifesterait egalement a l'egard du facteur X active a leur surface (32). Au cours de Ia release reaction, les plaquettes liberent un constituant capable de neutraliser l'heparine, le facteur 4 plaquettaire (8). Or, comme le propose Walsh, il est permis de penser que de tres minimes quantites d'heparine sont normalement liberees dans Ia circulation et participent selon un mecanisme bien connu a Ia neutralisation du facteur X active. Des tors, en liberant cette activite antiheparinique, les piaqueues previendraient Ia neutralisation du facteur X, facteur cle de Ia coagulation. Des travaux recents d'O'Brien ant montre une augmentation de cette activite antiheparinique dans le sang de sujets atherosclereux et notamment de survivants a l'infarctus du myocarde (24). 0
APPRECIATION DES FONCT!ONS PLAQUETTAIRES
Entin, il faut souligner que Ia thrombine produite notamment par activation du systeme de coagulation periplaquettaire provoque non seulement l'agregation des plaquettes et Ia liberation d'agents agregants, mais encore Ia disponibilite du facteur 3 plaquettaire et Ia liberation du facteur 4 antiheparinique dont il vient d'etre question . Adhesivite, agregation et « release reaction » sont done en relation etroite avec le systeme de Ia coagulation .
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tels que l'A DP, l'adrenaline et le collagene chez les patients qui presentaient une hyper-p-lipoproteinemie de type II. L'agregation et Ia release reaction des plaquettes provenant de ces patients etaient accrues, particulierement en reponse a !'ad renaline. Des epreuves croisees ont demontre que cette hypersensibilite correspondait a un caractere intrinseque des plaquettes qui persistait lorsque celles-ci etaient separees de leur plasma et resuspendues dans un plasma temoin (4).
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CONCLUSIO N ETUDE DES FONCTIONS PLAQUETT AIRES DANS LES AFFECTIONS THROMBO-EMBOLIQUES
De nombreux travaux ont deja ete consacres ace sujet. A titre d'exemple, citons les resultats de deux travaux recents. Sullivan et coli. ont mesure l'adhesivite des plaquettes chez des patients qui, en raison de leur symptomatologie angineuse ont subi une coronarographie selective (27). Ces patients ont ete repartis en sousgroupes en fonction du sexe et en fonction de Ia presence eventuepe de lesions coronariennes, d'anomalies de Ia tolerance au glucose ou du lipidogramme. Les auteurs ont ainsi montre que l'adhesivite etait en general plus elevee chez l'homme que chez Ia femme dans les differents sous groupes a !'exception du sous groupe caracterise par une intolerance au glucose ou l'adhesivite etait plus marquee chez Ia femme . Un certain nombre de travaux avaient d'ailleurs deja detecte une hyperadhesivite aux billes de verre des plaquettes de sujets diabetiques (13). Confrontee aux resultats du lipidogramme, l'adhesivite etait plus importante dans le sous groupe de patients presentant une hyperlipemie de type IV bien que le nombre de patients etudies fut assez faible. Entin, confrontee aux resultats de Ia coronarographie, l'adhesivite ne mantrait aucune difference dans aucun des sousgroupes, que cet examen detecte ou non une lesion coronarienne. Recherchant par methode agregometrique Ia concentration liminaire d'agents agregants capables d'induire une agregation maxi male, Cavalho et collaborateurs ont observe une hypersensibilite des plaquettes vis-a-vis d' agents agregants
