831

原

著

Polymerase

chain

reaction法

沈 渣 か ら のChlamydia

を用 いた初 尿

tnzchomatisの

検 出

1)岐阜大 学 医 学 部泌 尿 器 科学 教 室 ,2)同 微 生 物 学教 室 3)トヨタ記 念 病 院泌 尿 器 科 ,4)東 京 共 済 病 院泌 尿 器 科 米 田

尚 生1)出

口

隆1)山

伊 藤

康 久1)斉

藤

昭 弘1)坂

前 田

真 一3)斎

藤

功4)江

Key

words:

崎

trachomatisに

初 尿 を 用 い て,そ

英 樹1)

義 人1)玉

木

正 義3)

孝 行2)河

田

幸 道1)

受 付) 受 理)

chain

urethritis,

reaction,

Chlamydia

first-voided

urine

旨

で 病 原 体 の 検 出 を 試 み た.尿

使 用 し た. C. trachomatis血

の 一 部 の 塩 基 配 列 に 相 補 的 な2つ

のoligonucleotideを

の 認 め ら れ た もの を 陽 性 と し た.尿 との 比 較 で は, Chlamydiazyme陽

清 型L2のmajor

Kで

Kで 処 理 後,さ

outer membrane

伸 長 用primerと

らに フ ェ

protein gene

よ るC.

trachomatisの

幅 検 出結果

性 で あ った. Chlamydiazyme陰

47例 中38例 はPCR陰

性 で あ り,全 体 で の 一 致 率 は90.7%(88/97)で

初 尿 沈 渣 か ら のC.

trachomatisの

処理

して 用 い,242bpのDNA増

道 擦 過 物 か らのChlamydiazymeに 性 の50例 は 尿 で も全 てPCR陽

襲のない

お よ び 尿 沈 渣 をproteinase

抑 制 す る こ とか ら,尿 道 炎 患 者 の 初 尿 沈 渣 をproteinase

ノ ー ル 抽 出 を 行 い, PCRに

azymeに

trachomatis,

sediments

よ る 男 子 尿 道 炎 患 者 の 診 断 に 侵 襲 的 な 尿 道 擦 過 法 を 使 用 せ ず,侵

の 沈 渣 か らPCR法

した だ け で はPCRを

田

(平 成4年4月10日

要 Chlamydia

啓 之2)岩

(平 成4年2月27日

polymerase male

本

あ った.以

上 か ら, PCR法

性の に よる

検 出 は 可 能 で あ り,そ の 検 出 結 果 は 尿 道 擦 過 物 か ら のChlamydi-

よ る検 出結 果 と良 く一 致 した. PCR法

に よ る初 尿 沈 渣 か ら のC.

trachomatisの

検 出 は非 侵襲

的 で あ り,臨 床 上 有 用 で あ る と思 わ れ た.

序 Chlamydia

trachomatisを

文

を 応 用 し て,男

は男 子 の 非 淋 菌 性 尿 道

検 出 す る 方 法 を 報 告 し て き た3)∼5).我 々 の 開 発 し

炎 の 約 半 数 を 占 め る 病 原 体 で あ る が1),偏

性細 胞

たPCR法

子 尿 道 粘 膜 か らC.

はC.

trachomatisに

trachomatisを

対 して 特 異 性 が 高

寄 生 性 で あ り,生 き た 細 胞 内 で の み 増 殖 す る た め,

く,か つ 高 感 度 で あ る こ と か ら, C. trachomatis菌

そ の 検 出 は こ れ ま で 尿 道 粘 膜 を 擦 過 し,剥

量 の 少 な い と考 え ら れ る 尿 道 炎 患 者 の 初 尿 か ら も

を 材 料 と し,細 胞 培 養 法,あ

る い はC.

離上 皮

trachomatis

C.

trachomatisの

抗 原 の 免 疫 学 的 な 検 出 法 に よ り検 出 さ れ て き た.

で,男

し か し尿 道 擦 過 物 の 採 取 は 患 者 に 苦 痛 を 与 え る た

chomatisの

め,よ

Chlamydiazymeに

り非 侵 襲 的 な 検 出 方 法 が 望 ま れ て き た.

