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Kurze wissenschaftliche Mitteilungen

population in this group consists of small lymphocytes with an indented nucleus, s small cytoplasmic rim and with fine grains mainly laying over the nuclear indentation. Some other small lymphocytes have (Fig. 1 d) diffusely arranged fine granulations all over the cytoplasm. These subpopulations are also scored together. The}, comprise about 14% (9-19%) of the lymphocytes. Besides the two main populations there are cells with a mixed appearance [about 3% (1 5%)], also they seem to have a diffuse fine labelling with superimposed medium-sized grain to give a " p a t c h y " appearance. About 4% (1-9%) of the lymphocytes show a cap-like condensation of grains at the periphery of the cell. After incubation at 0°C for 30 rain there is a labelling which is somewhat lower than at 24 ° C and neither capping nor patching. Incubations with NaN~ show no cap formations. Discussion There are differences between cell membranes of T- and B-lymphocytes [3-6]. The demonstration of FHG-S positive structures offers a new possibility for a proof of membrane structures in lymphocytes. They arc localized on the cellmembrane: Phagocytosis or pinocytosis and by this intracellular localization of FHG-S positive material is excluded by incubation of viable ceils at 0 ° C or with NaNe after which a similar positive reaction is achieved. FHG-S positive structures show membrane shifting phenomena which are alike patching and capping described for Ig-receptors [7, 8], Con A-receptors [9] and for the H-2 antigen [10]. This process is dependent on an active cell metabolism. Furthermore, they are removed by proteases and are resistent to neuraminidase. The proportion of Lld and LIe are in close relationship to the proportion of B- and T-lymphoeytes revealed by other methods [5, 6, t l ] . Besides the marking of different cell populations in PBL, labelling by FHG-S seems to be a general property of cell membranes in normal, transformed and malignant cells [12].

2. Desaga, J. F. : In preparation 3. Mandel, T . E . : Intra-membranous Marker in T-lymphoeytes. Nature (Lond.) New Biol. 289, 112 (1972) 4. McIntyre, g. A., Karnovsky, M. J., Gilula, N. B.: Intramembranous particle aggregation in lymphoid cells. Nature (Load.) New Biol. 245, t47 (1973) 5. Potliak, A., Lampen, N., Clarkson, B. D., Harven, E. de: Identification of human B- and T-lymphoeytes by scanning electron-microscopy. J. exp. Med. 188,607 (1973) 6. Uhlenbruek, G., Wernet, P., Schuhmaeher, K.: Specific T-cell marking by Helix pomatia agglutinin after neuraminidase treatment. Kiln. Wschr. ~;1, 1210 (1973) 7. Petris, S. de, Raft, M. C.: Normal distribution, patching and capping of lymphocyte surface immunoglobulin studied by electron-microscopy. Nature (Lond.) New Biol. 241,257 (1973) 8. Petris, S. de, Raft, M. C. : Distribution of immunoglobulin on the surface of mouse lymphoid cells as determined by immuno-eleetron-mieroscopy. Antibody-induced temperaturodependent redistribution and its implication for the membrane structure. Europ. J. Immunol. 2, 523 (1972) 9. Nicolson, G.L., Singer, S. J.: 9erritin-conjugated plant agglutinins as specific saccharide stains for electronmicroscopy. Application to saceharides bound to cell membranes. Proc. nat. Aead. Sei. (Wash.) 68,942 (1971) 10. Davis, W.C.: H-2 Antigen on cell membranes: An explanation for the alteration of distribution by indirect labelling techniques. Science 175, t006 (1972) 1t. Seller, F . g . , Sedlaeek, H . H . , Kanzy, E. J., Lang, W.: Uber die Brauchbarkeit immunologiseher Nachweismcthoden zur Differenzierung funktione~l verschiedener Lymphoeyten. Spontanrosetten, Komplementrezeptor-Rosetten und Immunglobulinrezeptoren. Behring Institute 2¢fitt. 52, 26 (•972) 12. Desaga, J. F., L6ffler, H.: In preparation Dr. J. F. Desaga Zentrum ffir Inhere Medizin am Klinikum der Justus-Liebig-Universitgt D-6300 Giegen Klinikstral~e 32 b Federal Republic of Germany

