Revue Fran~aise de Transfusion et lmmuno-h6matologie Tome XVIII. - - N O 2. - - 1975

183

D@istage de l'antig$ne H B s par les tests au latex par M. G A R R E T T A , A.M. C O U R O U C E - P A U T Y et A. M U L L E R Centre National de T r a n s f u s i o n Sanguine,

PARIS-ORsAY.

L'utilisation de techniques faisant appel h l'agglutination de particules de latex r e m o n t e /~ 1956, date ~ laquelle SINGER et PLOTZ pr6sentent u n nouveau test de d6tection du facteur rhumatoYde [19]. A la suite des travaux de GRAHAM et KALISH en 1967, la ddtection des gonadotrophines chorioniques urinaires chez la f e m m e enceinte est pratiqu6e selon le m~me principe [10]. L'introduction du test d'agglutination des particules de latex pour le ddpistage de l'antig6ne HBs (Australie) est due h LEACH et ROCK qui publient en 1971 les r6sultats prdliminaires d'une technique rapide, ne n6cessitant a u c u n 6quipement spdcial et dont la sensibilit6 s'av6re 6tre comparable h celle de l'61ectroimmunodiffusion (E.I.D.) [13]. Depuis, une vingtaine d'auteurs ont exp6rimentd p o u r le d6pistage de l'antig6ne HBs des particules inertes, diffdrentes aussi bien par leurs caractdristiques propres que p a r l'origine des i m m u n o g l o b u l i n e s les sensibilisant. Nous voulons exposer ici le bilan de ces quelques ann6es de travaux et prdsenter notre exp6rience rdcente c o n c e r n a n t ce type de technologie, expdrienc e double se r a p p o r t a n t , d ' u n e part, g la pratique manuelle traditionnelle de ces tests et, d ' a u t r e part, ~ l'application ~ l ' a u t o m a t i s a t i o n de ceux-ci sur des 6quipements Groupamatic.

I.-

Principales

caract6ristiques

connues.

A u n e exception pros, les particules utilisdes pour le ddpistage de l'antig6ne HBs sont t o u j o u r s du latex et p r o v i e n n e n t de laboratoires souvent diff6rents : Behringwerke [4, 9, 14, 16, 21], Difco [6], Hoechst [12, 17], H y l a n d [3], Kalstead [15] ou Pfizer [2, 12, 13, 20, 21]; l'exception concerne les travaux de POLAK, O/1 le latex est remplacd par des particules de c h a r b o n [18]. Sur ces particules inertes sont fix6es des i m m u n o g l o b u -

184

GARRETTA

M., C O U R O U C E - P A U T Y A.M. et M U L L E R

A.

lines, s o i t d ' o r i g i n e h u m a i n e : a n t i c o r p s a n t i H B s d e s u j e t h 6 m o p h i l e [15], s o i t d ' o r i g i n e a n i m a l e : a n t i c o r p s a n t i H B s d e , c h e v a l [18], d e c o b a y e [2, 6, 12, 13, 20, 21] o u d e l a p i n [4, 9, 12, 14, 16, 21]. Des c a r a c t 6 r i s t i q u e s se r e t r o u v e n t c o m m u n e s a u x d i f f 6 r e n t s t r a v a u x r e l e v 6 s d a n s la l i t t 6 r a t u r e . L a r a p i d i t 6 d ' e x 6 c u t i o n , l ' i n u t i l i t 6 d ' u n 6 q u i p e m e n t sp6cial, l a s t a b i l i t 6 d u r 6 a c t i f p e n d a n t p l u s i e u r s s e m a i n e s h + 4 °, la p o s s i b i l i t 6 d e d 6 t e c t e r les a n t i c o r p s a n t i H B s p a r i n h i b i t i o n d e l ' a g g l u t i n a t i o n c o n f i r m e n t le p o t e n t i e l 61ev6 d e ces t e s t s ; p a r c o n t r e , d i f f 6 r e n t s f a i t s e x p l i q u e n t q u e ces t e s t s n e s o i e n t p a s e n c o r e r 6 e l l e m e n t u t i l i s a b l e s e n r o u t i n e : la s e n s i b i l i t 6 e n g 6 n 6 r a l c o m p a r 6 e h celle d e I'E.I.D. e s t d i f f i c i l e j u g e r , la s p d c i f i c i t 6 e s t s o u v e n t m 6 d i o c r e , l a r e p r o d u c t i b i l i t 6 d e s l o t s a r a r e m e n t 6t6 t e s t & , les 6 c h a n t i l l o n s d 6 p i s t 6 s s o n t u n i q u e m e n t o u p r e s q u e des s6rums et non des plasmas.

