Suplatasttosilate(IPD-1151T)の1∼
】V型
ア レル ギ ー 反 応 に 対 す る 作 用
松浦
直 資 ，森
裕志 ，永 井
博 弍 ，江 田
昭英
岐阜薬科大学薬理学教室* (1992年9月8日)
要 約:ク
ラ ス特 異 的 にIgE抗
体 産 生 抑 制 作 用 を 示 すsuplatasttosilate(IPD・1151T)の1∼W型
レル ギ ー 反 応 に 及 ぼ す影 響 を 検討 し， 以下 の成 績 を得 た ．1)1型7レ ッ トの48時 間 同 種 受 身 皮 膚 ア ナ7イ mg/kgの
ラ キ シ ー(PCA)は
ア
ルギ ー 反 応 の 実 験 モ デ ル で あ るラ
， 抗 原 誘 発30分 前 のIPD・1151T10∼100
経 口投 与 に よ り用 量 依 存 的 に抑 制 され ， そ の 抑 制 作 用 はN・5'と ほ ぼ 同 程 度 で あ った ． ま た ，
50mg/k9を
抗 原 誘 発 前 の 種 々 の時 間 に 経 ロ投 与 して 抑 制 作 用 の経 時 変 化 を観 察 した ． そ の 結 果 ，誘 発
0．5∼2時 間前 の投 与 に よ って抑制 作 用 を示 し， 特 に ，2時 間前 の投 与 に よ り最 大 抑 制 を示 した ． さ らに ， 感 作 ラ ッ ト腸 間 膜 肥 満 細 胞 の抗 原 に よ る 脱穎 粒 は ，10-5∼1r4g/mlIPD・1151Tに ッ ト腹 腔 滲 出細 胞(PEC)か れ た ．2)五
よ り， ま た ，感 作 ラ よ りそ れ ぞ れ 有 意 に 抑制 さ
型 ア レル ギ ー 反 応 の 実 験 モ デ ル で あ る ラ ッ トの 逆 受 身 皮 膚 ア ナ7イ
IPD・1151Tの
高 用量(200mg/kg)の
はIPD・1151Tに Artlms反
らの ヒス タ ミン遊 離 は10-49/mlIPD・1151Tに
よ っ て影 響 が み ら れ な か っ た ．3)皿
型 ア レ ル ギー 反 応 の 実 験 モ デ ル で あ る ウサ ギ の
応 ， 】V型ア レ ル ギ ー 反 応 の モ デ ル で あ る マ ウ ス の塩 化 ピ ク リル(Pc)に
よ び ヒツ ジ 赤 血球(SRBC)に
よ る足 踵 反 応 はIPD・1151Tの
の成 績 よ り，IPD・1151Tは1型
ラ キ シー(RCA)は
経 ロ投 与 に よ り抑 制 さ れ た が ， モ ル モ ッ トのForssmanshock
よる接触性皮膚炎 お
投 与 に よ って影 響 が み られ な か った ．以 上
ア レル ギ ー 反 応 を比 較 的 特 異 的 に抑 制 し，そ の作 用 機 序 に は肥 満 細 胞 の
脱 穎 粒 お よ び ヒ ス タ ミン遊 離 抑 制 作 用 が 関 与 す る こ とを 示唆 す る ．
緒
言
ギ ー 性 鼻 炎 ， ア ト ピー 性 皮 膚 炎 な ど の い わ ゆ る ア ト
(ｱ)一(2一(4一(3-ethoxy-2-hydroxypropoxy)phenylcarbamoyl)ethyl)dimethylsulfoniump-toluenesulfonate(su-
ピ ー型 ア レル ギ ー疾 患 の 原 因 抗 体 で あ る の で2)，IgE抗
platasttosilate;IPD-1151T，
体産 生 を 特 異 的 に抑 制 す るIPD-1151Tは
図1)は
種 々の ジ メチ ル
，感染免疫 の
ス ル ポ ニ ウム化 合 物 の免 疫 薬 理 学 的 検 討 の 結 果 見 い だ さ
低 下 な ど の生 体 防 御 機 構 に 対 す る副 作 用 の 少 な い ア レル
れ た 新 規 化 合 物 で あ る ． 我 々1)はIPD-1151Tが
ギ ー疾 患 の 根 治 療 法 剤 と して の 可 能 性 が 期 待 さ れ て い
免 疫 抑 制 剤 と は 異 な りIgMやIgG抗 こ と な く ， マ ウ ス のIgE抗
従来 の
体 産 生 を抑 制 す る
体 産 生 を ク ラ ス特 異 的 に抑
制 す る こ と を 見 い 出 し た ．IgEは
