Acta Clinica Belgica International Journal of Clinical and Laboratory Medicine
ISSN: 1784-3286 (Print) 2295-3337 (Online) Journal homepage: http://www.tandfonline.com/loi/yacb20
La Thrombose Arterielle: Interactions Entre La Paroi Artérielle, Les Plaquettes Et Les Protéines Plasmatiques R.H. Bourgain, P. Potvliege, E. Derwael & F. Six To cite this article: R.H. Bourgain, P. Potvliege, E. Derwael & F. Six (1975) La Thrombose Arterielle: Interactions Entre La Paroi Artérielle, Les Plaquettes Et Les Protéines Plasmatiques, Acta Clinica Belgica, 30:3, 159-166, DOI: 10.1080/17843286.1975.11716991 To link to this article: http://dx.doi.org/10.1080/17843286.1975.11716991
Published online: 21 May 2016.
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Date: 01 September 2017, At: 11:33
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LA THROMBOSE ARTERIELLE : INTERACTIONS ENTRE LA PAROl ARTERIELLE, LES PLAGUETIES ET LES PROTEINES PLASMATIQUES
Downloaded by [Australian Catholic University] at 11:33 01 September 2017
R.H . BOURGAIN, P. POTVLIEGE, E. DERWAEL, F. SIX
INTRODUCTION
II est ad mis classiquement que Ia thrombose arterielle diflere de Ia thrombose veineuse aussi bien dans sa form ation que dans sa composition . En effet, on a constate ou plut6t admis de longue date que Ia thrombose arterielle est constituee surtout de plaq uettes et dans une moindre mesure de fibrin e et de leucocytes, alors qu'une thrombose veineuse ressemble davantage a un caillot sanguin superposable a une coagulation in vitro. L'investigation dans ce do maine a toujours ete difficile pour deux raiso ns.
La premiere II est difficile d'avoir chez l'homme pour I' etude du thrombus d'autres moyens d'i nvestigation que des resultats biopsiques, done autopsiques ou per-operatoires. Les autres procedes sont indirects et explorent surtout les consequences d'une thrombose. Parmi ces techniques l' ECG , l'EEG, le scanning pulmonaire et renal ainsi que quelques tests hematologiques sont les plus freq uemment utilises. La deuxieme La seule possibilite d'aborder l'etude du mecanisme intime de Ia thromboformation reste !'experimentation ani male; or, dans ce domaine, de tres nombreuses methodes ont ete publiees, mais a notre connaissance aucune n'a pu reunir -'
* Laboratorium voor Fysiologie en Fysiopathologie. Ex perimentcle Pat hologic en Pathologische Anatomic. Vrije Universi teit Brussel, Eversstraat 2, B-1000 Brussel.
les ci nq criteres majeurs requis pour une standardisation , voire Ia sensibilite, Ia reprod uctibilite, le moyen de quantifier et eventuellement l'au tomatisation et Ia mise sur ordinateur apres programmation appropriee. METHODOLOGIE
Nous avo ns mis au point au laboratoire une methode de thrombose experimentale dans l'artere mesenterique du rat qui satis fait aux cinq criteres de standardisation. Apres extraction d'une anse grele on disseque une artere mesenterique de diametre variant entre 200 a 30011 sur une longueur de 2 mm . On applique ensuite sur Ia paroi de l'artere une electrode en piatine isolee sauf a Ia pointe (20 f.1 diametre) par micro manipulation et on fait passer un courant direct de 300 /tA pendant une minute en in versant Ia polarite du courant toutes les cinq secondes. L'in version du courant permet d'eviter tout phenomene vasomoteur. Apres une periode de repos de di x minutes, on perfuse Ia preparation au moyen d'une solution d' ADP a 200 rtM pendant trois minutes . II se form e a l'endroit ou le courant fut applique un thrombus blanc qui croit progressivement et atteint un maximum ava nt Ia fin de ('application de I'A DP. Ce thrombus disparait par frag mentation et embolisation peripherique dans les deux minutes qui sui ve nt !'arret de !'administration de I' ADP. Des concentrations plus elevees d'A DP permettent d'obtenir des thrombi plus volumineux; cependant, le phenomene reste reversible, c'est-a-dire Ia thrombose disparait toujours apres l'arret de I'ADP. Acta Clinica Belgica. 30, 3 (1 975)
INTERACTION PAROl ARTER/ELL£, PLAQUETTES ET PLASMA
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PERFUSION
D···LDR 1-·
ADP
• Downloaded by [Australian Catholic University] at 11:33 01 September 2017
LOR-SET
l~:'~2. -t-t : .:.:. _ _ _ _ _ ,_ __
Fig. 1- Vue sur /'ensemble experimental. La projection de /'artere se fait sur Ia rangee des LDR, /'axe longitudinal du vaisseau correspondant avec /'axe longitudinal de /'ensemble des LDR. Le procede du multiplexing permet 'Ia lecture de chacun des trente canaux pendant 1 /90()e de seconde. Comme le signal de synchronisation a une frequence de 30/seconde, chaque sortie est lue 30fois par seconde. L 'integrateur CL.) est connecte a un enregistreur direct qui permet de suivre Ia thromboformation.