我 々 はpolymerase 別刷 請 求 先:(〒500)岐

chain

reaction

検 出 を 試 み,尿

よ る検 出 結 果 と の 比 較 を 行 っ

材 料 と方 法 米田

尚生

1. PCR法

こ tra-

道 擦 過 物 を 用 い た

た.

阜 市 司 町40

岐 阜 大 学 医学 部 泌 尿器 科 平 成4年7月20日

(PCR)法2)

検 出 が 可 能 と考 え ら れ た.そ

子 尿 道 炎 患 者 の 初 尿 か らPCRでC.

に よ るC.

trachomatisの

検 出

米田

832

前 回 の 報 告3)∼5)と同 様 にC. L2のmajor

outer

trachomatis血

membrane

protein

清型

尚生 他 で5コ

以 上 認 め ら れ た 男 子 尿 道 炎 患 者97例

を対象

と し た.尿 道 擦 過 物 は 綿 棒 に て 採 取 し,Chlamydi-

(MOMP)

遺 伝 子 の 塩 基 配 列6)に 相 補 的 なoligonucleotide

azymeに

をprimer3)7)と

し て 用 い た.PCRの

尿 道 擦 過 物 採 取 後 の 初 尿10mlを2,500rpmで15

95℃,20秒,ア

ニ ー リ ン グ55℃,20秒,伸

30秒 と し,温

度 サ イ ク ル を40回

た.PCR後,2%ア

条 件 は変 性 長72℃,

分 間 遠 心 し,沈

自 動 的 に 繰 り返 し

ガ ロ ー ス ゲ'ルに て 電 気 泳 動 を

行 いethidium

bromide染

Chlamydia

DNAと

し て,尿 沈 渣 に よ るPCRの

た.健

常 男 子 と女 子 の 急 性 膀 胱 炎(尿

卅/HPF,

Staplzylococcus

ml)患

渣 と 尿1mlと

中 白血 球 数

saprophyticus

者 の 尿10m1を2,500rpmで15分

尿 沈 渣 と尿1mlを

107cfu/ 間 遠 心 し,

残 し,上 清 の 尿 を 除 去 し た.尿 沈

を 撹 搾 後,そ

の140μ1に5%NP.40,

5%Tween-20,1mg/mlproteinaseKを μ1加 え,55℃,60分 proteinaseKを 尿 沈 渣 をC.

各 々20

間 処 理 し,95℃,10分 不 活 化 し た.こ

trachomatis

コ 相 当 のDNAの

104コ,

の を 対 照 と し てPCRを

間 にて

れ ら除 蛋 白 され た 103コ,

入 っ たPCR反

2μl, 5μl, 10μlず つ 加 え た.尿

102コ,

101

応液 にそれ ぞれ 沈 渣 を加 え な い も

mlを

の検 討

chloroform:

(25:24:1)200μlを

加 え, 撹 搾 後,遠

DNA断

1)200μlを

心 分 離 後,DNAを

絆,遠

(24: 抽

れ を エ タ ノ ー ル で 沈 澱 さ せ た 後,40μ1

の 蒸 留 水 に 溶 か し た.そ

の う ち5μl,

(10倍 希 釈 液 の2μl使 用)をtemplateと を 行 い,Ctrachomatisの

1μlと0.2μl し てPCR

片が 認 性 と し た. 制

物 質 の 存 在 を 考 慮 し,templateDNAを0.2μl(検 出 用DNA溶

液 の10倍

0.04μl(100倍

希 釈 液 の4μlを 使 用)を 用 い て,PCR

を 行 い,DNA増 6.尿

希 釈 液 の2μlを

使 用)と

幅 の 有 無 を 確 認 し た.

道 擦 過 物 か ら のChlamydiazymeに

C. trachomatisの

検 出

Chlamydiazymeに は,キ

よ る

よ るC.

trachomatisの

検 出

ッ ト添 付 の 操 作 方 法 に 従 っ て 行 い,陰

ン ト ロ ー ル の 吸 光 度 の 平 均 値 に0.1を と し,こ

性 コ・

加 えた値 を

れ 以 上 の 吸光 度 を 示 した検 体 を 性 と し,未

満 の も の を 陰 性 と判

検 出 を 試 み た.

設 を 受 診 し,尿

1.尿 C.