気 管 支 喘 息 ， ア レル
る ． 本 研 究 では ，CoombsandGen3)の の 分 類 に従 い ，IPD・1151Tの1∼
に対 す る作 用 を 種 々 の動 物 モ デ ル を 用 い て検 討 した ．
Fig. 1 Chemical structure of suplatast tosilate (IPD-1151T, phenylcarbamoyl]ethyl]dimethylsulfonium p-toluenesulfonate). *〒502岐
阜 市 三 田 洞 東5 -6-1
ア レル ギ ー反 応 】V型ア レル ギ ー反 応
(±)-[2-[4-(3-ethoxy-2-hydroxypropoxy)
DNP・As・IgE血 実
験
方
法
清 中 で37℃
，2時
間 イ ンキ ュベ ー
シ ョン して感 作 した ．感 作腸 間膜 をTyrode液
1． 使 用 薬 物
で 洗浄 し，
被 検 薬 物 と と も に30分 間 プ レイ ン キ ュベ ー シ ョソ した
IPD・1151Tは
大 鵬 薬 品 工 業 で 合 成 さ れ た も の で あ り，
実 験 に は 精 製 水 あ る い はTyrode液
に 用 時 溶 解 して 用 い
後 ， 抗 原 と して 最 終 濃 度10μg/mlDNP-Asを
加 え，さ
らに20分 間 イ ンキ ュ ベ ー シ ョン した ． 氷 冷 して反 応 を停
た ．比 較 薬 と し て 抗 ア レ ル ギ ー 剤 の ト ラ ニ ラ ス ト(N-5'，
止 し， 腸 間 膜 を10%ホ
キ ッ セ イ 薬 品 工 業)，
0．1%ト ル イ ジ ンブ ル ー溶 液 を 用 い て染 色 固 定 し， エ タ
タ ッ ト(FUT-175， ニ ゾ ロ ン(ナ
抗補 体 剤 の メシル酸 ナ フ ァモス
鳥 居 薬 品)，
カ ラ イ テ ス ク)お
ソ(hydrocortisone，
ス テ ロ イ ド剤 の プ レ ド
よ び酢 酸 ヒ ド ロ コル チ ゾ
萬 有 製 薬)を
用 い た ．N・5'は
当量 の
ノー ルお よび キ シ レン処 理 を 行 な って鏡 検 し，肥 満 細 胞 の脱 穎 粒 率 を 求 め た ． 5． ラ ッ ト腹 腔 肥 満 細 胞 か らの ヒス タ ミン遊 離 体 重180∼220gのWistar系
炭 酸 水 素 ナ ト リ ウ ム と と も に 精 製 水 あ る い はTyrode液 に 加 温 溶 解 し ，FUT-175は
ル マ リンお よ び0．1%酢 酸 を 含 む
生 理 食 塩 水 に 溶 解 して 用 い
生 理 食 塩 水 で8倍
雄 性 ラ ッ トの 腹 腔 内 に ，
希 釈 した 抗DNP-As・IgE血
清1ml
た ． ま た ， プ レ ドニ ゾ ロ ン お よ び ヒ ド ロ コ ル チ ゾ ソ は 水
を注 射 して 感 作 した ．24時 間後 ， ラ ッ トを放 血 致 死 せ し
性 懸 濁 液 と した ．
め ，1U/mlの
2． 実 験 動 物
内 注 射 し て 腹 腔 滲 出 細 胞(PEC)を
体 重180∼220gお
よ び90∼110gのWistar系
ラ ッ ト， 体 重200∼360gのHartley系 体 重2∼3kgの ddY系
雄性
雄 性 モ ル モ ッ ト，
日 本 白 色 種 ウ サ ギ お よ び9∼10週
齢 の
雄 性 マ ウス を 用 い た ． これ ら の動 物 は す べ て 日
ヘ パ リン を含 むTyrode液10mlを
液 で2回 洗 浄 後 ，PEC中 104個/mlに
腹腔
回 収 した 。Tyrode
の肥 満 細 胞 数 を 計 測 し，5×
調 整 した ． 被 検 薬 物 と と もに30分 間 プ レイ
ン キ ュ ベ ー シ ョ ン し た 後 ， 抗 原 と し て 最 終 濃 度10 μg/mlDNP-Asを
加 え ， さ ら に20分
間 イ ン キ ュベ ー
本 エ ス エ ル シ ー よ り購 入 し た ．
シ ョン した ．氷 冷 して反 応 を停 止 し， 上 清 中 の ヒス タ ミ