A ce moment, il nous a paru important de quantifier le phenomene. Ceci a ete realise par une technique de microprojection sur une serie de 30 LOR (Light Depending Resistances) disposes en deux rangees serrees l'une contre I' autre, constituees de 14 elements chacune avec un LDR au-dessus et un autre en dessous de cet ensemble (fig. 1). Chaque LOR a Ia forme d'un carre qui mesure 25 mm 2• L'image de l'artere est projetee sur ces LOR de telle fa~on que le diametre interne du vaisseau cotivre le bord externe des LDR. Un dispositif correcteur electronique y est adapte enfin de donner a !'image Ia stabilite requise. Acta C/inica Belgica, 30, 3 (1975)
Chaque LOR est connecte dans son pont de Wheatstone propre, ce qui fait 30 canaux de sortie. Comme un LOR change sa resistance interne en fonction des variations d'intensite Jumineuse !'apparition d'un thrombus blanc dans le seg~ ment vasculaire projete sur les LOR provoquera sur les LOR correspondants des variations de leur resistance qui sont enregistrees comme des variations de potentiels (mVolts). Les trente canaux sont Ius par un procede de multiplexing qui fait que chacun est lu tous les 1/9()()e de seconde, done trente fois par seconde. En un premier temps, les signaux sont sommes e~ le resultat est enregistre sur un inscripteur dtrect. En outre, les trente canaux sont mis sur oscilloscope, ce qui permet a l'experimentateur d'avoir constamment !'image de Ia thromboformation sous les yeux . Les trente signaux analogiques sont convertis par un convertisseur analogique digital et traites par ordinateur. II est ainsi possible de calculer differents parametres tels que Ia «valeur globale du thrombus» (TTR), Ia surface globale du thrombus, Ia duree, etc. Comme on peut induire un thrombus a volonte dans cette artere, il nous a paru interessant d'en faire !'etude au microscope electroni-
INTERACTION PAROl ARTER/ELL£. PLAQUETTES ET PLASMA
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que, ceci dans le but d'elaborer une correlation entre Ia fonction physiopathologique et l'image microscopique.
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RESULTATS
/. Anatomopatho/ogiques La lesion provoquee par le courant electrique est specifique et localisee (fig. 2). En effet, I' on constate sur les images au microscope electronique un soulevement de Ia cellule endotheliale de Ia membrane basale et eventuellement Ia disparition de cette cel lule probablement par necrose laissant cette membrane basale exposee aux composantes du sang circulant. Dans Ia tunique musculaire du vaisseau tes lesions sont moins constantes et mains etendues. Les plaquettes du thrombus qui adherent aIa paroi vasculaire peuvent etre en contact direct avec Ia membrane basale denudee, mais egalement avec les cellules endotheliales precisement Fig. 3 - Bard du thrombus en contact avec le courant sanguin otl un e1ythrocyte est visible. Les piaqueues de fa peripherie ont subi une cytolyse et une degranulation . Leur agregation est compacte, membrane contre membrane.
