914

Methicillin-Resistant

Staphylococcus

aureus

感 染 病 巣 に 対 す る有 機 色 素 剤gentiana violetの

局 所 治 療 剤 と して の 検 討

日本 医 科大 学 付 属第 一 病 院 薬剤 科 佐

Key

治

(平成4年2月13日

受 付)

(平成4年3月5日

受 理)

words:

S. aureus,

要 最 近,熱

守

傷 や 褥 瘡 な どの 皮 膚 病 巣 よ りMRSAが

MRSA,

gentiana

violet

旨 高頻 度 に分離 され て い るが抗 生物 質 に よ る治療 効 果

は 必 ず し も満 足 す べ き もの で は な い.有

機 色 素 剤gentianavioletがMRSA感

て 使 用 で き る 可 能 性 を検 討 す る た め,そ

の 抗 菌 効 果 に つ い て 基 礎 的 な 検 討 を 行 う と共 に 臨 床 的 な 効 果 に

つ い て も 併 せ 検 討 した.そ の 結 果,MRSAを の 最 小 殺 菌 濃 度(minimum 0.0025%∼0.08%を

bactericidal

示 し た.MRSAに

含 むSaureusの

認 め られ ず,持

あ る0.00016%∼0.00063%を

間 で3例

が 除 菌 さ れ,ま

た1例

液 はperml107CFU(107CFU/

下 まで に 殺 菌 す る効 果 を 示 し た.MRSA感

含 む 軟 膏 を 使 用 し た と こ ろ,該 軟 膏 塗 布 後1週 が4週

れ 故gentianavioletはMRSA感

inhibitory

含 む 培 地 に て72時 間 継 続 培 養 して も,菌 の 発 育 は

以 内 で 測 定 限 界(103CFU/ml)以

膚 病 巣 の12症 例 に0.1%gentianavioletを

か っ た.そ

割 合 で 加 え た 場 合 に お い て も,

最 小 発 育 阻 止 濃 度(minimum

続 した 抗 菌 効 果 が 認 め られ た.0.1%gentianaviolet溶

ml)のMRSAを15分

1∼2週

分 離 菌 株 間 で 相 違 は あ る もの の,≦

ヒ ト血 清 を25%の

血 清 非 添 加 時 と比 較 し て 変 動 し な か っ た.gentianavioletの concentration,MIC)で

臨 床 分 離 菌108株 に対 す るgentianaviolet

concentration,MBC)は

対 す るMBCは

染病 巣 の局所 治療 剤 とし

目で 除 菌 さ れ た.全

染皮

間 以 内 で8例,

症 例 に お い て 皮 膚 障 害 は 認 め られ な

染 皮 膚 病 巣 に 有 効 な 治 療 剤 と し て 使 用 で き る も の と思 わ れ

た.

序 Triphylmethane系 violet(pyoktanin ylrosanilin

ブ ドウ球 菌 性 敗 血 症 の 治 療 に 使 用 され て き

文 色 素 剤 に 属 す るgentiana

blue,crystal

chroride)の

violet,meth-

か し,最

gentianavioletの

希i薄溶 液 は グ ラ ム 陽 性 菌

に 対 し,選 択 的 な 殺 菌 効 果 を 示 し1),生 体 組 織 に 対 し て 刺 激 性 が 少 な い こ と か ら,湿

た2)3).し

潤性病 巣の二次

近 の 臨 床 分 離 菌 株 に 対 す る 効果 につ い て の検 討 は ほ とん

ど さ れ て い な い. 著 者 は 臨 床 材 料 よ り 分 離 さ れ たStaphylococcus aureus(S.aureus)108菌

株 に 対 す るgentiana

感 染 防 止 とそ の 乾 燥 化 を 目 的 と し た 薬 剤 と し て 使

violetのin

vitroで

の 殺 菌 効 果 を 検 討 し,

用 さ れ,ま た 抗 生 物 質 が 出 現 す る 以 前 に お い て は,

methicillin-resistant S.aureus(MRSA)に 低 濃 度 で 殺 菌 効 果 の あ る こ と,褥

別 刷 請 求 先:(〒102)東 -5

京 都 千 代 田 区飯 田橋3-5

病 巣 部 に お け るMRSA感

佐治

守

瘡 な い しは 熱 傷

染 に 対 し,本

で あ る こ と が 認 め ら れ た の で,今

日本 医科 大 学 付 属第 一 病 院 薬剤 科

対 し

剤 が有 効

日 まで に得 られ

た 結 果 を 一 括 し て 報 告 す る. 感 染 症 学雑 誌

第66巻

第7号

MRSAに

対 す るgentiana

材 料 と方 法 1)使

violet(pyoktanin

blue,試

薬 特 級,

ら び に そ の 対 照 薬 剤 と し て,

povidone-iodone(Isodine,明

治 製 菓)を 使 用 し た.

用 菌株

1989年5月

915

5)gentiana

和 光 純 薬)な

2)使

効果

た5).