3． ラ ッ ト48時 間 同 種 受 身 皮 膚 ア ナ フ ィ ラ キ シ ー(PCA)
ン をMayら6)の
StrejanandCampbell4)の
方 法 に よ り作 製 し たdinitro-
mlを
研 化 学)1μgを
体 重 約160gのWistar系
む 生 理 食 塩 水0．5m1を4分
含 む 生 理 食 塩 水0．5 雌 性 ラ ッ トの 足 瞭 に4
分 割 し て 皮 下 注 射 した ．5日
後 にDNP・AsO．5mgを
含
割 し て ラ ッ トの 背 部:お よ び
腎 部 筋 肉 内 に 注 射 して 追 加 免 疫 した ． さ ら に ，10日 下 行 大 動 脈 よ り 採 血 し ， 抗DNP-As・IgE血 力 価1=256)を
後に
まず ，江 田 ら7)の 方 法 に 従 って ウサ ギ 抗 ラ ッ ト血 清 を 作 製 した 。す な わ ち ， 体 重 約2，5kgの 血 清1ml宛
ウサ ギに ラ ッ ト
を 隔 日に10回 耳 静 脈 内 に 注 射 して 免 疫 し，
最 終 免 疫 よ． り10日 後 に頸 動 脈 よ り採 血 して 抗 ラ ッ ト血 清 を得 た ．抗 血 清 を 熱 処 理 して 非 動 化 し， 凍結 乾燥 した ． RCAは
清(PCA
山 崎 ら8)お よびUngarら9)の
方 法 に 従 っ て惹
起 した ． す な わ ち ， あ らか じめ勢 毛 した 体 重90∼110g
得た．
抗DNP-As・IgE血
た． 6． ラ ッ ト逆 受 身皮 膚 アナ フ ィラ キ シー(RCA)
phenylatedascarisextract(DNP-As)lmgとislet-activatingprotein(科
方 法 に 従 っ て ， 蛍 光 法 に よ り測 定 し
清 を 生 理 食 塩 水 を 用 い て75倍
希
のWistar系
雄 性 ラ ッ ト背 部 の1側 の2ヵ 所 に ，20%ウ
釈 し ， あ ら か じ め 勇 毛 し た 体 重180∼220gのWistar
サ ギ抗 ラ ッ ト血 清 を 含 む0．Ol%エ バ ンス ブ ル ー生 理 食 塩
系 雄 性 ラ ッ ト背 部 の4ヵ
を 皮 下 注 射 して
水 溶 液0．1ml宛
含 む0．25%エ
バ
ヵ所 に は0．01%エ パ ンス ブル ー生 理 食 塩 水 溶 液 を 同量 注
尾静 脈 内
射 した ．2時 間 後 ， 放血 致 死 せ しめ て ，皮 膚 を剥 離 し，
感 作 し た 。48時
所 に0，lml宛
間 後 ，DNP-Aslmgを
ン ス ブ ル ー(Merck)生
理 食 塩 水 溶 液1m1を
に 注 射 し て 反 応 を 惹 起 し た ．30分
後 に放 血 致 死 せ しめ，
青 色 斑 を 指 標 に 皮 膚 を 切 り取 り ，Katayamaら5)の に 従 っ て1NKOHlm1を
加 え て37℃
，24時
方法 間 イ ン
を 皮 内 注射 した ．他 側 の 背部 皮 内 の2
青 色 斑 を指 標 に 直 径12mmの
パ ソ チ を用 い て 炎 症 部 位
を 打 ち 抜 き， 皮 膚 片 の重 量 を 測定 し，浮 腫 率 を 次 式 に よ り求 め た ．
キ ュ ベ ー シ ョ ン し て 皮 膚 を 溶 解 し た ． こ れ に0．6Nリ ン 酸 と ア セ トン(5:13)混 ル ー を 抽 出 し ，620nmで
液9mlを
加 え て エ パ ンス ブ
比 色 定 量 した ．
7． モ ル モ ッ トForssmansllock
4． ラ ッ ト腸 間 膜 肥 満 細 胞 の 脱 穎 粒 体 重180∼220gのWistar系
Glovskyら10)の
雄 性 ラ ッ トを 放 血 致 死
せ し め ， 腸 間 膜 を 摘 出 し ，Tyrode液
で6倍
希 釈 した 抗
方 法 に従 っ て 惹 起 した ． す な わ ち ，
ウ サ ギ 抗 ヒ ツ ジ 赤 血 球(SRBC)血 5，000，
東 芝 化 学 工 業)1m1/kgを
清(溶
血 素 ， 力 価1:
モ ル モ ッ トの 前 腕 静