Fig. 2- Soulevement de /'extremite d'une cellule endothe/ia/e et adhesion des plaquettes aIa membrane basale..- Le noyau de Ia cellule est allonge et ne montre plus d'indentations normalement presentes.
au niveau des discontinuites dans leur membrane cellu laire. Ces plaquettes subissent des modifications importantes telles que de Ia degranulation et l'emission de pseudopodes; en outre, elles sont en contact etroit les unes avec les autres. Entre ces plaquettes en contact avec Ia paroi et d'autres plaquettes il y a une cohesion/agregation qui fin it par constituer le veritable thrombus blanc qui fait saillie dans Ia lumiere vasculaire et peut de ce fait devenir occlusif. Les plaquettes de Ia peripherie (fig. 3) du thrombus sont en general le siege de degranulation , vascuolisation et cytolyse avec disparition des structures membranaires . Par contre, les plaquettes a l'interieur de Ia masse du thrombus sont moins degranulees et gardent une membrane pratiquement intacte. Entre Ia membrane des plaquettes en contact direct les unes avec les autres apparaissent des Acta Clinica Be/gica, 30, 3 (19 75)
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INTERACTION PAROl ARTER/ELL£, PLAQUETTES ET PLA SM A
Fig. 4- Plaquettes en contact direct. Apparition de structures perpendiculaires aleur paroi sousjorme de stries.
structures en forme de strie (fig. 4), perpendicuJaires a Ia surface et de dimension variant entre 500 et 600 A. L'extremite du thrombus face au courant sanguin n'est pas en contact direct avec Ia paroi vasculaire. Chez Jes animaux ayant re~u une injection intraveineuse de defibrase, une enzyme du type thrombique, Ia constitution du thrombus induit est nettement differente (fig. 5). II est constitue d'un amas de proteines, probablement des monomeres de fibrine englobant les plaquettes qui res tent adistance J'une de J'autre, presentent des pseudopodes, mais ne montrent ni degranulation ni vacuolisation. Cependant, Jes plaquettes en contact avec Ia paroi vasculaire presentent les memes modifications que dans le cas d'un thrombus induit en !'absence de defibrase. Quelques petites formations de fibrine sont parfois visibles surtout au voisinage de Ia paroi. Les erythrocytes ne sont pas incorpores dans Je thrombus; toutefois, autour de ce dernier, Jes globules rouges ont tendance a sa mettre en «rouleaux». Acta Cllnica Belgica, 30, 3 (1975)
Fig. 5 - Thrombus induit apres injection intraveineuse de defibrase. II n'y a plus de contact direct entre /es plaqueues. La lame elastique interne apparalt ici en blanc. Les plaquefles emettent cependant des pseudopodes et cel!es qui adherent aIa membrane basale sont en contact direct !'une avec !'autre. On note que !'endothelium a disparu.
Les leucocytes ne sont qu'exceptionnellement retrouves al'interieur de Ia masse du thrombus. 2. Mesures de Ia thrombojormation Le tableau I montre les resultats obtenus chez 5 animaux ou des thrombi ont ete induits successivement a 7 reprises en laissant un intervalle de 10 minutes entre Ia fin et le debut de !'induction du thrombus suivant. Comme on peut le constater, il existe une variation tres importante d'un animal a !'autre, mais chez chaque rat pris individuellement, les thromboformations successives ne sont pas tres differentes l'une de !'autre. Les tableaux II et III montrent le resultat de !'injection intraveineuse de 1000 u d'heparine a dix rats et une ampoule de defibrase a dix autres rats respectivement. Dans ces deux groupes on constate une diminution hautement significative de Ia thromboformation.