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Klin. Wschr. 53, 44--46 (1975) © by Springer-Verlag 1975

Aktivitiitsbestimmung der Isoenzyme der Aldolase im menschlichen Serum mit Itilfe pr~izipitierender Antikiirper * W. Gempp-Friedrich und W. Pretlwitz Zentratlaboratorium der Med. Kliniken der Universitiit Mainz Eingegangen am 8. Mai 1974

Immunoehemieal Studies on Aldolase Isoenzymes in Human Serum. Summary. Analysis of human serum aldolase isoenzymes A, B and C activities was performed by means of a recently developed immunoehemical assay. Isoenzyme patterns were established in 130 healthy subjects selected from a normM range research program. Total aldolase activity ranged from 0.8, 1.6, 2.5 U/L, Ald A from 0.6, 1.2, 1.9 U/L, Ald B 0.0, 0.2, 0.7 U/L, Ald C 0.0, 0.1, 0.4 U/L expressedas 2:~::2s range. Comparing the histograms of total Mdolase activity in * Mit freundlicher Unterstiitzung der Deutschen Forschungsgemeinsehaft im l~ahmen des Sonderforsehungsbereiches 36.

patients with acute hepatitis and normal controls, an almost identical frequency distribution in both groups was observed. However, histograms of aldolase isoenzyme B values of these groups were practically completely separated. Thus in contrast with total aldolase activity, the determination of aldolase isoenzyme B activity is a useful criterion in the diagnosis of acute hepatitis. Key words': Aldolase, isocnzyme, immunochemical assay, normal range, acute hepatitis.

Zusammen[assung. Die Isoenzyme der Aldolase im Sermn wurden mit Hilfe prS~zipitierender AntikSrper bestimmt. ])as Isoenzymmust~r bei 130 gesunden Personen, aus einem Norm-

Kurze wissensehaftliehe Nitteilungen wertprogramm uusgewitflt, ergab folgende Werte: GesamtAldolase 0,8, 1,6, 2,5 U/L, Is0enzym A 0,6, 1,2, 1,9 U/L, Isoenzym B 0,0, 0,2 0,7 U/L und Isoenzym C 0,0, 0,1, 0,4 U/L ausgedriickt als 2 :~ 2 s. Der Vergleich der Histogramme zeigt, dab die Werteverteihmg bei Messung der GesumtMdolase sich bei Gesunden and Heputitis-Krunken fibersetmeidet. Bei )Iessung der Aldoluse B kommt es zu keiner ~'berschneidung dor WeI~everteilung. Eine Differenzierung zwisehen Gesunden and Kranken mit akuter Hepatitis ist m6glieh. Schli~sselw6rter: Aldolase, Isoenzyme, Immunehemiseher Versuch, Normwert, akute Hepatitis. In der klinischen Chemic werden Isoenzyme meist uufgrund ihrer unterschiedliehen physiko-chemisehen Eigenschaften, z.B. elektrophoretisehe Wanderungsgesehwindigkeit oder unterschiedliehe Substratspezifitiit getrennt. Pfleiderer, G. u.3/Iitarb. [1] sowie Wfirzburg u.Mitarb. [2] haben oine immunologisehe Nethode zur Bestimmung der Isoenzyme der Aldolase (E.C. 4.1.2.t3) beschrieben. Dem zu untersuehenden Serum werden die entspreehenden Antiseren zugegeben und naeh Inkubation and Zentrifuga~ion die noeh im ~berstand meBbare Aldolaseaktivit~t von der vorher bestimmten Gesamtaktivitiit abgozogen. Nan erh~ilt so sin Nag ffir alas prgzipitierte Isoenzym. Wit hubert mit der ungegebenen Methode das Isoenzymmuster der Aldoluse im Serum bei kliniseh und kliniseh-ehemisch untersuchten Gesunden und bei Putienten mit infektiSser Hepatitis bestimmt.