脈 内 に注 射 し，抗 血 清 注 射1時 間 後 まで の 生 存 率 と致 死 時 間 を観 察 した ． 8． ウ サ ギArthus反
応
10mgのovalbumin(OA)を
フ ロ イ ン ト完 全 ア ジ ュ
バ ン トと と もに一 週 間 毎 に4回 ， ウサ ギ に 筋 肉 内 注 射 し て 免疫 し， 最 終 注 射 か ら11日 目に 重 層 沈 降 反 応 を 用 い て ， 血 中抗 体 価 を測 定 した ．2日 後 に 抗 体 価 に よ り群分 け し， あ らか じめ勢 毛 した ウサ ギ の 背 部 皮 内 の4ケ 所 に ，1% OA生
理 食 塩 水 溶 液 の0．2ml宛
を 注 射 して反 応 を 惹 起
した ．経 時 的 に 炎 症 部 位 の 長 径 と短 径 を ノ ギ ス で 測 定 し，炎 症 面 積 を算 出 した ． 9． マ ウ スの 塩 化 ピ ク リル(Pc)に AshersonandPtakll)の
よ る接 触 性 皮 膚 炎
方 法 に 従 い， あ らか じめ 勇毛
した マ ウス の 腹 部 に7%Pcの
エ タ ノ ー ル 溶 液0．lml
を塗 布 して 感 作 し，6日 後 に1%Pcの
オ リー ブ油 溶 液
0．02mlを 両 耳 朶 に塗 布 して反 応 を 惹 起 した ．24時 間後 両 耳 朶 の厚 さをdialthicknessgauge(尾
崎製 作 所)を 用
い て測 定 し， 誘 発 前 の 耳 朶 の 厚 さを 差 し引 き，腫 張 度 を
Fig. 2 Effect of IPD-1151T and N-5' on 48-hr homologous PCA in rats sensitized with anti-DNP As IgE serum. Drugs were given p.o. 30 min prior to the challenge with DNP-As. Each column represents the mean±S.E. of 6-7 animals. *,t: Statistically significant difference from the control at P < 0.05 and P < 0.01, respectively.
求 め た ．腫 張 度 に よ りマ ウス を 群 分 け し，さ らに3日 後 ， 同様 に 二 次 免 疫 を 行 な った ． 二 次 免 疫後6日
目に再 び誘
下 注 射 して 誘 発 した ． 右 後 肢 足 瞭 に は 生 理 食 塩 水25μ1
発 を行 な い， これ に 及 ぼ す 薬 物 の 影 響 を 観察 した ．
宛 を 同様 に 注 射 した ．24時 間 後 ， 左右 の 後肢 足 首 を一 定
10． マ ウ スのSRBCに
部 位 で切 断 し， 左 足 の 重 量 か ら右 足 の重 量 を差 し引 い て
Lagrangeら12)の SRBC25μ1を
よ る足 肢 反 応 方 法 に 従 い ，4×108個/mlの
遅 延 型 足 脈 反 応 に よ る腫 張 度 と した ．
マ ウス の 右 後 肢 足 脈 に 皮 下 注 射 して 免 疫
し，5日 後 ， 左 後 肢 足 脈 に4×109個/m1のSRBCを
皮
11． 統 計 処 理 結 果 は平 均 ±標 準 誤 差 で 表 し，Studentの
か検 定 を 用
Fig. 3 Time course of inhibitory activity of IPD-1151T on 48-hr homologous PCA in rats sensitized with anti DNP-As-IgE serum. IPD-1151T was given p.o. in a dose of 50 mg/kg at varying times before the challenge. Each datum represents the mean±S.E. of 6-8 animals. *,t: Statistically significant difference from the control at P < 0 .05 and P < 0.01, respectively.