TABLEAU I

A u t e u r s f a v o r a b l e s ?z u n e u t i l i s a t i o n en r o u t i n e de la t e c h n i q u e

ANNI~E

1971

AUTEURS

LEACH et ROCK BONACKER

1972

1972

et

1973 . . . . ] 1973 . _.

1974

. ..

1974

...

Cobaye

SPt~CIFICITE (FAUN POSITIFS)

UTILISATION EN ROUTINE

E.I.D.

3 %

oui

= E.I.D.

2,6 %

oui

= E.I.D.

oui

RI.A.

0 tr~s Faible 2,1%

oui

SENSIBILITI~

STARK

RIVERS

LEHMANN et GUST NIANTHEY et

1974

Pfizer (latex

ORIGINE DES ANTICORPS

BehringLapin werke (latex) Kalstead Humaine MALIN (latex) e t EDWARDS Difco (latex) Cobaye FRITZ et

1972 . . . .

OI~IGINE DES PARTICULES

expdrimentde.

KREUTZ

HOPKINS et DAS TAYLOR et KELEN "PoLAK

Behringwerke (latex)

Lapin

> E.I.D.

11 %

oui

Behringwerke (latex) Pfizer (latex)

Lapin

> E.I.D.

17,7 %

oui

Cobaye

= E.I.D.

5 %

oui

Lapin

> E.I.D.

4 %

oui

Cheval

= E.I.D.

0,4 %

oui

Behringwerke (latex) (Charbon)

Le t a b l e a u I p r 6 s e n t e le d 6 t a i l d e s t e s t s e x p o s 6 s p a r les a u t e u r s favor a b l e s h u n e u t i l i s a t i o n e n r o u t i n e d u t e s t e x p 6 r i m e n t 6 ; le t a b l e a u I I r e p r e n d les m ~ m e s c a r a c t 6 r i s t i q u e s , m a i s p o u r les a u t e u r s d 6 f a v o r a b l e s .

185

DEPISTAGE DE L'ANTIGENE HBs

TABLEAUII Auteurs ddfavorables d une utilisation en routine de la technique expdrimentde.

ANNIE

ORIG1NE DES P~RTICULES

AUTEURS

BANATVALA Pfizer (latex) BESTj ALMEIDA et DANE

1971

.

11972

_

SOULIER et BENAMON AL-HUJAJ

ORIGINE DES ANTICORPS

Cobaye

1972

1972

STONES

' Pfizer (latex)

1973

1974

(latex)

SOULIER

Behringwerke (latex) (latex)

Lapin

Heechst (latex) Pfizer (latex)

Lapin

GRATTEN, ENTWISTLE, WALKER, Mc CONNELL

..

Cobaye

COSSART, FIELD, MARCH et PORTER

et GOZIN

HOPKINS

et DAS 1974

..

TAYLOR ct KELEN

1974

..

PERKINS, PERKINS

H¢echst (latex)

SPECIFICIT~ (FAUX POSITIFS)

A amdliorer

% tr~s 61evd

A am61iorer

Hyland (latex) (latex)

et SCHONTAL

1972 . . . .

SENSIBILITI~

Cobaye

% tr~s 61ev6 % trbs 61ev6 A A am61iorer lm61iorel A A am61iorer am61iorer' A am61iorer A amdliorer

A am6liorer A amdliorer E.I.D.

% tr~s 61evg 14 %

UTILISATION EN ROUTINE

non

non non non non

non

non

noI1

38,5A%

non

non

am61iorer

et VYAS

E n ce q u i c o n c e r n e la sensibilit6, en d e h o r s d ' u n e e x c e p t i o n qui la situe au n i v e a u des t e c h n i q u e s i s o t o p i q u e s (D.R.I.) [6], elle est t o u j o u r s c o m p a r 6 e p o u r les a u t e u r s f a v o r a b l e s ~t celle de I'E.I.D. ; c h a q u e lois q u ' e l l e s o n t 6t6 r e t r o u v 6 e s , les o p i n i o n s o n t 6t6 r e p l a c 4 e s p a r r a p p o r t aux t e c h n i q u e s de r d f 6 r e n c e class6es d ' a p r 6 s GOCKE [8] (TabI_ I I I ) . P o u r les a u t e u r s d 6 f a v o r a b l e s , les f a u x n6gatifs s o n t e x p l i q u 6 s d ' u n e m a n i 6 r e g6ndrale p a r u n m a n q u e de sensibilit6 de la t e c h n i q u e , les p a r t i c u l e s de latex 6 t a n t real sensibilisdes ; il est 6 g a l e m e n t signal6 l ' e x i s t e n c e p o s s i b l e d ' u n e z o n e d ' i n h i b i t i o n de l ' a g g l u t i n a t i o n p a r excbs d'antig6ne, et ce p o u r des c o n c e n t r a t i o n s faibles de p a r t i c u l e s de latex, ou p o u r des p a r t i c u l e s m a l sensibilis6es [6, 14]. M ~ m e p o u r les a u t e u r s f a v o r a b l e s , la spdcificit6 est q u e l q u e f o i s jug~e c o m m e i n s u f f i s a n t e ; les p o u r c e n t a g e s de f a u x p o s i t i f s r e t r o u v 6 s v o n t d e m o i n s de 1 % fi 17,7 %. D a n s les a u t r e s p u b l i c a t i o n s s o n t cit6es des

186

G A R R E T T A M., C O U R O U C E - P A U T Y A.M. et M U L L E R A.