Material and Methoden Die Antisoren gegon mensehliche Isoenzyme A, B und C der Aldolase wurden vom HammeI gewonnen. Sic wurden mittels reiner Antigone uuf Empfindlichkeit und geinheit getestet, reino Aldolase C stand uns nieht zur Verffigung. Im einfachen Gel-Diffusionstest konnten wir keine Kreuzreaktion zwischen Aldolase A und B feststellen. Bei der Titerbestimmung im radialen Immundiffusionstest naeh Mancini funden wit einen Bindungstiter yon 40--50 ~g Aldoluso A und 90--i00 9g Aldoluse B pro ml Antiserum. Im Untersehied zu der yon Wfirzburg u.Miturb, angegebench Methode wurden die Pipettiervolnmina der Immunpr~zipitation verringert. Pro Ansatz wurden 400 Exl Serum, 200 ~1 7,5% NaC1 und die halbe Menge der angegebenen Antiseren eingesetzt. Die Endkonzentrution des Polyaethylenglykols 6000 betrng 2% im Ansatz [3]. Die ]~{essung der Aldolasektivit~i~ im Uborst~nd wurde r~ch der Origin~lmethodo mit den geagenzien der Firma Boehringer durehgefiihrt. Es wurden 300 ~1 Uberstand eingesetzt. Das Puffer-Substratgemiseh wurde bei 37°C vorinkubiert. Benutzt wurde eine Kfivettenweehselautomatik

30 N

20--

mit Schreiber der Firma Eppendorf. Die Spreizung betrug 0--0,25, der Papiervorsehub 0,5 em/min, We]lenti~nge366 nm. Der Linearbereich der Messung fiber 20 min wurde ausgewertet.

Ergebnisse 1. Bei der Auistellung des Isoenz)nnmusters bei insgesamt 130 kliniseh and kliniseh-ehemiseh untersuehten Normalpersonen uus dora in unseren Institut laufenden Normwertprogramm des Sonderforschungsbereiches 36 erhielten wir folgende Werte:

~ToT'D~erso~e7'b n Gesamt-Atd 130 Ald-A 130 Ald-B 36 AId-B 83 Ald-C 86 Ald-C 44 Summe A, B, C SummeA, B, C

Verteilung Norm Norm log log log log Norm

Anti-AI Anti-BI Anti-BII Anti-CI Anti-CII Anti-AI, BI, CI Norm Anti-AI, BII, CII

x--2 s 2

x~-2s

(U/L)

(U/L)

(U/L)

0,8 0,6 0,1 0,0 0,0 0,0 70%

1,6 1,2 0,3

72%

2,5 1,9 0,8 0,2 0,7 0,1 0,6 0,1 0,4 1 0 5 % 141% 93%

114%

Dutch gereinigte Antiseren konnte die Genauigkeit der Methode verbessert werden, so dab die Summe der Isoenzyme jetzt im Mitte193% ± 12% betrggt. 2. Die Untersuchung yon 58 Seren yon Putienten mit akuter, infekti6ser Hepatitis ergab folgende Befunde: Aldoluse A ist nut geringffigig gegenfiber den bei Normalpersonen gefundenen Werten erhSht, eine Korrelation zwisehen Gesamt-Aldolase und Aldolase A ergibt einen Korrelationsfuktor yon r--0,4450. Bet Unterschied ist statistiseh nieht signifikant. Atdolase B ist signifikant fiber den bei Normpersonen gofundenen ~,Verg erh6ht, der Korrelationsfuktor zur Gesamtaktivit~;t ergibt f=0,9931. Das bedeutet, die fiber der Norm erseheinende Aktivit~it im Serum ist ~ast ausschlieBlich A1dolase B. Der Vergleieh der Histogramme zeigt, dug bei Messung der Gesamt-Aldolase sieh die Werte der Gesunden und Hepatitiskrunken fiborschneidon. Bei Messung der Aldolase B kommt es zu keinor Uberselmeidung der Wertverteilung. Eine Differenzierung zwisehen Gesunden und Hepatitiskranken ist mit der Bestimmung der Aldolase B m6glieh.