Fig. 4 Effect of IPD-1151T and N-5" on antigen induced degranulation of rat mesenteric mast cells sensitized with anti-DNP-As • IgE serum in vitro. Each column represents the mean±S.E. of 8 ex periments. *J: Statistically significant from the control at P
】V型
ア レル ギ ー 反 応 に 対 す る 作 用
松浦
直 資 ，森
裕志 ，永 井
博 弍 ，江 田
昭英
岐阜薬科大学薬理学教室* (1992年9月8日)
要 約:ク
ラ ス特 異 的 にIgE抗
体 産 生 抑 制 作 用 を 示 すsuplatasttosilate(IPD・1151T)の1∼W型
レル ギ ー 反 応 に 及 ぼ す影 響 を 検討 し， 以下 の成 績 を得 た ．1)1型7レ ッ トの48時 間 同 種 受 身 皮 膚 ア ナ7イ mg/kgの
ラ キ シ ー(PCA)は
ア
ルギ ー 反 応 の 実 験 モ デ ル で あ るラ
， 抗 原 誘 発30分 前 のIPD・1151T10∼100
経 口投 与 に よ り用 量 依 存 的 に抑 制 され ， そ の 抑 制 作 用 はN・5'と ほ ぼ 同 程 度 で あ った ． ま た ，
50mg/k9を
抗 原 誘 発 前 の 種 々 の時 間 に 経 ロ投 与 して 抑 制 作 用 の経 時 変 化 を観 察 した ． そ の 結 果 ，誘 発
0．5∼2時 間前 の投 与 に よ って抑制 作 用 を示 し， 特 に ，2時 間前 の投 与 に よ り最 大 抑 制 を示 した ． さ らに ， 感 作 ラ ッ ト腸 間 膜 肥 満 細 胞 の抗 原 に よ る 脱穎 粒 は ，10-5∼1r4g/mlIPD・1151Tに ッ ト腹 腔 滲 出細 胞(PEC)か れ た ．2)五
よ り， ま た ，感 作 ラ よ りそ れ ぞ れ 有 意 に 抑制 さ
型 ア レル ギ ー 反 応 の 実 験 モ デ ル で あ る ラ ッ トの 逆 受 身 皮 膚 ア ナ7イ
IPD・1151Tの
高 用量(200mg/kg)の
はIPD・1151Tに Artlms反
らの ヒス タ ミン遊 離 は10-49/mlIPD・1151Tに
よ っ て影 響 が み ら れ な か っ た ．3)皿
型 ア レ ル ギー 反 応 の 実 験 モ デ ル で あ る ウサ ギ の
応 ， 】V型ア レ ル ギ ー 反 応 の モ デ ル で あ る マ ウ ス の塩 化 ピ ク リル(Pc)に
よ び ヒツ ジ 赤 血球(SRBC)に
よ る足 踵 反 応 はIPD・1151Tの
の成 績 よ り，IPD・1151Tは1型
ラ キ シー(RCA)は
経 ロ投 与 に よ り抑 制 さ れ た が ， モ ル モ ッ トのForssmanshock
よる接触性皮膚炎 お
投 与 に よ って影 響 が み られ な か った ．以 上
ア レル ギ ー 反 応 を比 較 的 特 異 的 に抑 制 し，そ の作 用 機 序 に は肥 満 細 胞 の
脱 穎 粒 お よ び ヒ ス タ ミン遊 離 抑 制 作 用 が 関 与 す る こ とを 示唆 す る ．
緒
言
ギ ー 性 鼻 炎 ， ア ト ピー 性 皮 膚 炎 な ど の い わ ゆ る ア ト
(ｱ)一(2一(4一(3-ethoxy-2-hydroxypropoxy)phenylcarbamoyl)ethyl)dimethylsulfoniump-toluenesulfonate(su-
ピ ー型 ア レル ギ ー疾 患 の 原 因 抗 体 で あ る の で2)，IgE抗
platasttosilate;IPD-1151T，
体産 生 を 特 異 的 に抑 制 す るIPD-1151Tは
図1)は
種 々の ジ メチ ル
，感染免疫 の
ス ル ポ ニ ウム化 合 物 の免 疫 薬 理 学 的 検 討 の 結 果 見 い だ さ
低 下 な ど の生 体 防 御 機 構 に 対 す る副 作 用 の 少 な い ア レル
れ た 新 規 化 合 物 で あ る ． 我 々1)はIPD-1151Tが
ギ ー疾 患 の 根 治 療 法 剤 と して の 可 能 性 が 期 待 さ れ て い