沈 渣 に よ るPCRの trachomatisの104コ,

績 抑制 103コ,

相 当 す るDNAをtemplateと

に よ るDNA増

幅 で は,102コ/assay(Fig.1;A3)

以 上 でDNA

molecular

近 にDNAの

増 幅 が み ら れ,前

こ のbandが

目 的 と す る242bpのDNA断

定 し た4).し

道炎の臨床 の検鏡

101コ/

し たPCR

size markerの249bp付 回 報 告 した よ うに 片 と判

か し健 常 尿 沈 渣 をproteinaseKで

理 し た 後,直 接PCR反

処

応 液 に 加 え た 場 合,2μl(B)

が 薄 く な り抑 制 が み ら れ た(Fig.

症 状 と尿 道 ス メ ア の 多 核 白 血 球 が1,000倍

102コ,

で は 抑 制 を 受 け な か っ た が,10μl(D)で

道 炎 患 者 お よ び検 出 材 料

岐 阜 大 学 関 連 の3施

幅

片 の 認 め ら れ な い 検 体 に つ い て は,抑

assayに

心 分 離 し,

isoamylalcohol

4.尿

気 泳 動 に て242bpのDNA断

め ら れ た 検 体 をCtrachomatis陽

成

isoamylalcohol

さ ら に 上 清 にchloroform: 加 え,撹

の1μlをtemよ るDNA増

定 し た.

前 述 の 尿 沈 渣 と 同 様 の 方 法 に て 除 蛋 白 し,そ

出 し た.こ

液 と し た.そ

よ り 尿 道 擦 過 物 のCtra-

陽 性 と 診 断 さ れ た 患 者 の 保 存 初 尿10

の100μlにphenol:

を 行 っ た.電

よ び

終 的 に40μlの 蒸 留 水 に 懸

し て 用 い,PCRに

Ctmchomatis陽

3.TemplateDNA量 Chlamydiazymeに

検 出

出 用DNA溶

cutoff値

行 な い,尿 沈 渣 のPCRに

対 す る 影 響 を 検 討 し た.

chomatisが

tmchomatisの

出 とPCR

保 存 尿 を 前 述 のproteinaseKお

plateDNAと

抑 制 を検 討 し

残 し て 一70℃

道 炎 患 者 の 初 尿 か ら のDNA抽

濁1し,検

E/UW-5/CX104コ,103

101コ に 相 当 す るDNAをtemplate

検 出 材 料 と し た.

渣 と と も に 尿1mlを

フ ェ ノ ー ル で 処 理 後,最

抑 制 の検 討

trachomatis

コ, 102コ,

5.尿

1mlの

沈 渣 に よ るPCRの

trachomatisの

に 冷 凍 保 存 し た.

に よ るC.

色 に て242bpのDNA

の 増 幅 を 観 察 し た. 2.尿

よ るC.

はband

1).膀

胱炎 患者

の 抽 出 液 も フ ェ ノ ー ル 抽 出 せ ず にPCR反

応液 に

加 え た 場 合,5μl(Fig.

薄 くな

2; C)で 感 染 症 学雑 誌

はbandが 第66巻

第7号

PCRに

よ る 初 尿 か ら の ク ラ ミジ ア の 検 出

Fig. 1 Interference of DNA solution extracted from urine and urinary sediments of a normal male with DNA amplification by PCR . M, DNA molecular size marker ( 174/HinfI digest); A,, C. trachomatis 104cfu/assay without urine sample; A2, 103cfu/assay without urine sample; A3, 102cfu/assay without urine sample; A3, 101 cfu/assay without urine sample; B,, 104cfu/ assay with 2ul of urine sample; B2, 103cfu/ assay with 4l of urine sample; B3, 102cfu/ assay with 2uI of urine sample; B4, 10'cfu/ assay with 2ul of urine sample; C1, 104cfu/assay with 5u1 of urine sample; C2, 103cfu/assay with 5ul of urine sample; C3, 102cfu/assay with 5,ul of urine sample; C4, 101cfu/assay with 5ul of urine sample; D,, 104cfu/assay with 10ul of urine sample; D2, 103cfu/assay with 10,ul of urine sample; D3, 103cfu/assay with 10ul of urine sample ; D3, 10'cfu/assay with 10ul of urine sample.