La mes ure de l'adhesivite et Ia recherche du seuil de reponse des plaquettes aux differents age nts agregants par Ia technique agregometrique semble done capable de demontrer une hypersensibilite plaqucttaire chez les patients qui presentent des facteurs de hauts risqu es d'atherosch~rose et d' affections thromboemboliques. La detection d'affections hemorragiques ou thrombo-emboliques ou encore l'etude des agents pharm acologiques fait auss i appel a d'autres techniques moins analytiques ou moins diffusees que celles qui viennent d'etre rapportees. Ces techniques comprennent Ia retraction du caillot, Ia thrombo-elastographie, le test de Chandler (5) et Ia migration electrophoretique des plaq uettes (I 0). Toutefois, selon notre experience et le res ul tat de trav~ux recents, des epreuves selectives et probablement plus reproductibles telles que Ia mesure de l'adh esivite ou de l'agregati on ont apporte des informations plus decisives dans le diagnostic des affections hemorragiq ues . Grace aux epreuves croisees que facilitent les techniqu es recentes de separation et de res uspension des plaquettes, il devient possible de distinguer une eventuelle anomalie intrinseque des plaquettes d'un dysfonctionnement induit uniquemen! par une anomalie plasmatique (28, 3 1). Cette methodologie s'est deja revelee fructueuse dans !'etude du mecanisme des affections hemorragiques. Elle doit permettre de preciser !'importance d'eventuelles anomalies plaquettaires dans Ia pathogenie des affections thromboemboliques. Partant de ces connaissances, il deviendrait possible de diriger de fa~on plus Acta C/inica Be!Kica. 30. 3 (19 75)
180 rationnelle les essais cliniques d'agents pharmacologiques, qui, experimentes chez !'a nim al ou tes tes in vitro sur les pl aquettes hum aines, ont fait preuve d'une activite indiscutable.
stellen en zal ook helpen de klinische bcteken is te precisercn van pharmaca die in vitro en bij proefdierc n de aggrcga tic va n bloedplaatjes rcmmen.
KEY WORDS
BIBLIOGRAPHI E
Platelets - Adhesiveness - Aggregation - Shape change Release reaction- Aggregating agents- Bloodcoagul ation Thromboembolism.
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APPRECIATION DES FONCTIONS PLAQUETTA IR ES
SUMMARY The platelets from patients with thromboembolism or from patients at high risk for atherosclerosis, appear to have an increased adhesiveness and a high sensiti vity to various aggregating age nts. Although other methods of investigating the platelet function are avai laQie (e.g. clot retraction, thromboelastography, the Chandler loop, the electrophoretic migration of platelets) they do not have the same analytical value and are less commonly used. According to recent studies and our own experience, measurement of the adhesiveness and aggregation of platelets are more selecti ve and reproducible techniques which can reveal decisive information in the diagnosis ofh aemorrhagic disorders. Making use of crossed experiments made feasible by recent methods of separation and resuspension of platelets, one can now distinguish intrinsic platelet abnormalities from fun ctional disorders due to plasmatic abnormalities. These new methods may also reveal important information on the behaviour of platelets from patients with thromboembolism and will help to define the real significance of pharmacologic agents which inhibit the agg regation of platelets in vitro and in animals.
SAMENV ATTING
De bloedplaatjes van patienten met tromboembolen of met hoge risikofactoren voor atheromatose blijken een verhoogde adhesiviteit en aggregatievermogen te hebben. Andere methoden om de funktie van de bloedplaatjes te bestuderen (a.m. de klonterretraktie, trombo-elastographie, de methode volgens Chandler, electrophorese va n bloedplaatjes) hebben niet dezelfde analytische waarde en worden thans ook minder gebruikt. Volgens recente publicaties en eigen ervaring zijn de ad hesivi tei t- en aggregatietesten selektieve en vrij reproduceerbare methoden die bijdragen de diag nose van bloedingsziekten beter te preciseren. Aangezien de recente methoden voor scheiding en resuspensie van bloedplaatjes kruisproeven toelaten is het thans oak mogelijk het onderscheid te maken tussen intrinsieke bloedplaatjesstoornissen en funktionele afwijkingen t.g.v. abnormali teiten in het plasma. De studie van de adhesivi teit en van de aggregatie van de bloedplaatjes laat toe partikuliere eigenschappen van de thrombocyten bij patienten met tromboembolen vast te Acta Clinlca Belgica, 30, 3 (1975)
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