免 疫 抑 制 剤 と は 異 な りIgMやIgG抗 こ と な く ， マ ウ ス のIgE抗
従来 の
体 産 生 を抑 制 す る
体 産 生 を ク ラ ス特 異 的 に抑
制 す る こ と を 見 い 出 し た ．IgEは
気 管 支 喘 息 ， ア レル
る ． 本 研 究 では ，CoombsandGen3)の の 分 類 に従 い ，IPD・1151Tの1∼
に対 す る作 用 を 種 々 の動 物 モ デ ル を 用 い て検 討 した ．
Fig. 1 Chemical structure of suplatast tosilate (IPD-1151T, phenylcarbamoyl]ethyl]dimethylsulfonium p-toluenesulfonate). *〒502岐
阜 市 三 田 洞 東5 -6-1
ア レル ギ ー反 応 】V型ア レル ギ ー反 応
(±)-[2-[4-(3-ethoxy-2-hydroxypropoxy)
DNP・As・IgE血 実
験
方
法
清 中 で37℃
，2時
間 イ ンキ ュベ ー
シ ョン して感 作 した ．感 作腸 間膜 をTyrode液
1． 使 用 薬 物
で 洗浄 し，
被 検 薬 物 と と も に30分 間 プ レイ ン キ ュベ ー シ ョソ した
IPD・1151Tは
大 鵬 薬 品 工 業 で 合 成 さ れ た も の で あ り，
実 験 に は 精 製 水 あ る い はTyrode液
に 用 時 溶 解 して 用 い
後 ， 抗 原 と して 最 終 濃 度10μg/mlDNP-Asを
加 え，さ
らに20分 間 イ ンキ ュ ベ ー シ ョン した ． 氷 冷 して反 応 を停
た ．比 較 薬 と し て 抗 ア レ ル ギ ー 剤 の ト ラ ニ ラ ス ト(N-5'，
止 し， 腸 間 膜 を10%ホ
キ ッ セ イ 薬 品 工 業)，
0．1%ト ル イ ジ ンブ ル ー溶 液 を 用 い て染 色 固 定 し， エ タ
タ ッ ト(FUT-175， ニ ゾ ロ ン(ナ
抗補 体 剤 の メシル酸 ナ フ ァモス
鳥 居 薬 品)，
カ ラ イ テ ス ク)お
ソ(hydrocortisone，
ス テ ロ イ ド剤 の プ レ ド
よ び酢 酸 ヒ ド ロ コル チ ゾ
萬 有 製 薬)を
用 い た ．N・5'は
当量 の
ノー ルお よび キ シ レン処 理 を 行 な って鏡 検 し，肥 満 細 胞 の脱 穎 粒 率 を 求 め た ． 5． ラ ッ ト腹 腔 肥 満 細 胞 か らの ヒス タ ミン遊 離 体 重180∼220gのWistar系
炭 酸 水 素 ナ ト リ ウ ム と と も に 精 製 水 あ る い はTyrode液 に 加 温 溶 解 し ，FUT-175は
ル マ リンお よ び0．1%酢 酸 を 含 む
生 理 食 塩 水 に 溶 解 して 用 い
生 理 食 塩 水 で8倍
雄 性 ラ ッ トの 腹 腔 内 に ，
希 釈 した 抗DNP-As・IgE血
清1ml
た ． ま た ， プ レ ドニ ゾ ロ ン お よ び ヒ ド ロ コ ル チ ゾ ソ は 水
を注 射 して 感 作 した ．24時 間後 ， ラ ッ トを放 血 致 死 せ し
性 懸 濁 液 と した ．
め ，1U/mlの
2． 実 験 動 物
内 注 射 し て 腹 腔 滲 出 細 胞(PEC)を
体 重180∼220gお
よ び90∼110gのWistar系
ラ ッ ト， 体 重200∼360gのHartley系 体 重2∼3kgの ddY系
雄性
雄 性 モ ル モ ッ ト，
日 本 白 色 種 ウ サ ギ お よ び9∼10週
齢 の
雄 性 マ ウス を 用 い た ． これ ら の動 物 は す べ て 日
ヘ パ リン を含 むTyrode液10mlを
液 で2回 洗 浄 後 ，PEC中 104個/mlに
腹腔
回 収 した 。Tyrode
の肥 満 細 胞 数 を 計 測 し，5×
調 整 した ． 被 検 薬 物 と と もに30分 間 プ レイ
ン キ ュ ベ ー シ ョ ン し た 後 ， 抗 原 と し て 最 終 濃 度10 μg/mlDNP-Asを
加 え ， さ ら に20分
間 イ ン キ ュベ ー
本 エ ス エ ル シ ー よ り購 入 し た ．
シ ョン した ．氷 冷 して反 応 を停 止 し， 上 清 中 の ヒス タ ミ
3． ラ ッ ト48時 間 同 種 受 身 皮 膚 ア ナ フ ィ ラ キ シ ー(PCA)