り,10μlで bandが

は103コ/assay(Fig.

2; D2)以

認 め ら れ ず,完 全 にDNAの

れ た(Fig.

2).従

っ て,臨

増 幅 が 抑制 さ

床 材 料 か らの検 討 で は

フ ェ ノ ー ル 抽 出 を さ ら に 加 え,DNAを 出 用DNAと

純 化 し検

of

urine

and

with

acute

cystitis

PCR.

M,

Hinfl

DNA

urine

B1,

A4,

104cfu/assay with

cfu/assay

with

assay with 5u1 of

with 5ul of

2ul of

urine

urine

2ul

2ul

of

2ul

of

of

urine

urine

of urine

urine

C4,

sample;

sample;

B2,

sample;

; C2,

C3,

urine

urine

urine

sample

sample;

without

without

B3,

sample;

sample;

sample;

104cfu/assay

without

with

lO3cfu/assay

by (‚ƒ174/

103cfu/assay

102cfu/assay

10'cfu/assay

female

marker

trachomatis A2,

a

amplification

size

C.

A3,

extracted of

DNA

sample;

sample;

sample;

with

A1,

urine

solution

sediments

molecular

digest);

without

DNA

urinary

B4,

C1, 104cfu/assay 103cfu/assay

103cfu/assay

101cfu/assay

10'

10'cfu/

with with

with

5ul

5ul

of

urine

sample;

D,,

104cfu/assay

with

10,ul

of

urine

sample;

D2,

103cfu/assay

with

10ul

of

urine

sample;

D3,

102cfu/assay

with

10ul

of

urine

sample;

D,,

10'cfu/assay

with

10ul

of

urine

sample.

Fig. 3 Influence of the amount of template DNA extracted from first-voided urine sediments on DNA amplification by PCR. M, DNA molecular size marker (t 174/Hinfl digest); Al and Bl, 5 ul of DNA solution; A2 and B2, lul of DNA solution; A3 and B3, 0.2ul of DNA solution.

の 検 討 と尿 道 炎 患 者 の 初 尿 か らの検 出 性 の尿道 炎患

者 の 初 尿 か ら 抽 出 し たDNA溶

液1μlを

用 いた 場

合 で は 陽 性 率 が 最 も 高 い 結 果 が 得 ら れ た.し

B、)を

Interference

よ る 検 出 の た め の 最 適template

尿 道 擦 過 物 のChlamydiazyme陽

Fig.3に

2

from

す る こ と と し た.

2.PCRに DNA量

下で は

Fig.

833

示 す よ う にDNA溶

液5μl(Fig.

用 い た 場 合 は242bpのDNA増

れ,1μl(A,,

B,)で

幅が抑制 さ

は 増 幅 は 認 め ら れ た が,抑

を 受 け て お り,0.2μl(A3,

B3)で

を 行 い,DNA増 平 成4年7月20日

制

は よ り増 幅 が 鮮

明 と な る よ う な 検 体 が 認 め ら れ た.従 か ら 抽 出 し たDNA溶

か し

3; A1,

液 を ま ず1μl用

っ て,初

尿

い てPCR

幅 を 認 め な い 例 に つ い て は0-2μl

(検 出 用DNA溶 0.04μl(100倍 242bpのbandを

液 の10倍

希 釈 液 の2μl使

希 釈 の4μl)を

用 い てPCRを

認 め た 検 体 を 陽 性,認

用)と 行 い,

め な い検

米田

834

Fig. 4

Agarose

gel electrophoresis

ucts amplified M, molecular

size marker

P1 positive clinical

control

samples;

urine

C.

negative

control

Detection

of C. trachomatis

urine sediments

ral swab

digest);

trachomatis;

1

voided

sediments.

(0 174/HinfI

with

Table

of PCR prod-

from first-voided

尚生 他 from

first-

by PCR and from ureth-

by chlamydiazyme

1-12,

with distilled

water.

前 回 報 告 し た よ う に,PCRに chomatisの

よ るC.tra-

検 出 感 度 は1×102コ/assayと,

Chlamydiazymeの26倍

の 高 感 度 で あ り3),菌 量 の

少 な い と 考 え ら れ る 尿 か ら もPCRに 体 を 陰 性 と判 定 し た.Fig.