用薬剤

gentiana

violetの

MRSAに

対 す る 最 小 発 育 阻 止 濃 度(minimum

inhibitory

にお け る 日本 医 科 大

concentration;MIC)の

gentiana MBCを

か ら1990年10月

violetとpovidone-iodoneの

測定

violetとpovidone-iodoneのMICと

臨 床 分 離 菌 のMRSA4株

を用 いて比 較

体 培 地 希 釈 法 に よ るMICの

測 定 に

学 付属第一病 院の入院患者 で皮膚感染巣 を持つ患

お い て は 薬 剤 の 色 に よ る 影 響 を 受 け,測

定 が 困難

者 の 病 巣 部 の 膿 な い し は 分 泌 液 を 中 心 に,ま

で あ っ た の で,寒

部 は 喀 疾,咽

た一

頭 粘 膜 な どか ら分 離 した 臨 床 分 離 菌

Saureus,総

計108株

お よ び抗 生 物 質 の 検 定 用 標

検 討 し た.液

わ ち,gentiana

天 平 板 希 釈 法4)6)を 用 い た.す

violet,povidone-iodoneを

れ 秤 量 後,滅

菌 精 製 水 で2倍

準 菌 株 と し て 使 用 さ れ る&aureusATCC6538を

そ の2mlを

対 照 菌 株 と し た.

れ 所 定=濃 度 の 平 板 を 作 り,そ

3)使

用培 地

ラ ー ヒ ン トン 寒 天 培 地(Difco)を

接 種 し,37℃, の発

増 菌 な らび に薬

育 が 見 ら れ な か っ た 最 小 薬 剤 濃 度 をMICと

し

たperml4μg

た 。 ま たMIC測

出培地 として使用

した.

定 後,そ

れ ぞ れ の 薬 剤 の最 小 発 育

阻 止 濃 度 を 含 む 平 板 を72時 間 継 続 培 養 を 行 い,36 時 間,54時

間 お よ び72時 間 後 に お け る 菌 の 発 育 の

有 無 を 経 時 的 に 観 察 し た.

4)gentiana

violetのS.aureus〔MRSAお

よび

methicillin-sensitive S.aureus(MSSA)〕 る 最 小 殺 菌 濃 度(minimum tration:MBC)の

bactericidal

concen-

を 用 い て,液

と臨 床

体 培 地 希 釈 法 に 準 じ て,

測 定 し た4).gentiana

violetを

秤 量 後,極

く 少 量 の 滅-菌 精 製 水 で 完 全 に 溶 解 し,滅 ラ ー ヒ ン トン 液 体 培 地 を 用 い て2倍 れ を 被 験 液 と し た.各

に 接 種 し,37℃,18時

6)0.1%gentianavioletのMRSAに

菌 ミュ

希釈系 列を作

被 験 菌 株 は液 体 培 地

間 培 養 し,そ

の 菌 液 と し た.

0.1%gentianavioletの

たMRSA1株

殺 菌 効 果 を混 釈 培 養 に

実 験 でMICO.000313%を

を 選 び 検 討 し た.こ

ラ ー ヒ ン ト ン 寒 天 培 地 に て,37℃

に 混 和 し て,perm1当

整 し た.0.1%gentianaviolet溶 液0.25m1を

そ れ ぞ れ100μ1を 37℃,18時

採 取 し,寒

間 培 養 後,菌

剤 の 最 小 濃 度 をMBCと iodoneのMRSAに

天 培 地 に 接 種 し て,

の 発 育 の 認 め られ な い 薬 し た.ま

対 す るMBCも

おSaureusをMRSAとMSSAに

る の に 際 し て は,National cal Laboratory 平成4年7月20日

たpovidone同様 に 測 定 し 分類す

Committee

Standards(NCCLS)に

液99.75mlに

加 え,環 境 温 度20℃

で100倍

の 培 養 液 よ り,

な る よ うに 調

間)保 取 し,直

天 培 地 を 流 し 込 み,混 菌 数 を 測 定 し た.殺 2回 行 い,1回

ち,

ち に滅 菌 精 製 水

に 希 釈 し た.希 釈 液 よ り0.2m1ず

シ ャ ー レ に 取 り,そ

菌

で 一 定 時 間(15秒,

30秒,1分,5分,15分,30分,1時 そ の 混 合 液 か ら0.1m1採

間 培 養 後,そ

の 菌 株 を ミュ で 一 晩 培 養 後,

り107CFUに

2倍 希 釈 系 列 の 被 験 液9mlにperm1108colony

を 加 え て,37℃,18時

示 し

発 育 し た-菌 を 白 金 耳 で 採 取 し,生 理 食 塩 水10ml中

formingunit(CFU)の

菌 液lml(108CFU/m1)

対 す る殺

菌 効 果 の 検 討7)