ン をMayら6)の
StrejanandCampbell4)の
方 法 に よ り作 製 し たdinitro-
mlを
研 化 学)1μgを
体 重 約160gのWistar系
む 生 理 食 塩 水0．5m1を4分
含 む 生 理 食 塩 水0．5 雌 性 ラ ッ トの 足 瞭 に4
分 割 し て 皮 下 注 射 した ．5日
後 にDNP・AsO．5mgを
含
割 し て ラ ッ トの 背 部:お よ び
腎 部 筋 肉 内 に 注 射 して 追 加 免 疫 した ． さ ら に ，10日 下 行 大 動 脈 よ り 採 血 し ， 抗DNP-As・IgE血 力 価1=256)を
後に
まず ，江 田 ら7)の 方 法 に 従 って ウサ ギ 抗 ラ ッ ト血 清 を 作 製 した 。す な わ ち ， 体 重 約2，5kgの 血 清1ml宛
ウサ ギに ラ ッ ト
を 隔 日に10回 耳 静 脈 内 に 注 射 して 免 疫 し，
最 終 免 疫 よ． り10日 後 に頸 動 脈 よ り採 血 して 抗 ラ ッ ト血 清 を得 た ．抗 血 清 を 熱 処 理 して 非 動 化 し， 凍結 乾燥 した ． RCAは
清(PCA
山 崎 ら8)お よびUngarら9)の
方 法 に 従 っ て惹
起 した ． す な わ ち ， あ らか じめ勢 毛 した 体 重90∼110g
得た．
抗DNP-As・IgE血
た． 6． ラ ッ ト逆 受 身皮 膚 アナ フ ィラ キ シー(RCA)
phenylatedascarisextract(DNP-As)lmgとislet-activatingprotein(科
方 法 に 従 っ て ， 蛍 光 法 に よ り測 定 し
清 を 生 理 食 塩 水 を 用 い て75倍
希
のWistar系
雄 性 ラ ッ ト背 部 の1側 の2ヵ 所 に ，20%ウ
釈 し ， あ ら か じ め 勇 毛 し た 体 重180∼220gのWistar
サ ギ抗 ラ ッ ト血 清 を 含 む0．Ol%エ バ ンス ブ ル ー生 理 食 塩
系 雄 性 ラ ッ ト背 部 の4ヵ
を 皮 下 注 射 して
水 溶 液0．1ml宛
含 む0．25%エ
バ
ヵ所 に は0．01%エ パ ンス ブル ー生 理 食 塩 水 溶 液 を 同量 注
尾静 脈 内
射 した ．2時 間 後 ， 放血 致 死 せ しめ て ，皮 膚 を剥 離 し，
感 作 し た 。48時
所 に0，lml宛
間 後 ，DNP-Aslmgを
ン ス ブ ル ー(Merck)生
理 食 塩 水 溶 液1m1を
に 注 射 し て 反 応 を 惹 起 し た ．30分
後 に放 血 致 死 せ しめ，
青 色 斑 を 指 標 に 皮 膚 を 切 り取 り ，Katayamaら5)の に 従 っ て1NKOHlm1を
加 え て37℃
，24時
方法 間 イ ン
を 皮 内 注射 した ．他 側 の 背部 皮 内 の2
青 色 斑 を指 標 に 直 径12mmの
パ ソ チ を用 い て 炎 症 部 位
を 打 ち 抜 き， 皮 膚 片 の重 量 を 測定 し，浮 腫 率 を 次 式 に よ り求 め た ．
キ ュ ベ ー シ ョ ン し て 皮 膚 を 溶 解 し た ． こ れ に0．6Nリ ン 酸 と ア セ トン(5:13)混 ル ー を 抽 出 し ，620nmで
液9mlを
加 え て エ パ ンス ブ
比 色 定 量 した ．
7． モ ル モ ッ トForssmansllock
4． ラ ッ ト腸 間 膜 肥 満 細 胞 の 脱 穎 粒 体 重180∼220gのWistar系
Glovskyら10)の
雄 性 ラ ッ トを 放 血 致 死
せ し め ， 腸 間 膜 を 摘 出 し ，Tyrode液
で6倍
希 釈 した 抗
方 法 に従 っ て 惹 起 した ． す な わ ち ，
ウ サ ギ 抗 ヒ ツ ジ 赤 血 球(SRBC)血 5，000，
東 芝 化 学 工 業)1m1/kgを
清(溶
血 素 ， 力 価1:
モ ル モ ッ トの 前 腕 静
脈 内 に注 射 し，抗 血 清 注 射1時 間 後 まで の 生 存 率 と致 死 時 間 を観 察 した ． 8． ウ サ ギArthus反
応
10mgのovalbumin(OA)を
フ ロ イ ン ト完 全 ア ジ ュ