Diskussion Mit einer immunologisehen Methode war es m6glieh, dus Isoenzymmuster der Aldoluse bei Gesunden und Hepatitis* kranken zu bestimmen. Ob mit der I~{ethode eine neue klinisch-ehemisehe Aussage fiber Sehweregrad und Verlaul bei infekti6ser Hepatitis zu maehen ist, lggt sieh zur Zeit noeh nicht sagen. Herrn Dr. H. Lung sind wir ffir die Bereitstellung der Antiseren zu Dank verpfliehtet. Frl. D. J6ekel und Frl. J. Bagdahn danken wir ffir die teehnische Hilfe.

I 0,i 1,0 ! | 10,0 U/L Abb. 1. Verteilung Aldolase B. Normal : N= 89. Hepatitis: N= 58 3b Klin. Wsohr,, 53. Jahrg.

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Literatur 1. Pfleiderer, G., Dikow, A., Fulkeuberg, F.: Quantitative estimation of genetieJly determined isoenzymes by immunotitration. Distribution patterns of aldolases A, B and C in extracts of human organs and tissues as well as in normal and pathological sera. Hoppe-Serylers Z. physiol. Chem. 355, 233 (1974)

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Kurze wissensehaftliche Mitteilungen

2. Wiirzburg, U., Wilz, I., Hennrieh, N., Lang, H.: Quantitative immunologische Bestimmung der Atdolase-Isoenzyme ira Serum. Z. clin. Chem. 12, 176 (1974) 3. Prellwitz, W., Kapp, S., Miitler, D.: Comparative methods for the quantitative immunological determination of gamma-G, A und M-globulines with automated immunoprecipitation reaktion (AIP). Clin. chim. Acta (in press)

Dr. Wolfgang Gempp-Friedrieh Prof. Winfried Prellwitz Zentrallabor der Med. Kliniken D-6500 Mainz LangenbeckstraBe 1 Bundesrepublik Deutschland

Klin. Wschr. 53, 4 6 - 4 8 (1975) © by Springer-Verlag 1975

Experimental Oliguric Acute Renal Failure: Protective Effects of Renomedullary Autotransplants E. Held, P. Weber und I. Zatzkowski II. Medizinische Klinik der Universit~t Miinehen (Direktor: Prof. Dr. E. Buchborn) Received, June 12, 1974