4は 検 出 用DNA溶

1μlを 用 い た 検 出 例 を 示 す が1, 8,

9,

4,

10, 12で ば242bpにbandの

こ れ ら はC.

trachomatis陽

chomtis陽

液 の0.2μl,

性 と 判 定 し た59例

う ち1μlを 用 い て48例,0.2μlで

0-04μ1で

は2例

3.尿

が 陽 性 で あ っ た.陰

よ るC.

で 初 尿 か ら のPCRは 100%で

あ っ た.Chlamydiazyme陰

PCR陽

性 は9例

率 は80.9%で

で,陰

は9例,

97(90.7%)で

して 用

検 出 結 果 の比 較 性50例

性 一致 率 は 性47例

1).

男 子 の 尿

患 老 に と っ て は 大 き な 苦 痛 と な る.こ

道炎

のた め 治 療

目以 降 の 検 体 採

取 に 難 渋 す る こ と が 臨 床 上 多 々 あ る.そ

こで 検 体

者 に 苦 痛 を与 え な い 尿 を材 料 とした

trachomatisの

液 のPCRへ

検 出 法 の 確 立 が 望 ま れ て い る.

Kで

液10μlをPCR反

た.ま

で はDNA増

血球数

下 に相 当

幅 が完 全 に抑 制 され

た 正 常 尿 で もDNA増

と か ら,尿

幅が抑制 を受 け る こ

中 に含 ま れ る塩 類 や 尿 中 に混 在 す る 白

上 皮 細 胞,細 菌 由 来 の タ ン パ ク 質 やDNA

な ど がPCRの

反 応 を 抑 制 す る と考 え ら れ た.そ

こ で フ ェ ノ ー ル 抽 出 に てDNA以 し てDNAを

純 化 し,さ

外 の成分 を除去

ら にtemplateDNAを

釈 す る こ と に よ り効 率 的 なPCRの 試 み た.そ DNA溶

沈 渣か

応 液 に加

え る と,Ctmckomatisの103コ/assay以 す るDNA量

処理

の影響 につ いて検 討 し

胱 炎 患 者 の 尿 を 用 い た 検 討 で は,尿

の 結 果,フ

液1μlを

討 し て み る と,検 例,0.2μlを 2例 でDNAの

希

条 件 の検 索 を

ェ ノ_ル

用 い てPCRを

る こ と と し た.PCRで

道 に綿 棒 を 挿 入 し尿 道 上

効 果 の 判 定 や 再 発 判 定 な ど,2度

こ と か ら,ま ず 尿 と 尿 沈 渣 をproteinase

抽 出 した 検 出用 行 い,陰

い て は 希 釈 し,0.2μlと0.04μl相

皮 細 胞 を 擦 過 剥 離 し採 取 す る 必 要 が あ り,尿

C.

中,尿

察

細 胞 内 で 増 殖 す るC.trachomatisを 道 か ら検 出 す る に は,尿

すべ て

体 で の 一 致 率 は88/

あ っ た(Table 考

採 取 の 際,患

は1

性 は38例 で あ り,陰 性 一 致

あ っ た.全

モ グ ロビ

ら 抽 出 さ れ たDNA溶

初 尿 沈 渣

陽 性 で あ り,陽

抑 制 す る 因 子 と し て 尿8),ヘ

2価 の イ オ ン10)な ど が 報 告 さ れ て い る

てC.

増 幅 は 認 め ら れ な か っ た.