よ り測 定 し,5)の

標 準 菌 株(ATCC6538)1株

分 離 菌108株 MBCを

に対す

測定

Saureusの

た.な

混 釈 し て,そ れ ぞ の 平 板 に 被 験-菌 の18

18時 間 培 養 後 の 菌 の 発 育 の 有 無 を 観 察 し,菌

含 有 す る ミュ ラ ー

ヒ ン トン 寒 天 培 地 をMRSA検

り,こ

普 通 寒 天 培 地18mlに

よび ミュ

剤 感 受 性 測 定 用 培 地 に 使 用 し た.ま のoxacillinと2%のNaClを

それ ぞ

希 釈 系 列 を 作 製 し,

時 間 培 養 液(108CFU/ml)100μ1を

ミ ュ ラ ー ヒ ン ト ソ 液 体 培 地(Difco)お

な

つ2枚

の

れ ぞ れ に ミュ ラ ー ヒン トン寒 釈 培 養 を 行 い48時 間 後 の 生 菌効 果の測定 は同一条件 下で

の 操 作 で2枚

の シ ャ ー レ を 使 用 し,

形 成 さ れ た 集 落 の 平 均 を 求 め,残 存 生 菌 数 と した. 7)gentianavioletのMRSAに

for Clini-

性(MBC)に

準拠 し

MRSAに

対 す る抗 菌 活

及ぼす血 清の影響 対 す るgentianavioletのMBCに

及

佐治

916

ぽ す 血 清 添 加 の 影 響 を非 働 化(56℃,30分)し

た

守 ド,1%四

酸 化 オ ス ミウ ムで 二 重 固 定 し,ア ル コ ー

ヒ ト血 清 を添 加 した 群 と血 清 非 添 加群 に 分 け,被

ル脱 水 後,型

験 菌 と してMRSA3菌

片 を 作 製 し透 過 型 電 子 顕 微 鏡(日 立H-7100)を

CFU/ml存

株 を用 い て,接 種 菌 量107

在 下 で比 較 検 討 した.す

な わ ち,中 試

験 管 に血 清 を そ れ ぞ れ0,1.0,2.5,5.0ml入

れ,

次 い で滅 菌 精 製 水8.0,7.0,5.5,3.0mlと4)の

実

の 如 くエ ポ ン包 埋 を行 い,電 顕 用 切

い てMRSAの 固 定,ア

用

形 態 的 変 化 を観 察 す る と共 に二 重

ル コ ール 脱 水 処 理 ま で上 述 の 方 法 と同 様

なi操作 を行 い,酢 酸 イ ソ ア ミル で 置i換し臨 界 点 乾

験 と同様 な 方 法 で調 製 した 菌 液(108CFU/ml)1ml

燥,金 蒸 着 を 施 し走 査 型 電 子 顕 微 鏡(日 立S-405)

を そ れ ぞ れ に分 注 し,こ れ らの 混 合 液 に滅 菌 精 製

に て 同様 に 菌 体 表 面 の 変 化 を観 察 した.ま

水 を 用 い て 作 製 され たgentiana

菌 株 のMRSA生

釈 系 列 の 溶 液 を1m1ず

violetの2倍

つ 加 え,全 量10ml(最

清 濃 度0,10,25,50%)と な条 件 で 培 養 して,MBCを

し,4)の

希 終血

実 験 と同様

測 定 した.な お 液 体 培

地 希 釈 法 は検 定 薬 剤 の希 釈 に 液 体 培 地 を 使 用 して

菌 を滅 菌 生 理 食 塩 水 で 同様 に

37℃,18時 間培 養 した もの に つ い て も観 察 を行 い, これ を 対 照 と した. 9)対

象症 例

1990年6月

か ら1991年5.月 まで の 日本 医 科 大 学

い るが,本 実 験 に お い て は 培 地 中 に 含 有 す る蛋 白

付 属 第 一 病 院 の 入 院 患 者 でMRSA皮

が 測 定 値 に 影 響 を及 ぼ す こ とを考 慮 して,そ

患12症 例 に つ い て 検 討 した.男 性10例,女

釈 に は滅 菌 精 製 水 を 用 い た.ま 地 で37℃,18時

の希

た 被 験 菌 を液 体 培

間 培 養 を 行 っ た 時 と液 体 培 地 を 滅

菌 精 製 水 で10倍 希 釈 した 培 地 で 同 様 に培 養 した 時

た 同一

膚感 染症 罹 性2例,

年 齢40歳 か ら82歳,平

均66歳 で 術 後 ドレー ン挿 入

部 皮 膚 感 染 創6例,感

染 性 褥 瘡5例,熱

染 性 植 皮 創1例,悪

傷後 の感

性 腫i瘍摘 出部 位 の皮 膚 感 染 創

で は栄 養 条 件 が 多 少 異 な る け れ ど も,菌 の 発 育 に

1例 で あ った.基 礎 疾 患 は 胃癌5例,直

腸 癌2例,

は ほ とん ど差 が認 め られ な か った こ とを 予 備 実 験

膵 臓 癌1例,胆

胱 癌1例,

か ら確 認 した.

熱 傷1例

8)電 子 顕 微 鏡 に よ る形 態 的 変化 の 観 察 0.01%gentianaviolet溶 perml108CFUに

液 にMRSA生

ル タ ール ア ル デ ヒ

癌1例,膀

で あ っ た(Table1).

10)病 巣 部 か らのMRSAの 菌を

な る よ うに接 種 し,37℃,18時

間培 養 後 遠 沈 し,沈 渣 を2.5%グ

管 癌1例,肺

分 離,同

定

病 巣 部 に認 め られ た 化 膿 巣 を 滅 菌 綿 棒 あ る い は 滅 菌 ガ ー ゼ で擦 過 し,病 巣 部 の 膿 や 浸 出 液 の 付 着 した 部 分 の綿 棒 あ る い は ガ ーゼ を切 り出 し,液 体

Table 1 Present status of patients with MRSA infected skin lesions applied the ointment containing 0.1% gentiana violet

1): Wounds are based on the insertion 2): Wounds is based on the metastasis

of the drain. of cancer. 感 染 症学 雑 誌

第66巻

第7号

MRSAに

対 す るgentiana

培 地(チ オ グ リ コ レ ー ト培 地,栄 研)に 採 取 し37℃, 18時 間 増 菌 培 養 を 行 い,こ し,NCCLSに

の 培 養 液 を100μ1採

準 じMRSA検

violetの

Fig.