TABLEAU

III

Sensibilitd du test au Latex p o u r les a u t e u r s favorables ~ son utilisation.

TECHNIQUES DE DETECTION

I ~ D'~CHANTILLONS | POSITIFS I(D'APRES GOCKE)

SENSIBILITE ABSOLUE (D'APRES GOCKE)

SENSIBILITE DU TEST AU LATEX D'APR~S LA LITTERATURE

4 .~. : IMMUNO DIFFUSION

25 (

~

•

77)

II

: : :

ELECTRO IMMUNO DIFFUSION

m

q

n

d

•

A ,

A

--

~

_

'INHIBITION DE

L'

90 (

• 94)

20 A 50

H~MAGGLUTINATION

I

187

DEPISTAGE DE L'ANTIGENE HBs

valeurs i m p r e s s i o n n a n t e s d 6 p a s s a n t p a r f o i s 50 %... De tr6s n o m b r e u s e s e x p l i c a t i o n s s o n t a v a n c 6 e s : p r 6 s e n c e d u f a c t e u r r h u m a t o ~ d e [11, 14, 16, 18] ; exc~s d ' i m m u n o g l o b u l i n e s de t y p e I g M [11, 16, 17] ; e x i s t e n c e d'h6t6r o a n t i c o r p s [12, 14] ; p r 6 s e n c e de f i b r i n e [16, 17] ; p r i s e s de m 6 d i c a m e n t s s i m u l t a n 6 e s [ 1 6 ] ; m a l a d i e s v i r a l e s c o n c o m i t a n t e s [ 1 6 ] ; e n f i n raise en cause des f a c t e u r s labiles du s 6 r u m frais [14]. Q u a n t aux m o y e n s de p r 6 v e n t i o n de ces f a u x positifs, ils s o n t 6 g a l e m e n t n o m b r e u x , r a r e m e n t efficaces et s o u v e n t p e u c o m p a t i b l e s a v e c l e u r a p p l i c a t i o n en r o u t i n e : c o n s e r v a t i o n des 6 c h a n t i l l o n s 24 h e u r e s h + 4°C [5, 13]; c h a u f f a g e 15 m i n u t e s h 37 ° [15] o u 10 m i n u t e s h 60 ° [12, 17]; i n c u b a t i o n 30 m i n u t e s avec de la t h r o m b i n e [16, 17] ; a d j o n c t i o n d ' u n e p e t i t e q u a n t i t 6 de s 6 r u m n o r m a l p r o v e n a n t de la m 6 m e esp~ce a n i m a l e q u e les i m m u n o g l o b u l i n e s s e n s i b i l i s a n t les p a r t i c u l e s de l a t e x [13, 14, 21]. Dans la p l u p a r t des cas, les 6 c h a n t i l l o n s de s a n g test6s 6 t a l e n t sous f o r m e de s6rum, le p l a s m a d o r m a n t des f a u s s e s r 6 a c t i o n s positives. N o u s n ' a v o n s pas, en fait, r e t r o u v 6 d a n s la l i t t 6 r a t u r e , de d o n n 6 e s s u f f i s a n t e s p e r m e t t a n t de j u g e r c o r r e c t e m e n t ces t e c h n i q u e s . P o u r t a n t , l o r s q u e c'6tait le cas, j a m a i s la r e p r o d u c t i b i l i t 6 des lots ne s e m b l e a v o i r dr6 test6e, et il s ' a g i s s a i t le p l u s s o u v e n t de lots e x p 6 r i m e n t a u x . I1 f a u t e n f i n p r 6 c i s e r q u e le p r o b l 6 m e de la c o n t a m i n a t i o n p o s s i b l e lors de la p r a t i q u e de c e t t e t e c h n i q u e n ' a 6t6 a b o r d 6 q u ' u n e seule lois, et q u e p o u r l ' a u t e u r le r i s q u e est s u p p r i m 6 p a r a d j o n c t i o n de ~ p r o p i o l a c t o n e h u n t a u x de 4 m g / m l [14].

II.

--

Exp6rience

r6cente

du

C.N.T.S.

