Zeitschrift fL~r

LebensmittelUntersuchung und-Forschung

Z. Lebensm. Unters.-Forsch. 163, 272--273 (1977)

@ J. F. Bergmann-Verlag 1977

Patulinbestimmung in Lebensmitteln Teil II: Patulinbestimmung in Tomaten, Birnen, Apfeln, Gurken, Pflaumen Kurt Polzhofer Unilever Forschungsgesellschaft mbH, Behringstrage 154, D-2000 Hamburg 50

Determination of Patulin in Foodstuffs Part II: Determination of Patulin in Tomatoes, Pears, Apples Cucumbers and Plums Summary. An analytical method for the determination of Patulin in tomatoes, pears, apples, cucumbers and plums is described. The determination limit of the method is 40 ~tg Patulin/kg. With additions between 100--500 ~tg Patulin/kg the recovery rates lie between 86--95%. After a pre-purification of the crude extract by column chromatography and liquid-liquid extraction the Patulin is determined thin-layer chromatographically by reflectance measurement at 273 nm.

liches Analysenverfahren eingefiihrt werden soll. Die vorliegende Methodewird imRahmen der Kommission ffir Mykotoxinanalytik im Bundesgesundheitsamt [1] diskutiert und erprobt werden und soll - - evtl. zusammen mit anderen Methoden - - als Basis fiir das amtliche Analysenverfahren dienen. Prinzip der Methode (s. auch Schema). Die zerkleinerte Probe auf Celite aufziehen und mit Chloroform extrahieren. Den Extrakt durch Fliissig-fliissig-Verteilung reinlgen. Patulin diinnschichtchromatographisch im Vergleich zu einem Patulinstandard durch Remissionsmessung bei 273 nm bestimmen.

Laborbedalf Ger/ite und Reagentien (s. Lit. [2]). Arbeitsgang

Zusammenfassung. Es wird eine Analysenmethode zur Bestimmung von Patulin in Tomaten, Birnen, Apfeln, Gurken und Pflaumen beschrieben. Die Bestimmungsgrenze der Methode liegt bei 40 gg/kg. Bei Zus~itzen yon 100--500 ~tgSubstrat betragen die Wiederfindungsraten 86--95%. Nach Vorreinigung der Extraktions16sung durch S~iulenchromatographie und Fltissigfltissig-Verteilung wird Patulin densitometrisch bei 273 nm bestimmt.

Einleitung Tomaten, Birnen, )~pfel, Gurken und Pflaumen werden, besonders in ,,Braunf~iulejahren", h/iufig von Penicillium expansum befallen. Als Stoffwechselprodukt des Schimmelpilzes kann Patulin gebildet und in das Substrat abgegeben werden. Bei stark wasserhaltigen Frucht- und Gemtisearten kann Patulin durch Diffusion in die ganze Frucht gelangen. Bei Apfeln findet man das Toxin nur in den entsprechenden Faulstellen. Das Bundesgesundheitsamt ist derzeit bestrebt, eine Analysenmethode zu entwickeln, die auf verschiedene Substrate anwendbar ist und die sp~iter als amt-

1. Vorbereitung der Proben, Extraktion und Reinigung (s. Schema) Ein Durchschnittsmuster der entsprechenden Proben in einem Mixget,it zerkleinern. 50 g der Probe in ein 500-ml-Becherglas einwiegen und mit 25 ml Aceton versetzen. Die Mischung mit dem Ultra-Turrax 3 rain homogenisieren und mit 50 g Celite 545 versetzen. Die pulverige Masse in ein Chromatographierohr einstampfen, mit 300 ml Chloroform bei maximaler Flief3geschwindigkeit eluieren und das Eluat bei 35~ i. Vak. zur Trockene eindampfen. Den Riickstand mit 50 ml Methanol, 75 ml Natriumchloridl6sung und 60 ml n-Hexan versetzen. Nach kr~ifligem Durchschiitteln im 250-ml-Schiitteltrichter die Hexanphase abtrennen und verwerfen. Die Hexanextraktion noch dreimal mit je 60 ml n-Hexan wiederholen. Die w~Brig-methanolische L6sung i. Vak. bei ca. 35~ C bis zur H~ilfte eindampfen und den Rtickstand mit festem Natriumchlorid bis zur S~ittigung versetzen. Die w~i6rige L6sung dreimal mit je 30 ml Athylacetat extrahieren. Die vereinigten AthylacetatAusziige iiber Natriumsulfat trocknen und i. Vak. auf ca. 2 ml eindampfen. Nach fJberftihrung dieses Extraktes in ein 5-ml-ReactiviaI (Abdampfr~Shrchen der Fa. Eurochemie, Rotterdam) die L/Ssung im Ieichten Stickstoffstrom zur Trockene einengen. Den Riickstand in 2,5 ml Chloroform aufnehmen (=V).

2. Diinnschichtchromatographie 25gl (Vp) der ProbeI6sung aus 1. sowie 3mal 25 ~tl Standard16sung1 auf die DC-Fertigplatte aufgetragen und eindimensional hintereinander in folgenden Fliel3mitteln chromatographieren: 1. n-Hexan/Di~ithyl~ither (1 +4), 2. Di~ithyl~ither. 1

Herstellung der Patulinstandard-L6sung s. Lit. [2].

K. Polzhofer: Patulinbestimmung in Lebensmitteln. II. Schema I. Bestimmung von Patulin in Tomaten, Bimen, Apfeln, Gurken und Pflaumen 50 g Substrat Im Waring-Blendor zerkleinern 25 ml Aceton zugeben 50 g Celite 545 zugeben Mit 300 ml CHC13 eluieren CHC13Extrakt

50mlMethanolzugeben 60ml n-Hexan zugeben 75ml 10%igeNaC1-LSsung zugeben w~if3rige Phase

3 mal 60 ml n-Hexan zugeben

w~iBrige Phase Methanol i. Vak. abziehen W~il3rige Phase mit NaCI s~ittigen 3 ma130 ml Athylacetat zugeben

w~i3rige Phase

organischer Extrakt

1. Na2SO 4 zugeben 2. Im Vakuum eindampfen

Riickstand

2,5 ml CHC13 zugeben

L6sung ftir DC

I

DC

Die Bestimmungsgrenze der vorliegenden Analysenmethode liegt bei 40 ~tg Patulin/kg Substrat. Die Nachweisgrenze betr~igt ca. 20 ~tg/kg. Bei Zusfitzen von 100--500 gg Patulin/kg Kontrollsubstrat liegen die Wiederfindungsraten bei 82--90%.

1. Lucas, W.: Bericht tiber die 6. Sitzung der Kommission fiir Mykotoxinanalytik des Bundesgesundheitsamtes am 19.3.1976 in Karlsruhe yore 23.3.1976 2. Polzhofer, K.: Z. Lebensm. Unters.-Forsch. (ira Druck) Eingegangen am 6. Dezember 1976

Riickstand

HexanPhase

Nachweis- und Bestimmungsgrenzen

Literatur

Im Vakuum eindampfen

Hexanphase

273

Schicht: SILG-25 UVzs 4 Flieflmittel: 1. n-Hexan: Ather

= 1:4 2. Ather Bestimmun 9 : Densitometrisch bei 273 nm