取

効果

1

Minimum

bactericidal

of

violet

(MBC) The

出 用 寒 天 培 地 に接

11)投

間 培 養 後,菌

の 発 育 を 観 察 し た.

of

与薬 剤の調製

agar

注射 用蒸 留 水

hr

(ワ ッ サ ー フ ー ソ ー,扶

桑 薬 品)に 溶 解 後,水

剤 の マ ク ロ ゴ ー ル 軟 膏(ソ ル ベ ー ス,大 に 練 合 し,全

量100gと

gentianaviolet液 12)除

in at

was

100p1

the

37•Ž,

MSSA

of

of

plate. and

incubated

strains were

for

solution plate

number of

dilution with

(1ml) this

The the

MRSA

two-fold

suspension

that,

Sixty-six

日 本 製 薬)

violet 100mgを

量100mlと

18hr

was

was

at

37•Ž.

mixed

with

incubated

for

was

counted.

of colony

MRSA

of

108CFU/ml

and

42

18

strains

of

tested.

注射 用

し た も の を0.1%

と し た.

菌 効 果 の判 定

対 象 症 例 のMRSA感 gentiana た,皮

violet

concentration against

し て0.1%gentianaviolet

軟 膏 を 調 製 し た.gentiana 蒸 留 水 に 溶 解 し,全

性 基

(9ml)

bacterial

After

gentianaviolet100mgを5mlの

gentiana

solution

genitiana

種 し37℃,18時

917

violet軟

染 皮 膚 病 巣 部 位 に0.1%

膏 を1日1回

単 純 塗 布 し た.ま

膚 損 傷 の 程 度 の 大 き い症 例 に つ い て は軟 膏

塗 布 前 に0.1%gentiana を 施 し た.該

violet溶

軟 膏 塗 布 後,病

液 で患 部 の洗 浄

巣 部 よ り適 時 検 体 を

採 取 し増 菌 培 養 を 行 い,MRSAが

検 出 さ れず 且 つ

37℃,18時

間 培 養 を 行 っ た 後,こ

れ ら4菌

株 を最

次 回 の増 菌 培 養 で も再 検 出 さ れ な い 場 合 を 除 菌 さ

小発 育阻 止濃 度 を含 む培 地 にて 更 に培 養 を継 続

れ た も の と 判 定 し た.塗

し,36時

布 後,MRSAが

陰 性化す

る ま で に 要 し た 日 数 も 測 定 し た. 成 1.基

か っ た.し

臨 床 分 離 株 に 対 し て,gentiana

letは0.0025%濃

た0.08%濃

を 含 むS.aureusの

し た(Fig.1).な

は90 方,povidone-

iodoneのMBCは1%,MICは0.5%を

示 し,4

あ っ た.つ

よ って 褐 色 を呈 して いた 培 地 の 色 調 は 消 失 して い

を 選 び,こ violetと 測 定 し,併 せ

お け る菌 の 発 育 阻 止 作 用 の 持 続 性 に つ 示 す 如 くgentiana

株 と もそ れ ぞ れ 異 な った 値 を

平 成4年7月20日

た.

間 に あ っ た.菌

2)gentianavioletのMRSAに

を接 種 後

対 す る殺 菌 効

果 MRSAの 0.08%濃

全 被 験 菌 株 がgentianavioletの 度 で 殺 菌 さ れ た こ と に よ り,本

へ の 使 用 濃 度 を 考 慮 し て,0.1%=濃 MRSAに

剤 の臨床

度 に お け る

対す る殺菌 力 につ いて経 時 的 に菌数 を

計 算 す る こ と に よ り 検 討 し た.0分 CFU/mlの

し,MBCは0.0025%∼0.02%,MICは

0.00016%∼0.00063%の

間 培 養),4菌

株 と も 菌 の 発 育 が 見 ら れ,povidone-iodoneに

い でMRSA4株

い て も 検 討 し た.Table2で

定後

含 有 し た 培 地 で37℃,18

度 に お い て は

対 す るMBCは

povidone-iodoneのMBCとMICを

対 し て4菌

0.5%povidone-iodoneを

全 被験 株 を殺菌

れ ら の 菌 株 に 対 す るgentiana

示

か し,MRSA-1とMRSA-7の2株

時 間 引 き 続 き 培 養 し た と こ ろ(36時

お 対 象 と し て 用 い たgentiana

violetのS.aureusATCC6538に 0.0025%で

vio-

度 でMSSAの50%,MRSAの

殺 菌 し た.ま

MRSA66株

violetに

の発 育 は観 察 され な

株 間 に 著 明 な 差 は 認 め ら れ な か っ た.MIC測

S.aureusの

てMICに

地 自 体 に はgentianaviolet

時 間 後 に 発 育 が 認 め ら れ た.一

対 す る 抗 菌 活 性

(MBC)

47%を

間 後 に お け る菌 の 発 育

に よ る 着 色 が 認 め ら れ,菌

violetとpovidone-iodoneのS

aureus(MRSA,MSSA)に

間,72時

を 観 察 し た と こ ろ,培

績

礎的検 討

1)gentiana

間,54時

生 菌 数 はgentianavioletの

り時 間 と 共 に 減 少 し,5分

で2.1×107 添 加 に よ

後 に は5.4×104CFU/

佐治

918

守

Table 2 Minimum bactericidal concentration (MBC) and minimum inhibitory concentration (MIC) of both gentiana violet and povidone-iodone against MRSA

Four

strains

broth

of MRSA

dilution

method. the

The

agar

on

counted

2)

of

Fig.

plate

means

time

and that

was

means

clinical MIC

the

was

bacteria

that

povidone-iodone

incubated

determined

by

violet

bacterial

not

grow

incubated

bacteria for

was

the

was

37•Ž

to

18m1

(108CFU/ml)

for

18hr.

The

grew

colony

was

even for

when

if the

agar

>_ 54hr

cultured

plate

(total

on

containing

the

? 72hr).

the

agar

plate

containing

響

下 と な っ た(Table3).