N o u s a v o n s eu l ' o c c a s i o n de t e s t e r d e u x r6actifs p r 6 p a r 6 s o a r PFIZER, l'Antigex 1 et l ' A n t i g e x T G ; ce d e r n i e r est a n n o n c 6 c o m m e u n e t e c h n i q u e de ~, t r o i s i 6 m e g d n 6 r a t i o n ,, et s e m b l e p r 6 s e n t e r , en effet, u n g r a n d int6r6t.

TABLEAU IV

Caractdristiques des particules Antigex 1 et Antigex TG.

........

ANTIGEX 1 (Pfizer) ANTIGEXTG (Pfizer

Particules inertes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

Polystyr6ne

Polystyrene

Cobaye

Cobaye

% de particules rnarqu6es . . . . . . . . . . .

10%

90 %

Purification des anticorps . . . . . . . . . . . .

+

+++

Origine des anticorps

................

Sensibilit6 (d'apr6s

Pfizer)

..........

= E.I.D_

Sp6cificit6 (d'apr6s

Pfizer)

..........

1 % faux positifs

> E.ID. 1% faux positifs

188

GARRETTA

M., C O U R O U C E - P A U T Y

A.M. et M U L L E R

A.

Les c a r a c t 6 r i s t i q u e s d e f a b r i c a t i o n d e ces d e u x r 6 a c t i f s s o n t r 6 s u m d e s d a n s le t a b l e a u I V ; ils s o n t t o u s d e u x c o m p o s 6 s d e p a r t i c u l e s d e p o l y s t y rbne sensibilis6es par des immunoglobulines de cobaye anti HBs. Dans le cas d e l ' A n t i g e x 1, les a n t i c o r p s s o n t p e u p u r i f i 6 s e t il y a e n v i r o n 10 % d e s p a r t i c u l e s d e l a t e x q u i s o n t " m a r q u 6 e s ; 5 l ' o p p o s 6 , d a n s le cas d e l ' A n t i g e x TG, 90 % d e s p a r t i c u l e s s o n t s e n s i b i l i s 6 e s p a r d e s i m m u n o g l o b u l i n e s t r b s p u r i f i 6 e s . Les r 6 a c t i f s s o n t ~t c o n s e r v e r /t + 4 ° e t r e s t e n t s t a b l e s p e n d a n t p l u s i e u r s t o o l s ; l o r s d e l e u r u t i l i s a t i o n , ils s o n t a l o r s r e m e t t r e e n s u s p e n s i o n . E n t e c h n i q u e m a n u e l l e , ces r 6 a c t i f s p e r m e t t e n t des r6actions rapides, faciles ~ r6aliser sur s6rum ou sur plasma, sensibles, n e n 6 c e s s i t a n t p a s d e m a t 6 r i e l p a r t i c u l i e r si ce n ' e s t u n f o n d n o i r p o u r l a l e c t u r e ; d e p l u s , d ' a p r ~ s Pfizer, ces r 6 a c t i o n s s e r a i e n t 6 c o n o m i q u e s , m a i s n o u s n ' a v o n s p u v 6 r i f i e r ce p o i n t , les r 6 a c t i f s n ' 6 t a n t p a s e n c o r e commercialis6s en France. TECHNIQUES MANUELLES TRADITIONNELLES. Antigex

1.

Une goutte de s6rum ou de plasma/t examiner est raise en contact sur u n e l a m e d e p l a s t i q u e a v e c d e u x g o u t t e s d e d i l u a n t e t u n e g o u t t e d e latex. La lecture s'effectue apr~s 5 minutes d'agitation douce sur un fond noir et avec une lumibre indirecte de prdf6rence. Une agglutination doit signifier la p r 6 s e n c e d ' a n t i g ~ n e H B s . Le t a b l e a u V r 6 s u m e les t e s t s e f f e c t u 6 s a n t 6 r i e u r e m e n t 5 c e u x d u C.N.T.S. e t d o n t les r 6 s u l t a t s s o n t d i s p o n i b l e s a u b u r e a u ,~ B i o l o g i c s , F o o d a n d D r u g A d m i n i s t r a t i o n , U.S.A.,,. L a c o n c o r d a n c e r e t r o u v d e e n t r e l ' A n t i g e x 1 e t I'E.I.D. e s t d e 99,4 %. Le t a b l e a u V I i n d i q u e le r 6 s u l t a t d e s e x a m e n s e f f e c t u 6 s a u C.N.T.S. oO 56 6 c h a n t i l l o n s o n t 6t6 t e s t 6 s ; ils c o n s t i -

TABLEAU V A n t i g e x 1 : t e s t s m a n u e l s e f f e c t u d s a n t d r i e u r e m e n t ~ c e u x clu C.N.T.S. ( F.D.A.-U.S.A ).