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INTERACTION PAROl ARTER/ELL£, PLAQUETTES ET PLASMA
Tablea u I
Tablea u Ill
Va /ew·s des TTR chez 5 aninwux
Valeur_\. des rhrn111hi aranr er apre.1· injection de di'fibrase 5
4
3
2
Rats
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9 10 10 II II II 10
570 890 590 130 130 DO 470
7 1 435 84 491 82 945 89 2 18 9 1 55 1 76 174 79 263
10 7 10 9 240 9 69 0 12 090 10 23 0 10 590 11 .0 10
27 27 27 28 24 32 30
33 1 559 194 4 84 694 547 550
8 8 9 9 8 10 9
10 70 1 M 82 153 M 10 50 8 M 28 337 M 927 S D 2 544 SD 7 109 S D 567 SD
280 880 090 450 580 23 0 480
9 14 1 M 648 SD
2 3 4 5 6 7
8
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LA THROMBOSE ARTERIELLE : INTERACTIONS ENTRE LA PAROl ARTERIELLE, LES PLAGUETIES ET LES PROTEINES PLASMATIQUES
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R.H . BOURGAIN, P. POTVLIEGE, E. DERWAEL, F. SIX
INTRODUCTION
II est ad mis classiquement que Ia thrombose arterielle diflere de Ia thrombose veineuse aussi bien dans sa form ation que dans sa composition . En effet, on a constate ou plut6t admis de longue date que Ia thrombose arterielle est constituee surtout de plaq uettes et dans une moindre mesure de fibrin e et de leucocytes, alors qu'une thrombose veineuse ressemble davantage a un caillot sanguin superposable a une coagulation in vitro. L'investigation dans ce do maine a toujours ete difficile pour deux raiso ns.
La premiere II est difficile d'avoir chez l'homme pour I' etude du thrombus d'autres moyens d'i nvestigation que des resultats biopsiques, done autopsiques ou per-operatoires. Les autres procedes sont indirects et explorent surtout les consequences d'une thrombose. Parmi ces techniques l' ECG , l'EEG, le scanning pulmonaire et renal ainsi que quelques tests hematologiques sont les plus freq uemment utilises. La deuxieme La seule possibilite d'aborder l'etude du mecanisme intime de Ia thromboformation reste !'experimentation ani male; or, dans ce domaine, de tres nombreuses methodes ont ete publiees, mais a notre connaissance aucune n'a pu reunir -'
* Laboratorium voor Fysiologie en Fysiopathologie. Ex perimentcle Pat hologic en Pathologische Anatomic. Vrije Universi teit Brussel, Eversstraat 2, B-1000 Brussel.
les ci nq criteres majeurs requis pour une standardisation , voire Ia sensibilite, Ia reprod uctibilite, le moyen de quantifier et eventuellement l'au tomatisation et Ia mise sur ordinateur apres programmation appropriee. METHODOLOGIE
Nous avo ns mis au point au laboratoire une methode de thrombose experimentale dans l'artere mesenterique du rat qui satis fait aux cinq criteres de standardisation. Apres extraction d'une anse grele on disseque une artere mesenterique de diametre variant entre 200 a 30011 sur une longueur de 2 mm . On applique ensuite sur Ia paroi de l'artere une electrode en piatine isolee sauf a Ia pointe (20 f.1 diametre) par micro manipulation et on fait passer un courant direct de 300 /tA pendant une minute en in versant Ia polarite du courant toutes les cinq secondes. L'in version du courant permet d'eviter tout phenomene vasomoteur. Apres une periode de repos de di x minutes, on perfuse Ia preparation au moyen d'une solution d' ADP a 200 rtM pendant trois minutes . II se form e a l'endroit ou le courant fut applique un thrombus blanc qui croit progressivement et atteint un maximum ava nt Ia fin de ('application de I'A DP. Ce thrombus disparait par frag mentation et embolisation peripherique dans les deux minutes qui sui ve nt !'arret de !'administration de I' ADP. Des concentrations plus elevees d'A DP permettent d'obtenir des thrombi plus volumineux; cependant, le phenomene reste reversible, c'est-a-dire Ia thrombose disparait toujours apres l'arret de I'ADP. Acta Clinica Belgica. 30, 3 (1 975)
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l~:'~2. -t-t : .:.:. _ _ _ _ _ ,_ __
Fig. 1- Vue sur /'ensemble experimental. La projection de /'artere se fait sur Ia rangee des LDR, /'axe longitudinal du vaisseau correspondant avec /'axe longitudinal de /'ensemble des LDR. Le procede du multiplexing permet 'Ia lecture de chacun des trente canaux pendant 1 /90()e de seconde. Comme le signal de synchronisation a une frequence de 30/seconde, chaque sortie est lue 30fois par seconde. L 'integrateur CL.) est connecte a un enregistreur direct qui permet de suivre Ia thromboformation.