被 験 菌 と し てMRSA3株 及 ぼす血 清 の影

を 選 び,107CFU/ml

の 菌 浮 遊 液 に ヒ ト血 清 を 加 え,こ gentianavioletのMBCを

Table 3 Bactericidal activity violet against MRSA

of was

18hr.

後 に は 測 定 限 界(103CFU/ml)以

3)gentianavioletのMBCに

the

dilution

added

suspension at

by

agar

determined.

did

furthermore

MBC

determined

of gentiana of

plate

MIC

isolates. was

dilution

microlitter and

plate,

violet

from

1 legend).

of two-fold

hundred

agar

time

of

selected

(see (2ml)

agar

gentiana

MIC

were

One

the

the

Duration

the

な り,15分

on

Duration

MIC

mlに

solution

medium.

incubated

1)

method

れ に対 す る

測 定 し た.10%な

い し

of 0.1% getiana Table

4

Influences

bactericidal

of human

effect

whole

of gentiana

serum

violet

on

against

MRSA

Three One

strain

of MRSA

Bacterial saline the

suspension was

added

mixture

After

the

was

0.1%

diluted

to

solution

(0.2m1)

in

The

the

viable

experiments 1)

< 103CFU/ml

were

cells done

of

with

1/4

min was

distilled mixed

incubated bacteria

at

(99.75m1)

(0.1ml)

was

plate

for

triplicate.

isolates.

107CFU/ml

violet

at 20'C

1 : 100

clinical

cotaining

solution

medium

plate.

from

getiana

incubated mixed

diluted

and

selected

(0.25ml) to

was

that,

and

was

were

60 min.

water. with

at

to

37•Ž

in and

picked

the for

counted.

strains

isolates. added

were

Bacterial to

two-fold

each

human

to

The

10%,

25%

and

agar

tion.

Each

48hr,

hundred this

of

plate gentiana

each 50%,

tube

was

(at

56•Ž

tube

in

for the

30min)

on

incubated against

at

for

the

agar

18hr MRSA

whole

final

37•Ž from

at was

serum

37•Ž,

to

0%,

concentra-

for

18hr.

each

tube,

medium

of

more,

became

as the

up

was (1ml)

Further

manner

picked

clinical

solution

violet.

incubated was

from

of 108CFU/ml

the

respectively

inoculated

violet

random

(lml)

gentiana

was

microlitter

was

at

containing

inactivated added

The

tube

dilution

was

up

selected suspension

One

plate. and

and The

MBC

of

determined.

感 染 症 学雑 誌

第66巻

第7号

MRSAに

25%の

対 す るgentianavioletの

血 清 濃 度 の 場 合 に は血 清 非 添 加 時 と同 様 な

MBCを

示 し た が,50%血

gentiana

清 濃 度 に した 時 に は

violetのMBCは1/2か

ら1/4に 減 少 し,

血 清 に よ る 影 響 が 認 め ら れ た(Table4). 4)電

Photo.

効果

2

A:

MRSA

tion

for

Scanning

electronmicroscope

was 18hr

incubated 37•Ž.

919

incubated at

with

37•Ž.

with

findings 0.85%saline

(•~7,500)

0.01%gentiana

B: violet

solu-

MRSA for

was l8hr

at

(•~10,000)

子 顕 微 鏡 に よ る形 態 的 変 化

0.01%gentiana

violet溶

養 し て 得 ら れ た 菌 体(死

液 中 で37℃,18時

菌)と,対

てgentiana

vioiet処

増 加 し,ま

た繭

A

照 と し て滅 菌

生 理 食 塩 水 中 で 培 養 し て 得 ら れ た 菌 体(生 電 顕 像 を 観 察 す る と,透

間培

菌)の

過 型 電 顕 で は 対 照 に比 べ

理菌 体 の細胞 内 電子 密度 は

して い る像 槻

察 さ れ た(photo

1).走 査 型 電 顕 で も 対 照 に 比 しgentiana 理 の 菌 体 は 形 態 が 損 な わ れ,不

violet処

定 形 な形 状 を 示 す

像 が 随 所 に 観 察 さ れ た(photo2). II.臨

床的検討

Table1に

示 し た 疾 患 に お け るMRSA感

染巣

B Photo.

1

Transmission

electronmicroscope

findings A:

MRSA

tion

for

incubated 37•Ž.

was 18hr with

incubated at

37t.

with (x50,000)

0.01%gentiana

0.85%saline B: violet

solu-

MRSA for

was 18hr

at

(•~ 50,000)

A

か ら のgentianaviolet軟 を 検 討 し た.12症

例 中 塗 布 後,1週

さ れ た も の8例(症 10,11),1∼2週

B

た4週

あ っ た.こ

て もMRSAは

例3,4,9)

目 で 除 菌 さ れ た も の1例 れ らの 症 例 で は 再 検 に お い

検 出 さ れ な か っ た. 考

最 近,熱

間以内で除菌

例1,2,5,6,7,8, 間 以 内 で3例(症

に 認 め られ た,ま (症 例12)で

膏 塗 布 に よる除菌 効果

察

傷 や 褥 瘡 な ど の 皮 膚 病 巣 よ りMRSA

が 高 頻 度 に 分 離 さ れ て お り8)∼10)抗生 物 質 に よ る 治 療 効 果 は 必 ず し も満 足 す べ き も の で は な い 。 ま た mitomycinのwet

dressingをMRSA感

染 褥 瘡

な ど の 局 所 治 療 に 使 用 し有 効 で あ っ た と の 報 告11) 平成4年7月20日

佐治

920

もあ る.一 方,povidone-iodoneはMRSAに て 有 効 な生 体 消 毒 剤(antiseptic)と

対し し て,消 毒 の

守 合 に お い て も,血 値 を 示 し た.さ

み な らず 治 療 を も 兼 ね て 広 く使 用 さ れ て い る.