NOMBRE

AGREMENT ENTRE LE TEST LATEX (Antigex 1) et L'E.I.D.

2 185

99,6 %

120

100 %

S6rum

1 272

100 %

Plasma

1 239

99,4 %

S6rum

2 483

98,8 %

7 299

99,4 %

ECHANTILLONS S6rum Sang capillaire . . . .

TOTAL

DEPISTAGE D E L ' A N T I G E N E HBs

189 T~aLEAO VI

Antigex

NOMBRE D'~CH~NTILLONS

1: T e s t s m a n u e l s

R~SULTATS D.R.I. en U/ml

effectuds au C.N.T.S_

R~SULTATS E.I.D.

R~SULTATS ANTIGEX 1

(+) + + + ++

5 6 8

7

+

8

+ + +

+ (+)

+ + +

+ + ++

1/1 1/1

+5++ ++ + + /a + + + +

8 9 9

10 i0 8

10 > 10 > 10 15 ~ 20 30 h 40

50 h 70 100 200 400 > 400

(+ ) + ++ +++

R6action R6action R6action R6action

I/1 1/2 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/64

+++'en + + + en

3 minutes 3 minutes

+ + + en 2 minutes + + + en 1 minute + + + en 30 secondes + + + en 30 secondes + + + en 10 secondes

douteuse. faible. positive. forte.

t u e n t u n p a n e l d e t i t r e s v a r i 6 s a l l a n t d e 5 u / m l (i) p a r D.R.I. (et n 6 g a t i f e n E.I.D.) h 1/256 e n E.I.D. T o u s l e s 6 c h a n t i l l o n s o n t 6t6 r e t r o u v 6 s p o s i t i f s , avec d e s i n t e n s i t 6 s v a r i a b l e s . U n e r 6 a c t i o n d o u t e u s e a 6t6 o b s e r v 6 e a v e c d e u x 6 c h a n t i l l o n s : le p r e m i e r e s t n 6 g a t i f e n E.I.D. e t t i t r e 5 u / m 1 e n D.R.I. ; le s e c o n d e s t f a i b l e m e n t p o s i t i f e n E.I.D. e t t i t r e 9 u / m l e n D.R.I. U n e r 6 a c t i o n f a i b l e a 6t6 r e t r o u v 6 e a v e c 8 6 c h a n t i l l o n s : d e u x n 6 g a t i f s e n E.I.D. e t t i t r a n t 6 e t 9 u / m l , 5 f a i b l e m e n t p o s i t i f s e n E.I.D. et t i t r a n t e n t r e

(1) Une unit6 C_N.T.S. c o r r e s p o n d h la plus petite quantit6 d'antig6ne HBs ddtectable p a r les techniques isotopiques.

190

GARRETTA

M., C O U R O U C E - P A U T Y A.M. et M U L L E R

A.

7 et 10 u / m l , le d e r n i e r 6 t a n t p o s i t i f au 1/2 en E.I.D. Les 46 a u t r e s dchantillons, t o u s p o s i t i f s en E.I.D., 6 t a i e n t f o r t e m e n t o u tr6s f o r t e m e n t p o s i t i f s a v e c le l a t e x ; d a n s l e u r cas, l ' a g g l u t i n a t i o n est a p p a r u e plus r a p i d e m e n t , c e t t e v i t e s s e 6 t a n t en r a p p o r t a v e c le t i t r e de l ' a n t i g 6 n e HBs. La l i m i t e de sensibilit6 de c e t t e t e c h n i q u e a 6t6 6tudi6e 6 g a l e m e n t en d i l u a n t t r o i s 6 c h a n t i l t o n s p o s i t i f s ( T a b l . V I I ) ; o n la r e t r o u v e e f f e c t i v e m e n t e n t r e 5 et 6 u / m l , ce qui est c o n s i d d r 6 c l a s s i q u e m e n t c o m m e u n e b o n n e sensibilit6 p o u r le d 6 p i s t a g e chez les d o n n e u r s de sang. H u i t sous-types de l ' a n t i g e n e H B s o n t 6t6 6tudi6s, et a u c u n e d i f f d r e n c e de r d a c t i v i t 6 n ' a 6t6 r e t r o u v d e .

TABLEAUVII A n t i g e x 1 : l i m i t e de s e n s i b i l i t d en t e c h n i q u e m a n u e l l e .

ECHANTILLON

RI~SULTATS D R.I. EN U/ML

R~SULTATS E.I.D.

RI~SULTATS ANTIGEX 1

+

+

REN...

( > 1/128 en E.I.D.) 1/100 1/200 1/400 1/800 VE~... (N6g. en E.I.D.) (6 U / m l en D.R.I.) 1/L5 1/3 1/6 1/12

5 2 1,5 0,6

B~c... (N6g. en E.I.D.) (5 U / m l en D.R.I.) 1/2 1/4 1/8

2,5 1,1 0,6

(+)

( + ) R6action douteuse. + R6action faible.