尿 道 擦 過 物 のChlamydiazyme陽

ら,PCRを ン9), 1価,

し たDNA溶

い ず れ をtemplateと

trachomatisの

か しなが

た.膀

tra-

よ るC.tra-

検 出 が 可 能 と 考 え ら れ た.し

0.04μlを

性 例38例

道 擦 過 物 のChlamydiazymeと

のPCRに

3,

中 検 出 用DNA溶

液40μlの

い た 場 合 で もDNAの

7,

増 幅 が み ら れ,

再 検 を 行 っ た.PCRに

μl, 0.2μl, 0.04μlの

6,

性 と 判 定 し た.2,

11は さ ら に 抽 出 用DNA溶 用 い て,PCRの

5,

液

chomatisの

性例 にお

当量 に て 再 検 す

陽 性 と 判 定 さ れ た59例 出 用DNA溶

用 い て9例,さ

液1μlを

を検

用 い て48

ら に0.04μlを

用 いて

増 幅 を 認 め た.陰 性 例 に お い て は,

3濃 度 に お い て い ず れ もDNAの

増幅 を認め てい

な い が,さ

減 量が必要 で あ

る か,あ

ら にtemplateDNAの

る い は 逆 にtemplateDNAの

増量 が必要

が あ る か に つ い て は 今 後 検 討 す る 必 要 が あ る と思 わ れ た 、し か し,尿 道 擦 過 物 のChlamydiazyme陽 感染 症 学 雑誌

第66巻

第7号

PCRに

よ る初 尿 か らの ク ラ ミジ ァの検 出

性 症 例 か ら の 初 尿 を 用 い た 検 出 例 で は,す PCRが

陽 性 で あ っ た.Chlamydiazyme陰

中38例

は 尿 に お い て もPCR陰

一 致 率 は90 .7%

(88/97)と

今 回 の 検 討 方 法 は,臨

べ て

康 久, 江 崎 孝 行, 斉 藤 chain

性47例

性 で あ り,全

reaction法

功, 河 田 幸 道:

Polymerase

に よ るChlamydia

検 出 の 基 礎 的 検 討.

体 の

高 率 で あ っ た こ と か ら,

835

感 染 症 誌,

tmchomatis

65:

1183-1187,

1991. 4)

出口

隆,

山 本 啓 之,

正 義, 前 田 真 一,

床 上 ク ラ ミジ ア性 尿 道 炎 の

河 田 幸 道:

診 断 に 十 分 に 応 用 可 能 な 方 法 と 判 断 さ れ た.

岩 田 英 樹,

伊 藤 康 久,

小 野 一 徳, 斉 藤

Polymerase

玉木

功, 江 崎 孝 行,

chainreaction法

に よる

男 子 尿 道 炎 患 者 の 尿 道 擦 過 材 料 か ら の

現 在 は 初 尿 の 沈 渣 をproteinase

Kで

処 理 し,さ

Chlamydia

ら に フ ェ ノ ー ル 抽 出 し た 後,PCRのtemplate DNAと

し て お り,操

作 が 煩 雑 で あ る.PCRに

抑

制 が か か る 場 合 に ど の 程 度 ま でtemplate 量 を 希 釈 す る か,ま

たPCR法

DNA

今 回 の 検 討 か らtemplateDNAの よ り,初

尿 か ら もPCRに

検 出 は 可 能 で あ り,尿

か し な が ら, 純 化 と減 量 に

道 擦 過 物 を用 い た 検 出法 に

比 し て も優 れ た 検 出 成 績 で あ る こ と が 示 さ れ た. 調 整 法 お よ びPCRの

適 条 件 な ど の 工 夫 に よ り,よ 感 度 のPCRに 開 発 さ れ,尿

検 出方法 が

道 擦 過 物 採 取 の よ うに患 者 に 苦 痛 を

与 え る こ と 無 く,尿 chomatisの

至

り簡 便 か つ 迅 速 で 高

よ るCtmchomatisの

を 検 出 材 料 と しC.

検 出 が 可 能 と な り,臨 床 上,ク

tra. ラ ミジ

ア 性 尿 道 炎 の有 用 な診 断方 法 と な る もの と期 待 さ れ る. 文

献

1) 加 藤 直 樹, 伊 藤 康 久, 出 口 人,

河 田 幸 道,

酒 井 俊 助,

西 浦 常 雄,

松 田 聖 士:

隆, 兼 松 鄭

漢 彬,

Chlamydia

尿 道 炎 患 者 か ら の 分 離.

感 染 症 誌,

稔, 坂

義

土 井 達 朗,

trachomatisの 58:

29-38,

1984.