地 に て72時

Haleyら12)はMRSAに

れ ず,培

対 す るpovidone-iodone

の 殺 菌 効 果 を 検 討 し,0.01%∼1%溶 0.001%溶

液 で30秒,

液 で も1分 で死 滅 す る こ とを 報 告 した.

清 非 添 加 時 と比 較 し て 変 わ ら ぬ ら に,最

小 発 育 阻 止濃 度 を含 む 培

間 継 続 培 養 し て も,菌

の発育 は認め ら

地 中 に な お 紫 色 の 色 素 が 残 存 し,こ

の こ

と は キ ノ イ ド型 の 発 色 団 で あ るgentina (吸 光 度591ηm)が

violet

不 活 化 され ず に 存 在 して い る

ま たMycock13)はpovidone-iodoneのMRSAに

こ と を 示 唆 し て お り,そ

対 す るMICは0.25%∼0.5%の

が 認 め ら れ た も の と 思 わ れ る.gentianavioletと

間 にある ことを

示 した.し か しLarson14)はpovidone-iodoneは

皮

povidone-iodoneのMRSAに

対 す る抗菌 活 性 を

膚 に塗 布 後 持 続 した 抗 菌 効 果 は な く,血 液 や 喀 疾

比 較 す る と,被

な どの 生 体 成 分 存 在 下 で そ の 効 果 はす み や か に減

iodoneはMBCが1%,MICが0.5%と

弱 す る と し て い る.ま iodoneに5%ウ 用 させ,そ

た 辻 ら14)はpovidone-

マ血 清 存 在 下 で 菌 を 一 定 時 間 作

の殺 菌 効 果 を検 討 した と こ ろ,血 清 非

添 加 時 と比 べ1/16∼1/32に し て い る.小

効 果 が減 弱 す る と報 告

林 ら15)によ れ ば,MRSAは0.1%

povidone-iodoneを30秒

∼1分

に よ り死 滅 す るが,2%乾

験 菌4株

に お い てpovidoneほぼ一定

の 値 を 示 す が,gentiana

violetで

で あ り,4株 iodoneと

と も 異 な っ た 値 を 示 し,povidone-

比 較 す る と,MBCとMICに

著 しい 相

違 が 見 ら れ,povidone-iodoneに

間 作 用 させ る こ と

燥 酵 母 存 在 下 で は60分

ま た,gentiana

violetで

床 上 生 体 成 分 が 存 在 す る場 合,十

増 加 が 見 ら れ,走

分 な注 意 が 必 要

れ,不

高 濃 度 の 生 体 消 毒 剤 は 殺 菌 効 果 と共 に生 体 組 織 に も何 らか の 細 胞 傷 害 性 を示 し,肉 芽 形 成 を 抑 制 す る可 能 性 も あ る.生 体 消 毒 剤 を 局 所 の 治療 を 目 時 間 で の 殺 菌 効 果 と共 に

比 し よ り低 濃 度

で 効 果 を 発 揮 す る よ う に 思 わ れ た.

過 型 電 顕 に お い て,溶

と した.

はMBCが

0.0025%∼0.02%,MICが0.00016%∼0.00063%

の 処 理 に お い て も,生 存 が 見 られ た こ とか ら,臨

的 し て使 用 す る場 合,短

れ故 に持続 した抗菌効果

処 理 し たMRSAは

透

菌 や細胞質 内の電子密 度 の

査 電 顕 で は球 状 の 形 態 が 損 なわ

定 形 の 形 態 が 観 察 さ れ た.こ

れ らの形 態 的

所 見 は 菌 の 死 滅 に 関 連 し て い る 可 能 性-が推 測 さ れ た. こ の よ う にgentiana

violetはMRSAに

て,povidone-iodoneよ

対 し

り強 力 な 殺 菌 効 果 を 示 し,

病 巣 か らの 浸 出液 に よ っ て不 活 化 され な い こ と,

病 巣 か ら の 浸 出 液 で 効 果 が 減 弱 さ れ に く く,MIC

持 続 した 抗 菌 効 果 を 持 つ こ とが 必 要 で あ る と思 わ

以 上 の 濃 度 を 病 巣 部 で 維 持 で き れ ぽ,持

れ る. 一般 に 有 機 色 素 剤 の抗 菌 作 用 は深 達 性 で 血 清 蛋

菌 効 果 を 発 揮 す る こ と が 期 待 さ れ,低

白 の存 在 に よ って もそ の 作 用 の 減 弱 が 少 な く,更

は 従 来 皮 膚 刺 激 が な い と さ れ て き た が,湖

に収 敏 作 用 と生 体 組 織 に対 す る刺 激 性 が 少 な い な

に よ れ ば,皮

どの特=徴を 有 す る.著 者 はgentiana

レ ル ギ ー に よ る 作 用 で な く,高

濃度 での使用 に よ

ム陽 性 菌 に選 択 的 殺 菌 作 用 を 持 つ こ とか ら,本 剤

る 一 次 刺 激 作 用 で あ り,そ

の 安 全 域 濃 度 は

がMRSA感

gentianaviolet含

violetが グ ラ

染 病 巣 の 局 所 治 療 剤 と して 使 用 出来

続 した 抗 濃 度で の臨

床 使 用 が 可 能 で あ る と 思 わ れ る.gentianaviolet

膚 刺 激 は 存 在 し,そ

山 ら17)