La sp6cificitd n ' a p u & r e q u e p e u explorde. S u r 42 s 6 r u m s o u p l a s m a s n6gatifs en D.R.I., d e u x o n t 6t6 r e t r o u v d s f a u s s e m e n t positifs. C e t t e 6 t u d e a p o r t e s u r d e u x lots diff6rents.

191

DEPISTAGE DE L'ANT1GENE HBs A n t i g e x TG.

Les p r o p o r t i o n s u t i l i s d e s s o n t M g S r e m e n t d i f f d r e n t e s : d e u x g o u t t e s de p l a s m a o u d e s 6 r u m , u n e g o u t t e d e d i l u a n t e t u n e g o u t t e d e latex. U n p a n e l d e 46 6 c h a n t i l l o n s a 6t6 t e s t 6 e t t o u s l e s 6 c h a n t i l l o n s p o s i t i f s o n t 6t6 r e t r o u v 6 s : f o r t e a g g l u t i n a t i o n p o u r les a n t i g ~ n e s t i t r a n t 10 u / m l e t plus, a p p a r a i s s a n t e n q u e l q u e s s e c o n d e s ; n e t t e a g g l u t i n a t i o n p o u r les a n t i g ~ n e s d e t i t r e < 10 u / m l , a p p a r a i s s a n t e n t r e u n e m i n u t e et u n e m i n u t e 30 sec. L a l i m i t e d e s e n s i b i l i t 6 s e m b l e se s i t u e r g 3 u / m l , s o i t d e u x l o i s p l u s q u e celle d e l ' A n t i g e x 1 (TabI. V I I I ) .

TABLEAU V I I I Antigex TG : tests manuels effectuds au C.N_T.S.

NOMBRE D'I~,CHANTILLONS

RI~SULTATS D . R . I . EN U/ML

R~SULTATS E . I . D .

1 (Dilution)

-~3

'.2-

4

597

3

7

RI~SULTATS ANTIGEX TG

. + + en

2 minutes

+ + en

1 m i n u t e 30"

(+)

++

1 minute

+++

7

8~t10

1/1

10

> 10

1/2 h 1/128

en

en 30 secondes

+ + en 10 secondes

Les 6 c h a n t i l l o n s n d g a t i f s p r 6 s e n t e n t u n e t r 6 s f a i b l e a g g l u t i n a t i o n a v e c ce r d a c t i f , q u ' i l s s o i e n t s o u s f o r m e d e s 6 r u m o u d e p l a s m a ; ce p o i n t n e p a r a i t p a s i m p o r t a n t , c o m p t e t e n u d e l a g r o s s e u r d e s a g g l u t i n a t s spdcifiq u e s b i e n s u p 6 r i e u r e • celle o b s e r v d e a v e c l ' a n t i g e x 1. L a s p 6 c i f i c i t 6 p a r a l t b o n n e , a u c u n f a u x p o s i t i f n ' a y a n t 6t6 r e t r o u v 6 s u r les q u e l q u e s 6 c h a n t i l lons 6tudi6s. TECHNIQUES AUTOMATISI~ES SUR LES I~QUIPEMENTS GROUPAMATIC. L a c o n f i g u r a t i o n e t l ' u t i l i s a t i o n d e ces a p p a r e i l s o n t d6j/t 6t6 d 6 c r i t s e t n o u s n ' y r e v i e n d r o n s p a s [7]. Les s e u l e s m o d i f i c a t i o n s a p p o r t 6 e s c o n c e r n e n t , p o u r u n c a n a l , la b u s e d e d i s t r i b u t i o n d e s r 6 a c t i f s - 6 c h a n t i l l o n s : la d o u b l e b u s e t r a d i t i o n n e l l e a 6t6 r e m p l a c 6 e p a r u n e t r i p l e b u s e . A celle-ci s o n t a d a p t 6 e s t r o i s t u b u l u r e s , d e u x d 6 l i v r a n t 50 Ixl e t u n e d 6 1 i v r a n t I00 t~l. A n t i g e x 1.