バ ン トと と もに一 週 間 毎 に4回 ， ウサ ギ に 筋 肉 内 注 射 し て 免疫 し， 最 終 注 射 か ら11日 目に 重 層 沈 降 反 応 を 用 い て ， 血 中抗 体 価 を測 定 した ．2日 後 に 抗 体 価 に よ り群分 け し， あ らか じめ勢 毛 した ウサ ギ の 背 部 皮 内 の4ケ 所 に ，1% OA生
理 食 塩 水 溶 液 の0．2ml宛
を 注 射 して反 応 を 惹 起
した ．経 時 的 に 炎 症 部 位 の 長 径 と短 径 を ノ ギ ス で 測 定 し，炎 症 面 積 を算 出 した ． 9． マ ウ スの 塩 化 ピ ク リル(Pc)に AshersonandPtakll)の
よ る接 触 性 皮 膚 炎
方 法 に 従 い， あ らか じめ 勇毛
した マ ウス の 腹 部 に7%Pcの
エ タ ノ ー ル 溶 液0．lml
を塗 布 して 感 作 し，6日 後 に1%Pcの
オ リー ブ油 溶 液
0．02mlを 両 耳 朶 に塗 布 して反 応 を 惹 起 した ．24時 間後 両 耳 朶 の厚 さをdialthicknessgauge(尾
崎製 作 所)を 用
い て測 定 し， 誘 発 前 の 耳 朶 の 厚 さを 差 し引 き，腫 張 度 を
Fig. 2 Effect of IPD-1151T and N-5' on 48-hr homologous PCA in rats sensitized with anti-DNP As IgE serum. Drugs were given p.o. 30 min prior to the challenge with DNP-As. Each column represents the mean±S.E. of 6-7 animals. *,t: Statistically significant difference from the control at P < 0.05 and P < 0.01, respectively.
求 め た ．腫 張 度 に よ りマ ウス を 群 分 け し，さ らに3日 後 ， 同様 に 二 次 免 疫 を 行 な った ． 二 次 免 疫後6日
目に再 び誘
下 注 射 して 誘 発 した ． 右 後 肢 足 瞭 に は 生 理 食 塩 水25μ1
発 を行 な い， これ に 及 ぼ す 薬 物 の 影 響 を 観察 した ．
宛 を 同様 に 注 射 した ．24時 間 後 ， 左右 の 後肢 足 首 を一 定
10． マ ウ スのSRBCに
部 位 で切 断 し， 左 足 の 重 量 か ら右 足 の重 量 を差 し引 い て
Lagrangeら12)の SRBC25μ1を
よ る足 肢 反 応 方 法 に 従 い ，4×108個/mlの
遅 延 型 足 脈 反 応 に よ る腫 張 度 と した ．
マ ウス の 右 後 肢 足 脈 に 皮 下 注 射 して 免 疫
し，5日 後 ， 左 後 肢 足 脈 に4×109個/m1のSRBCを
皮
11． 統 計 処 理 結 果 は平 均 ±標 準 誤 差 で 表 し，Studentの
か検 定 を 用
Fig. 3 Time course of inhibitory activity of IPD-1151T on 48-hr homologous PCA in rats sensitized with anti DNP-As-IgE serum. IPD-1151T was given p.o. in a dose of 50 mg/kg at varying times before the challenge. Each datum represents the mean±S.E. of 6-8 animals. *,t: Statistically significant difference from the control at P < 0 .05 and P < 0.01, respectively.
Fig. 4 Effect of IPD-1151T and N-5" on antigen induced degranulation of rat mesenteric mast cells sensitized with anti-DNP-As • IgE serum in vitro. Each column represents the mean±S.E. of 8 ex periments. *J: Statistically significant from the control at P