の発 生 機 序 は ア

油 性 軟 膏 で0.1%,そ

の水溶 液

る可 能 性 を 検 討 す るた め,そ の 抗 菌 効 果 につ い て

で 皮 膚 に お い て は0.5%,口

腔 粘 膜 で は0.2%

の基 礎 的 な検 討 を 行 う と共 に 臨 床 的 な 効 果 に つ い

∼0 .3%で

者 は0.1%gentiana

て も検 討 した.iN

violet溶

ameusの

oitroに お い て,MRSAを

臨 床 分離 株(総

相 違 は あ る もの の,MBCは を示 した.ま たgentiana るMBCは

計108株)は

含む 菌株 間で S.

≦0.0025%∼0.08% violetのMRSAに

健 常 ヒ ト血 清 を25%の

あ る と し て い る.著

液 が107CFU/mlのMRSAを15分

で 測 定 限 界(103CFU/ml)以

以 内

下 ま で 殺 菌す る こ と

を 認 め た の で,そ の 臨 床 使 用 濃 度 を ひ と ま ず0.1%

対す

割合 で加 えた場

と し,病

巣 か ら の 浸 出 液 の 吸 収 とgentianaviolet

が 必 要 以 上 の 高 濃 度 で 病 巣 患 部 に 貯 留 させ な い こ 感 染 症学 雑 誌

第66巻

第7号

MRSAに

対 す るgentiana

violetの

とを 目的 と して,水 溶 液 性 基 剤 で あ る マ ク ロ ゴ ー ル 軟 膏 を 選 択 し,0.1%gentianaviolet軟 製 し た.該 軟 膏 を12症 例 のMRSA感

膏 を調

の 単 純 塗 布 を 施 行 した 所,12症

例 中塗

布 後1週

間 以 内 で 除 菌 され た もの8例,1∼2週

以 内 で3例 に 認 め られ,ま た4週

目で 除 菌 され た

も の1例 で あ った.症

著 効 を示 し,症

例5は

例5と10は

基礎 疾 患 に体 表 の 約60%が

熱 傷(第III度)

921

habior of bacteia toward gentiana Exp. Med., 33: 569-586, 1921. 2)

染 皮 膚病 巣

に1日1回

効果

日 本 公 定 書 協 会:

塩 化 メ チ ル ロザ ニ リ ン.日

局 方 注 解 第 一 部(第7改

本薬

南 江 堂,

4)

局 方 解 説 書, p.327-330, 五 島 瑳 智 子, 金 子 康 子:

5)

検 査, 27: 1397-1405, 1983. 菅 野 治 重: 細 菌 検 査 に お け るMRSAの

6)

準. 最 新 医 学, 44: 2510-2514, 1989. 五 島 瑳 智 子, 徐 慶 一 郎, 河 喜 多 龍 祥, 小 酒 井 望,

塩 化 メ チ ル ロザ リニ ン.

抗 生 物 質 に よ る全 身 投 与 が で き な い状 態 に あ った

発 育 阻 止 濃 度(MIC)測

皮 膚 病 変 よ り陰

p.217-222,

東 京, 1965. 日 本 公 定 書 協 会:

三橋

でMRSAは

正),

J.

3)

に侵 され,植 皮 後,加 療 中 に ネ フ ロ ーゼ を 併 発 し, が,軟 膏 塗 布 後2日

violet.

7)

進,

西 野 武 志,

8)

大 沢 伸 孝,

田波

判 定 基

洋:

最小

定 再 改 訂 に つ い て.

Chemotherapy, 29: 76-79, 1981. 島 田 慈 彦: 繁 用 消 毒 剤 の 実 験 的 条 件 下 に お け る 殺 菌 力 の 検 討.

性 化 した.症 例10は 基 礎 疾 患 が 膀 胱 癌 で あ り,転

日本薬

廣 川 書 店, 東 京, 1986. 薬 剤 感 受 性 測 定 法. 臨 床

北 里 医 学,

512-525,

移 に よ る会 陰 部 か ら陰 嚢 に わ た る皮 膚 悪 性 腫 瘍 摘

真 志,

田 口幹 雄,

出後 の 感 染 創 で あ った が,皮 膚 刺 激 作 用 を 認 め ら

高橋

淳,

れ る こ と も な く,軟 膏 塗 布 後4日

木 寛, ム バ キ.ン バ ア ラ, 渡 辺 貴 和 雄: 老 人 病 院 に お け る 細 菌 性 肺 炎 と褥 瘡 感 染 の 起 炎 菌 に 関 す る

陰 性 化 し て い る.ま た 症 例12は 基 礎 疾 患 が 胃癌 で あ り,右 下 肢 部 の 感 染 性褥 瘡-(第IV度)の 損 傷 程 度 は 大 き く,0.1%gentiana

violet溶 液 で

洗 浄 後,軟 膏 を 塗 布 した.塗 布 後,経

時 的 に病 巣

部 よ り菌 量 の 減 少 が 見 られ た が,MRSAを 除 菌 す る の に28日 間 を要 した.全 検 で もMRSAは gentiana

皮膚 の

完全 に

症例 において再

認 め ら れ ず,最

長1ヵ

月間

violet軟 膏 を 塗 布 し続 け た 症 例 を 含 め

て,す べ て の症 例 に皮 膚 傷 害 は 認 め られ な か っ た. 従 っ てgentiana

violetは 安 価 で 入 手 し易 く,軟 膏

製 剤 と して 調 製 も容 易 で あ る こ とか ら,MRSA感 染 皮 膚 病 巣 に対 し有 効 な治 療 剤 と し て使 用 で き る も の と思 わ れ る. 謝辞:稿 を終 えるに当た り,御 指導 ・御校閲を賜 った 日 本医科大学第2内 科学教室赫