Les m e i l l e u r e s p r o p o r t i o n s d e r 6 a c t i f s e t d ' 6 c h a n t i l l o n c o m p a t i b l e s a v e c l ' u t i l i s a t i o n d e s ces 6 q u i p e m e n t s s o n t 50 txl de p l a s m a , 50 vtl d ' e a u p h y s i o l o g i q u e ( a m e n 6 e p a r l a m 6 m e t u b u l u r e q u e le p l a s m a ) , 40 ~t 50 lB

192

G A R R E T T A M., COUROUCE-PAUTY A.M. et MULLER A.

de latex et 50 g 60 txl de diluant. P o u r o b t e n i r ces proportions, des modifications de la l o n g u e u r des t u b u l u r e s cQrrespondantes ont 4t6 effectu6es. Aprhs leur p r d p a r a ti o n a u t o m a t i q u e , les r6actions a p p a r a i s s e n t tr~s lisibles h l'oeil, s u r t o u t si la lecture dans le godet est favorisde p ar un dclairage indirect et un fond noir (Tabl_ I X ) ; la sensibilit6 de cette technique a p p a r a i t i d e n t iq u e h celle des tests effectu6s m a n u e l l e m e n t . Par TABLEAUI X Antigex 1: tests automatisds effectuds sur Groupamatic

ECHANTILLON

Rt~SULTATS D.R.I.

RI~SULTATS GROUPAMATIC

(en U/ml)

R£SULTATSE.I.D. 1/128

+ +

1/1

+ +

GOA-..

> 10

DEH...

10

BEG...

5

(Lecture visuelle)

(+)

Ndgatif

contre, il est p r a t i q u e m e n t impossible de r e c o l l e c t e r les particules agglutin4es, et l'aspect des agglutinations varie darts le t e m p s g l'int4rieur des godets. La lecture a u t o m a t i q u e des r6actions est tr6s difficile, c o m p t e tenu, en plus, de la diffdrence tr6s faible de t r a n s m i s s i o n o p t i q u e entre les n6gatifs et les trhs f a i b l e m e n t positifs. Prdcisons enfin que nous n'avons pas pu tester la sp6cificit6. A n t i g e x TG.

Les p r o p o r t i o n s utilisdes sont les suivantes : 80 ~I de plasma, 20 txl d'eau physiologique, 50 ~1 de latex et 50 ~xl de diluant. Nous avons d 'au t r e p a r t modifi4 le p H du diluant, ramen6 5 p H 6 , ce qui a u g m e n t e tr6s n e t t e m e n t la grosseur des agglutinats. Apr~s la raise en f o r m e a u t o m a t i q u e des r6actions, celles-ci apparaissent trhs n e t t e m e n t visibles (Tabl. X) ; on constate, p ar une l ect u r e visuelle, que le latex Antigex 1 avec un antigone > l0 u / m l r e s s e m b l e au latex TG avec un antig6ne de 5 u / m l . I1 est d ' a u t r e p a r t possible d ' o b t e n i r avec ce r6actif une r e d i s t r i b u t i o n pdriph6rique des agglutinats p e r m e t t a n t une b o n n e lecture a u t o m a t i q u e ; les r6actions positives faibles sont bien lues et il ne semble pas y avoir de s u p e r p o s it io n en t r e les densit6s optiques des rdactions positives (faibles ou fortes) et des rdactions n6gatives. Les rdsultats sont i m p r i m d s a u t o m a t i q u e m e n t sous f o r m e de chiffres de 0 g 9 qui sont fonction de l'absence ou de la pr6sence d'agglutinats. Le tabI. X I c o m p a r e les r6sultats visuels et a u t o m a t i q u e s de 35 tests p a r rappor+ au D.R.I. ; les 13 4chantillons n6gatifs en D.R.I. sont n4gatifs

DEPISTAGE DE L'ANT1GENE HBs

193

TABLEAU X

Comparaison des rdsuttats Groupamatic entre l'Antigex I e t

RESULTATS ECHANTI LLON'R~SULTATS R~SULTATS EID DRI

ANTIGEX]

l'Antigex TG.

SROUPAMATIC ANTIGEX TG

'0'

N~GATIF

NEGATIF

5UJML + 0 i0 U/ML

71-

>~o o/~ +

+

0

+

i'.'

0

.;t

"

194

G A R R E T T A M., COUROUCE-PAUTY A.M. et MULLER A. TABLEAU X I Antigex TG : tests automatisds effectud~ s u r Groupamatic. Comparaison de la lecture visuelle et de la lecture automatique.

ECHANTILLONS

R~SULTATS D.R.I. en U/m1

N°

Type

1

EDTA

2 3

EDTA ACD

> 10 4

4

ACD

5

ACD

6

EDTA

7

Sdru.m

RI~SULTATS GROUPAMATIC Lecture visuelle lecture automatique

--

0

++ ++

9 9

> 10

++

9

> I0

+++

9

5

++

9

--

0

8

EDTA

10

++

9

9 10

EDTA ACD

5 > 10

++

9

11

ACD EDTA ACD

14

ACD

15

EDTA

16

EDTA

17

EDTA EDTA

12 13

18 19

++

9

--

0

10 > 10

++ ++

9 9

> 10

++

9

8

++

9

6

++

9

--

0

+++

9

--

0

7

++

9

> 10

++

9

10

ACD

20

EDTA

21

ACD

22

S6rum

23

ACD

24 25

EDTA

--

0

> 10

++

9

--

0

> 10

+++

9

EDTA

(+)