A ce moment, il nous a paru important de quantifier le phenomene. Ceci a ete realise par une technique de microprojection sur une serie de 30 LOR (Light Depending Resistances) disposes en deux rangees serrees l'une contre I' autre, constituees de 14 elements chacune avec un LDR au-dessus et un autre en dessous de cet ensemble (fig. 1). Chaque LOR a Ia forme d'un carre qui mesure 25 mm 2• L'image de l'artere est projetee sur ces LOR de telle fa~on que le diametre interne du vaisseau cotivre le bord externe des LDR. Un dispositif correcteur electronique y est adapte enfin de donner a !'image Ia stabilite requise. Acta C/inica Belgica, 30, 3 (1975)
Chaque LOR est connecte dans son pont de Wheatstone propre, ce qui fait 30 canaux de sortie. Comme un LOR change sa resistance interne en fonction des variations d'intensite Jumineuse !'apparition d'un thrombus blanc dans le seg~ ment vasculaire projete sur les LOR provoquera sur les LOR correspondants des variations de leur resistance qui sont enregistrees comme des variations de potentiels (mVolts). Les trente canaux sont Ius par un procede de multiplexing qui fait que chacun est lu tous les 1/9()()e de seconde, done trente fois par seconde. En un premier temps, les signaux sont sommes e~ le resultat est enregistre sur un inscripteur dtrect. En outre, les trente canaux sont mis sur oscilloscope, ce qui permet a l'experimentateur d'avoir constamment !'image de Ia thromboformation sous les yeux . Les trente signaux analogiques sont convertis par un convertisseur analogique digital et traites par ordinateur. II est ainsi possible de calculer differents parametres tels que Ia «valeur globale du thrombus» (TTR), Ia surface globale du thrombus, Ia duree, etc. Comme on peut induire un thrombus a volonte dans cette artere, il nous a paru interessant d'en faire !'etude au microscope electroni-
INTERACTION PAROl ARTER/ELL£. PLAQUETTES ET PLASMA
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que, ceci dans le but d'elaborer une correlation entre Ia fonction physiopathologique et l'image microscopique.
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RESULTATS
/. Anatomopatho/ogiques La lesion provoquee par le courant electrique est specifique et localisee (fig. 2). En effet, I' on constate sur les images au microscope electronique un soulevement de Ia cellule endotheliale de Ia membrane basale et eventuellement Ia disparition de cette cel lule probablement par necrose laissant cette membrane basale exposee aux composantes du sang circulant. Dans Ia tunique musculaire du vaisseau tes lesions sont moins constantes et mains etendues. Les plaquettes du thrombus qui adherent aIa paroi vasculaire peuvent etre en contact direct avec Ia membrane basale denudee, mais egalement avec les cellules endotheliales precisement Fig. 3 - Bard du thrombus en contact avec le courant sanguin otl un e1ythrocyte est visible. Les piaqueues de fa peripherie ont subi une cytolyse et une degranulation . Leur agregation est compacte, membrane contre membrane.