彰郎教授 に深謝する と共に

本研究に貴重 な御助言 を頂戴 した同老人病研究所免疫部門 大 国寿士教授,同 第2内 科葉山修陽博士,同 第2外 科内山 喜一郎博士,同 皮膚科星

文 献 1) Churchman, J. W.: Further studies on the be-

平 成4年7月20日

吉 田 俊 昭,

坂本

靖,

山本

隆 杉 正 和,

屋 富 祖 夏 樹,

鈴

内 感 染 菌 と し て のMRSA-.

T.

J.: Properties of methicillin-resitant Staphylococuss aureus colonizing patients in a burns unit. J. Hosp. Infect., 7: 137-148, 1986. 10) Boyce, J. M., White, R. L., Causey, W. A. & William, W. R.: Burn units as a source of methicillin-resistant Staphylococuss aureus infections. J. A. M. A., 27: 2803-2807, 1983. 11)

石 橋 経 久, 富 永 雄 幸, 松 尾 啓 左: に 対 す る 当 院 の 治 療 対 策.

MRSA院

感 染 症 誌,

内 感染 3: 53, 1990.

12) Haley, C. E., Cason, M.M., Smith, J.W., Ludy, J. P. & Mackowiak, P. A.: Bactericidal activity of antiseptic aginst methicillin resistant Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol., 21: 991 -992

, 1985.

13) Mycock, G.: Methicillen/antisepticresistant Staphylococuss aureus. Lancet, 26: 949-950, 1985. 14) Larson, E.: Guideline for topical antimicrobial agents. Am. J. Infect. Control, 16: 253 -265 15)

辻

, 1988. 明 良, 関 口金 雄,

川 崎 賢 二,

小川

各 種 消 毒 薬 の 作 用 濃 度,

作用

時 間 お よ び 血 清 添 加 に よ る 殺 菌 効 果 の 変 動.

感染

正 俊,

16)

五 島 瑳 智 子:

金 子 康 子,

症 誌, 53: 292-303, 1979. 小 林 寛 伊,都 築 正 和, 細 渕 和 茂 ニメ チ シ リ ン耐 性 黄 色 ブ ドウ 球 菌 に 対 す る 消 毒 剤 の 効 果. 手 術 医 学, 8: 477-480, 1986.

申 し上げ ます. 尚,本 論文の要 旨は 日本薬学会第110年会(1990,札 幌),

大石和徳

宇 塚 良 夫,

Chemotherapy, 34: 240-249, 1986. 9) Lacey, R. W., Barr, K. W., Barr, V. E. & Inglis,

御協力頂いた同付属第一病院中央検査室 ・細菌部門,中 央

第90回 日本皮膚科学会総会(1991,京 都)に おいて発表 し た一

力 富 直 人,

検 討(第1報)-院

健二博士 に感謝致 します.ま た

研究室 ・電子顕微鏡部門ならびに薬剤科の皆様 に厚 く御礼

宍 戸 春 美,

1982.

毅,

目 にMRSAは

松 本 慶 蔵,

12:

永武

17)

湖 山 里 美,

高木

修,

岩崎

隆,

服 部 怜 美,

光 芳:ピ オ ク タ ニ ン に よ る 皮 膚 障 害. 17: 385-389, 1975.

本田

皮 膚 臨 床,

佐治

922

守

Effect of Gentiana Violet against Methicillin-Resistant Staphylococcusaureus (MRSA) Mamoru SAJI Sectionof Pharmaceutics,the First Hospitalof NipponMedicalSchool The

bactericidal

studied

both 1)

and

2) within

and

and

MBC

The

number by

under

3)

infected

The

not

of cells

the

were

an

skin

lesions,

The

side

against

violet

MRSA

in

medium

(MIC)

for

72

was hr

containing was

of gentiana human

in

isolated

the

from

clinical

specimens

was

follows: violet

to MRSA

whole

serum

which

medium

as

was

exists

decreased the

final

between in

the

0.0025% medium.

to 5.4 •~

104

CFU/ml

concentration,

and

also

later.

activity

medium

as

if 25%

107 CFU/ml

concentration

ointment

are

(MBC)

2.1 •~

15 min

MRSA

obtained

even

gentiana

inhibitory

in the

using

violet results

influenced

0.1%

inhibitory and

bacteria By

gentiana

concentration

was

existing

Minimum

the

of vivo.

103 CFU/ml

0.00063%,

4)

in

bactericidal the

5 min

decreased

with

effect

vitro

Minimum

0.08%

and

in

not

of gentiana

violet

influenced

even

to

MRSA

was

if gentiana

between

violet

0.00015%

was

incubated

at 37•Ž. 0.1%

eliminated

gentiana

violet

to

completely

from

the

12

cases

of patients

infected

areas

of

with the

the

skin

MRSA

within

4

weeks. 5) ointment It lesions

effects

containing is

suggested

infected

of

gentiana

gentiana that with

gentiana

violet

were

not

observed

in

all

cases

during

the

use

of

the

violet. violet

may

be one

of

the

useful

drugs

for

the

treatment

of

the

skin

MRSA.

感染症学雑誌

第66巻 第7号