Summary. An acute circulatory renal failure (ARF) was induced in 18 rabbits by temporary ischemia of the remaining kidney 8 days after unilateral nephreetomy and subcutaneous autotransplantation of renomedullal)- tissue.-- Mortality in the postischemie course was 50% in treated animals but 100% in the control group ( n = 18) without autotransplantation. In the postisehemie period plasma urea concentration was significantly lower ( p < 0.005) in the surviving transplanted animals and excretion of sodium and water significantlyhigher ( p < 0.005) as compared with the control group. Plasma renin values which were signifieantly lower than those of the control ( p < 0.005) had decreased significantly even as compared with the initial values. These results indicate that hormonal substances are produced in interstitial cells of renomedullary autotransplants exerting a distinct protective effect against experimental acute renal failure. Decreased plasma renin activity may point to an inhibition of circulating and/or intrarenal renin by lipids originating from the transplants. Changes in sodium and water excretion indicate effects of circulating prostaglandins. Key words: Acute renal failure, Renin, Renomedullary autotransplants, Prostaglandins. Protektiver E//ekt renomedulliirer Autotransplantate bei akutem experimetellem Nierenversagen. Zusammen/assung. 8 Tage nach einseitiger Nephrektomie und subkutaner Autotransplantation yon renomedull~rem Gewebe wurde an 18 Kaninehen dureh tempor~re Iset~mie der Restniere ein akutes Nierenversagen induziert. In der Kontrollgruppe ( n = 18) ohne Autotransplantat betrug die Mortalitiit im postischEmischen Verlauf 100%, in der Gruppe der transplantierten Tiere nut 50%. - - Gegenfiber der Kontrollgruppe zeigten die iiberlebenden transplantierten Tiere im postiseh/~misehen Verlatff eine signifikaaat niedrigere Plasmaharnstoffkonzentration (p < 0,005) und signifikant niedrigere Plasmareninwerte, die auch gegenfiber den Ausgangswerten signifikant erniedrigt waren (p < 0,005). Diese Effekte spreehen dafiir, dab in den interstitiellen Zellen der renomedullEren Autotransplantate hormonale Substanzen gebildet warden, die gegen ein experimentell ausgelSstes akutes Nierenversagen eine deuttieh protektive Vgirkung aufweisen. Die erniedrigten Plasmareninaktivit~ten k6nnen Ms Folge einer Inhibierung des zirkulierenden and/crier intrarenalen Renins durch im Transplantat gebildete Lipide gedeutet warden. Die )[nderungen in der Natrium- und Wasserausseheidung spreehen ftir Effekte zirkulierender Prostaglandine. S~hti~sselwSrter: Akute Niereninsuffizienz, renomedulliire Autotransplantate, Prostaglandine

Introduction Studies in the recent 15 years have given increasing evidence of the importance of renomedullary lipids for the control of intrarenal hemodynamies and systemic blood pressure [9]. Especially Muirhead's findings indicate a prevention of renovascular hypertension in the one kidney Goldblatt experiment by autologous and isologous transplants of renomedulJary tissue [10, 11, 12, 13]. The vasoactive effect of neutral and acid lipids and phospholipids originating from interstitiM cells of renal medulla has since found increasing interest, especially in the context with experimental forms of hypertension and human essentiell hypertension [3, 8]. The distinct effects of prostaglandins belonging to the acid lipids upon intrarenal hemodynamics (increase of total blood flow, enhanced blood flow preferentially of the outer medulla and the inner cortical zone, increased natriuresis and free water clearance) stimulate the interest in the effects, which these substances exert upon hemodynamie and functional changes of acute renal failure (diminished total blood flow, especially of the renal cortex, decreased glomerular filtration and urinary volume). In the course of acute renal failure-induced in rabbits by temporary ischemia--we have therefore studied the effects of renomedullary transplants-antagonistic to the cortical vasoeonstrietory renin-angiotensinsystem and potentially protective against the development of circulatory acute renal failure.

Material and Methods A. Renomedullary Autotransplants. Unilateral nephreetomy was performed in 18 rabbits, renal medulla was separated from the cortical zone under sterile conditions, divided into tissue cubes of approx. 1 mm and immersed into 20 ml of a tissue culture fluid (Medium 199, Grand Island Biological Company, Berkeley, Calif., USA). The immersion of renomedullary particles was reduced to small pieces in a Waring blender for 6--8 seconds at low speed and subsequently centrifuged for 60 see at 2500 × g. The tin'bid supernatant was rejected and the cellular sediment transferred to 10 ml fresh medium 199. After the addition of 500000 U penicillin G and 50 mg streptomyeine the cellular suspension was injected into the ventral abdominal wall of the animals in four tracts of 5 em length. The animals were kept subsequently under metabolic condities for 8 days. At the 9th day following autetransplantation a temporary ischemia of the remaining left kidney was performed (90 min eNmping of the renal artery after removM of the eapsule).--The following days urinary excretion, sodium concentration and total sodium excretion in the urine, urea concentration and sodium and potassium in the plasma were