Fig. 2- Soulevement de /'extremite d'une cellule endothe/ia/e et adhesion des plaquettes aIa membrane basale..- Le noyau de Ia cellule est allonge et ne montre plus d'indentations normalement presentes.
au niveau des discontinuites dans leur membrane cellu laire. Ces plaquettes subissent des modifications importantes telles que de Ia degranulation et l'emission de pseudopodes; en outre, elles sont en contact etroit les unes avec les autres. Entre ces plaquettes en contact avec Ia paroi et d'autres plaquettes il y a une cohesion/agregation qui fin it par constituer le veritable thrombus blanc qui fait saillie dans Ia lumiere vasculaire et peut de ce fait devenir occlusif. Les plaquettes de Ia peripherie (fig. 3) du thrombus sont en general le siege de degranulation , vascuolisation et cytolyse avec disparition des structures membranaires . Par contre, les plaquettes a l'interieur de Ia masse du thrombus sont moins degranulees et gardent une membrane pratiquement intacte. Entre Ia membrane des plaquettes en contact direct les unes avec les autres apparaissent des Acta Clinica Be/gica, 30, 3 (19 75)
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Fig. 4- Plaquettes en contact direct. Apparition de structures perpendiculaires aleur paroi sousjorme de stries.
structures en forme de strie (fig. 4), perpendicuJaires a Ia surface et de dimension variant entre 500 et 600 A. L'extremite du thrombus face au courant sanguin n'est pas en contact direct avec Ia paroi vasculaire. Chez Jes animaux ayant re~u une injection intraveineuse de defibrase, une enzyme du type thrombique, Ia constitution du thrombus induit est nettement differente (fig. 5). II est constitue d'un amas de proteines, probablement des monomeres de fibrine englobant les plaquettes qui res tent adistance J'une de J'autre, presentent des pseudopodes, mais ne montrent ni degranulation ni vacuolisation. Cependant, Jes plaquettes en contact avec Ia paroi vasculaire presentent les memes modifications que dans le cas d'un thrombus induit en !'absence de defibrase. Quelques petites formations de fibrine sont parfois visibles surtout au voisinage de Ia paroi. Les erythrocytes ne sont pas incorpores dans Je thrombus; toutefois, autour de ce dernier, Jes globules rouges ont tendance a sa mettre en «rouleaux». Acta Cllnica Belgica, 30, 3 (1975)
Fig. 5 - Thrombus induit apres injection intraveineuse de defibrase. II n'y a plus de contact direct entre /es plaqueues. La lame elastique interne apparalt ici en blanc. Les plaquefles emettent cependant des pseudopodes et cel!es qui adherent aIa membrane basale sont en contact direct !'une avec !'autre. On note que !'endothelium a disparu.
Les leucocytes ne sont qu'exceptionnellement retrouves al'interieur de Ia masse du thrombus. 2. Mesures de Ia thrombojormation Le tableau I montre les resultats obtenus chez 5 animaux ou des thrombi ont ete induits successivement a 7 reprises en laissant un intervalle de 10 minutes entre Ia fin et le debut de !'induction du thrombus suivant. Comme on peut le constater, il existe une variation tres importante d'un animal a !'autre, mais chez chaque rat pris individuellement, les thromboformations successives ne sont pas tres differentes l'une de !'autre. Les tableaux II et III montrent le resultat de !'injection intraveineuse de 1000 u d'heparine a dix rats et une ampoule de defibrase a dix autres rats respectivement. Dans ces deux groupes on constate une diminution hautement significative de Ia thromboformation.
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Tablea u I
Tablea u Ill
Va /ew·s des TTR chez 5 aninwux
Valeur_\. des rhrn111hi aranr er apre.1· injection de di'fibrase 5
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9 10 10 II II II 10
570 890 590 130 130 DO 470
7 1 435 84 491 82 945 89 2 18 9 1 55 1 76 174 79 263
10 7 10 9 240 9 69 0 12 090 10 23 0 10 590 11 .0 10
27 27 27 28 24 32 30
33 1 559 194 4 84 694 547 550
8 8 9 9 8 10 9
10 70 1 M 82 153 M 10 50 8 M 28 337 M 927 S D 2 544 SD 7 109 S D 567 SD
280 880 090 450 580 23 0 480
9 14 1 M 648 SD
2 3 4 5 6 7
8