3

--

2

30

ACD ACD EDTA S6rum

++

9

31

EDTA

--

0

32

EDTA EDTA EDTA EDTA

--

2

26 27 28 29

33 34 35

ACD

> 10

+++

0

9 > 10

+++

9

--

0

--

3

--

3

195

DEP1STAGE DE L ' A N T I G E N E HBs

ou ( + ) h l'0eil et la lecture a u t o m a t i q u e p e r m e t d ' i m p r i m e r des valeurs allant de 0 h 3, valeurs situ6es sous le seuil de positivit6 (seuil h 5); tous les 6chantillons positifs en D.R.I., 4 unit6s (1), 5 unit6s (2), 6 unit6s (1), 7 unit6s (1), 8 unit6s (1), 9 unit6s (1) et >/ 10 unit6s (14) sont lus + + visuellement et sont 6dit6s 9, c'est-h-dire f r a n c h e m e n t positifs. La sensibilit6 et la sp6cificit6 a u t o m a t i q u e s sont doric superposables h celles constat6es m a n u e l l e m e n t ; de plus, il ne semble pas se poser de probl6mes concernant les lagers agglutinats retrouv6s m a n u e l l e m e n t pour les 6chantillons n6gatifs car ceux-ci sont d6truits p a r la centrifugation.

Conclusion. Depuis 1971, de n o m b r e u s e s particules inertes ont 6t6 test6es et pr6sent6es sans qu'auct~ne ne soit r6ellement utilis6e en routine. I1 semble que l'Antigex TG de Pfizer puisse ~tre la solution et p e r m e t t e ce d6pistage rapide, simple, facile h m e t t r e en ceuvre, tr6s souple, p r o b a b l e m e n t 6conomique et s u r t o u t ne n6cessitant a u c u n 6 q u i p e m e n t sp6cial. Dans des conditions diff6rentes l'utilisation de ce r6actif sur les 6quipements automatis6s semble 6galement tr6s s a t i s f a i s a n t e : la sensibilit6 est identique a celle observ6e m a n u e l l e m e n t , la lecture a u t o m a t i q u e est possible. Diff6rents lots sont actuellement test6s ou le seront afin de j u g e r de la reproductibilit6 et de la stabilit6 de la qualit6 du r6actif; ces derniers points sont essentiels et ce n'est que lorsqu'ils a u r o n t 6t6 constat6s q u e l'utilisation de ce test e n r o u t i n e p o u r r a ~tre recommand6e, que ce soit m a n u e l l e m e n t ou de m a n i 6 r e automatis6e. RESUME Depuis 1971, de n o m b r e u s e s particules inertes ont 6t6 exp6riment6es et pr6sent6es p o u r le d6pistage de l'antigbne HBs sans q u ' a u c u n e ne soit r6eIlement utilis6e en routine. Un b i l a n en est r6alis6 et pr6sent6, soulignant les caract6ristiques c o m m u n e s et i n d i q u a n t les diff6rents probl6mes pratiques rencontr6s. Nous r a p p o r t o n s le travail effectu6 sur deux types de latex, exp6rience double se r a p p o r t a n t , d ' u n e part, h la p r a t i q u e m a n u e l l e de ces tests et, d'autre part, /~ l'application ~t l ' a u t o m a t i s a t i o n de ceux-ci sur des 6quipements Groupamatic. Pour Fun d ' e n t r e eux, l'Antigex TG, la sensibilit6 et la sp6cificit6 sont tr6s satisfaisantes et diff6rents lots sont actuellement 6tudi6s afin de juger de la reproductibilit6 et de la stabilit6 de la qualit6 du r6actif. SUMMARY Since 1971, several i n e r t particles have been tested a n d proposed for HBs antigen screening, none of t h e m being really used in routine. An evaluation is realized a n d presented, p o i n t i n g out the m a i n characteristics and the practical problems,

196

GARRETTA M., COUROUCE-PAUTY A.M. et MULLER A.

We report our experience on two types of latex, simultaneously conducted t h r o u g h m a n u a l techniques a n d . t h r o u g h G r o u p a m a t i c 360 equipments. For one of them, TG Antigex, sensitivity and specificity are very satisfying a n d several batches are presently tested in order to quantify the reproducibility a n d stability features of the reagent. Docteur M. GARRETTA, Centre National de T r a n s f u s i o n Sanguine, Avenue du Canada - 91403 ORSAY-COURTABEUF

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DEPISTAGE DE L'ANTIGENE HBs

197

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