2) Saiki, R. K., Golfando, D.H., Stoffel, S., Scharf, S. J., Higuchi, R., Horn, G.T., Mullis, K. B. & Erlich, H.A.: Primer directed ezymatic amplificaion of DNA with a therm ostable DNA polymerase. Science, 239: 487-491, 1988. 3) 出 口

隆, 山本啓 之, 岩 田英 樹, 山 本直 樹, 伊 藤

平成4年7月20日

隆,

山 本 啓 之,

功,

感 染 症 誌,

多 田 晃 司,

江 崎 孝 行,

Polymerase

岩 田 英 樹,

義 人, 玉 木 正 義,

か ら のChlamydia

よ りCtmchomatisの

今 後,templateDNAの

出 口

斉藤

はcontamination

くつ か の 課 題 を 残 し て い る.し

5)

検 出.

65:

1991.

尚 生, 伊 藤 康 久, 坂

に よ る偽 陽 性 の 危 険 が い つ もつ き ま と う こ と な ど,い

tmchomatisの

1555-1559,

河 田 幸 道: tmchom

chain

男子 尿 道 炎患 者

atis検

reaction法

(ChlamydiazymeTM)と

米田

前 田 真 一,

出 に お け る

と酵 素 抗 体 法

の 比 較.感

染 症 誌,印

刷中

6) Stehens, R. S., Mullenbach, M., SanchezPescador, R. & Agabian, N.: Sequence analysis of the major outer membrane protein gene from Chlamydia trachomatis serovar L2. J . Bacteriol., 168: 1277-1282, 1988. 7) Bobo, L., Coutlee, F., Yolken, R. H., Quinn, T. & Viscidi, R. P.: Diagnosis of Chlamydia trachomatis cervical infectoin by detection of amplified DNA with an enzyme immunoassay. J. Clin. Microbiol., 28: 1968-1973, 1990. 8) Harju, L., Janne, P., Kallio, A., Laukkanen, M ., Lautenschlager, I., Mattinen, S., Ranki, A., Ranki, M., Soares, V.R. X., Soderlund, H. & Syvanen, A.: Affinity-based collection of amplified viral DNA: Application to the detection of human immunodeficiency virus type 1, human cytomegalovirus and human papillomavirus type 16. Mol. Cell Probes., 4: 223 -235

, 1990.

9) De Franchis, Cox,

R., Cross, N. C. P., Foulkes,

T. M.:

A

potent

inhibitor

N. S. & of

Taq

polymerase copurifies with human genomic DNA. Nucletic Acids. Res., 16: 10355, 1988. 10) Chien, A., Edgar, ibonucleic thermophile

acid

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thermus

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1976.

J. M.:

from

aquaticus.

Deoxyr-

the extreme J. Bacteriol.,

836

米田

尚生 他

Detection of Chlamydia trachomatis in First-Voided Urine Sediments from Male Urethritis by Polymerase Chain Reaction Hisao KOMEDA1),Takashi DEGUCHI1),Hiroyuki YAMAMOTO2),Hideki IWTA1, Yasuhisa ITO1>,Akihiro SAITO1),Yoshito BAN1>,Masayoshi TAMAKI3), Shin-ichi MAEDA3),Isao SAITO4),Takayuki EZAKI2? & Yukimichi KAWADA1 'Department of Urologyand 2)Department of Microbiology , GifuUniversitySchoolof Medicine, 3)Departmentof Urology,ToyotaMemorialHospital,oDepartmentof Urology,TokyoKyosaiHospital Chlamydia trachomatis was detected from first-voided urine sediments of 97 male patients with urethritis by polymerase chain reaction (PCR). Since urine and urinary sediments only treated with proteinase K inhibited DNA amplification by PCR, DNA was further purified by phenol extraction and concentrated. Two oligonucleotides based on sequences within the major outer membrane gene from C. trachomatis serovar 1,2were used as primers. A DNA fragment of 242 bp specific for C. trachomatis was amplified by PCR and detected by agarose gel electrophoresis. The DNA fragment was amplified by PCR in all specimens of urine sediments from 50 patients with Chlamydiazyme-positive urethral swab. In 38 specimens of urine sediments from 47 patients with Chlamydiazyme-negative urethral swab, PCR was negative. The overall coincidence rate between the PCR for detecting C. trachomatis in first-voided urine sediments and Clamydiazyme in urethral swab was 90.7%(88/97). Detection of C. trachomatis from first-voided urine sediments by PCR was considered to be noninvasive and useful for the diagnosis of male urethritis due to C. trachomatis.

感 染症 学 雑 誌

第66巻

第7号